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一种单抗制品理论消光系数与实验确证结果的比较
目的 本实验通过3种实验方法对1种单抗的消光系数进行实验确证并与理论消光系数进行比较研究.方法 根据氨基酸一级序列,计算出单抗在280 nm处的理论摩尔消光系数,通过质谱确定单抗相对分子质量,计算出理论消光系数;分别用3种方法测定单抗的蛋白质浓度,根据朗伯-比尔定律c=A/EL计算实验消光系数.方法一为利用尿素变性蛋白测定其非折叠状态(变性状态)的实验消光系数,计算得出折叠状态(天然状态)的消光系数;方法二通过酸水解蛋白,结合AccQ Fluor试剂盒利用HPLC对蛋白进行准确定量,计算该抗体的实验消光系数;方法三通过酸水解蛋白,利用氨基酸序列分析仪对蛋白进行准确定量,计算蛋白的实验消光系数.结果 理论消光系数E280为1.453 mL·mg-1 ·cm-1;3种实验方法确定的单抗消光系数分别为(1.442±0.009)、(1.529±0.032)、(1.458±0.019) mL·mg-1·cm-1,均值为(1.477±0.044)mL· mg-1·cm-1,RSD =2.979％ (n =9).研究结果显示,该单抗的理论消光系数与实验消光系数的差异较小(0.069％ ～7.708％).结论 本实验运用3种方法确证单抗的实验消光系数,所建立的消光系数测定和验证方法可用于抗体药物蛋白含量的测定.
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紫外法测定重组人红细胞生成素（Fc）融合蛋白的含量
目的：建立紫外法测定重组人红细胞生成素（Fc）融合蛋白（rhEPO-Fc）含量的方法。方法利用Edelhoch法测定rhEPO-Fc的摩尔消光系数，计算得到其溶液百分比消光系数，并测定rhEPO-Fc溶液A280值，依据公式c=A/ε计算rhEPO-Fc的含量。结果 rhEPO-Fc溶液百分比消光系数为1.3，在0.02~1.28 mg/mL浓度范围内，测定含量结果偏差＜4%。结论该方法操作简便、专属性强、结果准确可靠，可用于rhEPO-Fc含量测定。
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利用全内反射法测量猪肝脏和猪大肠黏膜组织的折射率和消光系数
目的 通过猪肝脏、大肠获得生物组织的基本光学参数折射率和消光系数.方法 健康家猪1只,雄性,猪龄12个月,体质量约50 kg.利用导数全内反射法、反射曲线的单参数拟合法及多组分分析法的综合方法获得猪肝脏和猪大肠黏膜组织的折射率和消光系数.结果 测得的肝脏外表面(被膜)折射率为1.393;通过单参数拟合得到的折射率的虚部(对应于消光系数)为k=0.002 6,拟合度为0.994.测量的肝组织内部折射率为1.383;利用单参数拟合法得到的折射率虚部(对应于消光系数)为k=0.005 6,拟合度为0.974.未经处理的猪大肠黏膜组织出现2个导数峰;导数曲线峰1位于52.31°,对应折射率为1.371,导数曲线峰2位于57.11°,对应折射率为1.455,刮去了表面的脂肪层的大肠黏膜组织折射率为1.371;利用单参数拟合法得到的消光系数k=0.0044,拟合度为0.963.结论 得到的结果为生物组织的光学性质研究和应用提供了可靠的数据.
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单克隆抗体消光系数测定方法的建立
目的 建立单克隆抗体药物消光系数测定方法,用于单克隆抗体药物的鉴别和紫外分光光度法的定量分析,并对其进行初步评价.方法 使用6 mol/L盐酸胍对抗体进行变性处理,打开抗体折叠的高级结构,将其当作是色氨酸、酪氨酸和“S-S”键的三元体系,通过检测相同浓度下折叠和非折叠抗体在紫外280 nm波长处的吸光值,计算抗体的消光系数,并进行方法的精密度验证.结果 两种单克隆抗体mAb1和mAb2在280 nm波长处的消光系数平均值分别为1.702和1.387 mL/(mg·cm);两位实验员检测的消光系数各自相对标准偏差分别为0.48％和0.87％,总相对标准偏差为0.69％,均小于1％,表明方法精密度良好.结论 建立的方法操作简单,不依赖于抗体浓度,不破坏其二硫键结构,结果准确,可用于单克隆抗体药物消光系数的测定.
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重组蛋白类药物蛋白含量测定方法研究进展
如何实现蛋白药物的准确定量一直是生物技术药物质量控制中的重要课题.本文将蛋白含量测定方法系统地分成3类:标准定量法、比色分析法以及紫外吸收法,并对每种方法如何实现准确定量分别进行阐述.此外,本文还提出一种测定抗体药物偶联物中蛋白含量的方法,为该种重组蛋白类药物蛋白含量的准确测定提供了参考.
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Glucose-HK法检查及校正AU400的线性度和分光精度
在分光光度计中,正常分光性能的两个重要参数是精度和线性度,由于各类仪器在安装、使用一段时间后或由于环境因素的改变,不可避免的会引起仪器的分光性能发生改变,故需对仪器的分光性能经常进行检查及校正,一般为半年校正一次.我市计量局每年对检验科721比色计、天平等进行一次强检,在仪器上贴上使用许可证方可使用,但对我科引进的大型生化分析仪,由于设备和技术等原因,无能为力.为此我们根据Glucose-HK法(已糖激酶法测定葡萄糖)检验时能产生NADH,后者在340nm具有特定的消光系数,可以指定所有条件,可在观察之前计算吸收率的理论变化(即理论系数)将理论值和观察值进行比较,两者之间的差别(如有的话)可作为检查分光光度计分光性能的相对标准.现介绍如下.
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ALT单一酶试剂校正仪器NADH 340 nm消光系数
用ALT单一酶试剂以酶促反应的产物丙酮酸为标准校正仪器NADH在340 nm和340/405 nrn消光系数ε,并同时与用葡萄糖为标准的传统方法作对照,两种方法结果相近,可互相替代.
