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F344大鼠4种饮用水饲养2年实验病理学观察
目的 观察F344大鼠在自然生存状态下常年饮用天然矿泉水、自来水、纯净水和矿物质水等4种饮用水对其生存寿命、疾病发生率、死亡率等指标的影响,为GLP条件下动物饲养用水选择和动物自发病变的研究提供背景数据.方法 SPF级8周龄F344大鼠336只,雌雄各半,随机分为4组,分别饮用天然矿泉水、自来水、纯净水和矿物质水4种饮用水,每组84只动物.实验开始后第6个月、12个月、18个月和24个月每组分别活杀8、16、16和44只动物,称重动物心脏、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、肾上腺、睾丸(或卵巢)、附睾(或子宫)和脑等脏器并计算脏器系数,常规病理学取材、制片后显微镜检查,比较各组动物在4个时间点发生病变的类型和发病率.结果 各组动物发病以F344大鼠常见的自发性病变为主,包括非增殖性病变和增殖性病变.主要的非增殖性病变包括心脏乳头肌纤维化,肺细支气管旁慢性炎症,肾脏肾小管扩张、蛋白管型、肾小管萎缩和钙沉积等,生殖器官退行性改变等;高发的肿瘤性病变主要包括睾丸间质细胞瘤、垂体腺瘤、单核细胞白血病、皮下纤维瘤、乳腺纤维腺瘤、嗜铬细胞瘤等.各组动物上述病变类型及发病率、生存时间、死亡率等指标比较均未见明显差异.结论 天然矿泉水、自来水、纯净水和矿物质水等4种饮用水对F344大鼠生存时间、死亡率、自发病变类型与发生率没有影响.本研究为了解不同饮用水对实验动物的影响提供了参考,丰富了F344大鼠自发病变的病理学数据积累.
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基于RNA测序的尼古丁影响下大鼠前额叶皮质的基因表达分析
目的：研究尼古丁处理对大鼠前额叶皮质（PFC）中基因表达的影响。方法24只F344大鼠随机分为实验组和对照组，每组12只，分别注射尼古丁水溶液或生理盐水17 d。药物处理结束后，从每只大鼠大脑采集PFC组织。然后采用RNA测序（RNA-Seq）技术对24只大鼠大脑PFC区域的mRNA进行测序，测出的读段利用Bowtie、Tophat及Cufflinks等生物信息学工具比对到参考基因组上并测量转录子表达水平。随后采用统计学方法确定表达水平在实验组和对照组发生显著变化的基因，并进一步分析了这些基因的功能类别及与其相关的生化通路。结果通过分析每个转录子在处理组和对照组的表达水平，确定了在尼古丁影响下的表达水平发生显著变化的基因885个。在这些基因中，与多个Gene Ontology生物学过程如G蛋白偶联受体信号通路、蛋白质泛素化和神经递质吸收等，以及生化通路如胰岛素信号、阿尔茨海默病和长时程增强等相关的基因均显著富集。结论尼古丁处理可能调节大脑PFC区域神经信号传导和能量代谢等生物学过程。
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近交系大鼠小肠移植模型排斥反应的动态观察
目的:动态观察近交系大鼠小肠移植排斥反应发生规律,探讨该模型对小肠移植排斥反应研究的价值.方法:选用近交系大鼠F344(RT11)和BN(RT1n),根据改良Monchik法建立下腔静脉回流式异位全小肠移植模型.实验分为同系移植组(F344→F344,ITx组)和同种移植组(BN→F344,ATx组),每组各制作实验模型8只.结果:①ITx组大鼠平均生存期30d以上,ATx组大鼠平均存活12d.②ITx组大鼠术后各时点的大体观察无明显差异,而移植小肠病理组织学POD 3d呈非特异性炎症反应表现,POD 0、5、7、9d 与正常小肠的组织学特征基本相同.③IL-2Rα和γ-INF mRNA转录水平显著性改变早于排斥反应的病理诊断.④ATx组在POD 5、7、9d的大体表现与组织病理改变分别符合轻、中、重度排斥反应的诊断标准.结论:近交系大鼠BN→F344与近交系大鼠F344→Wistar适用于小肠移植排斥反应实验研究.
关键词： 小肠·器官移植·排斥反应·大鼠 近交BN·大鼠 近交F344 -
纳米联合光动力治疗在卵巢癌中的应用
目的：探讨载药纳米粒联合光动力治疗应用于大鼠卵巢癌腹水瘤模型治疗的疗效。方法：制备包裹竹红菌乙素( HB)的聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒( PBCA-NP)及建立Fischer 344大鼠卵巢癌腹水瘤模型。大鼠腹腔注射HB的DMSO溶液及HB-PBCA-NP溶液，观察不同药物剂型在大鼠体内分布，得到竹红菌乙素及竹红菌乙素纳米粒的药物动力学参数。将荷瘤大鼠随机分成4组：对照组未给予任何处理，手术组只接受手术治疗，实验组分别给予HB溶液及其纳米粒溶液，并接受手术及光动力治疗，观察生存时间。结果：纳米粒稳定，可用于体内实验。血清及肿瘤组织中，纳米粒组药物浓度达高峰的时间明显延迟。手术联合光动力治疗中位生存时间(95天和99天)比单纯手术(84天)长，可延长生存时间(P<0.05)。结论：纳米粒可使药物在体内达到缓释，手术联合光动力治疗可延长生存时间。
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光动力学治疗卵巢癌的体外实验研究
目的:探讨血卟啉单甲醚(HMME)光动力治疗卵巢癌的体外治疗效果.方法:不同浓度(0～20μg/ml)HMME联合不同能量激光(0～6J/cm2)处理大鼠上皮性卵巢癌细胞株NuTu-19细胞后,MTT比色法检测细胞存活率;Annexin V/PI双染色,流式细胞仪分析细胞死亡方式.结果:HMME无暗毒性,随着药物浓度与激光剂量的增加,细胞存活率逐渐下降,大剂量可取得完全杀伤的效果,细胞死亡方式以坏死为主.结论:HMME对卵巢癌细胞具有明确的体外光动力学杀伤效应.
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紫杉醇纳米粒腹腔给药治疗大鼠卵巢癌的初步研究
目的:研究紫杉醇纳米粒腹腔给药对大鼠卵巢癌的治疗效果,初步探讨其作用机制.方法:用超声乳化法制备紫杉醇纳米粒;用MTT法测定紫杉醇纳米粒对NU-TU19细胞增殖的抑制率;荷瘤鼠腹腔给药,比较其荷瘤量及腹水量;用HE染色研究肿瘤浸润;(5)流式细胞仪研究肿瘤细胞周期分布与凋亡.结果:(1)紫杉醇纳米粒粒径200nm,包封率70%;(2)紫杉醇纳米粒及市售紫杉醇IC50分别为98.50±1.55ng/ml,97.95±1.48ng/ml,差异无统计学意义(P>0.05);(3)紫杉醇纳米粒治疗组动物荷瘤量及腹水量分别为4.56±0.11g,3.55±0.50ml,市售紫杉醇为10.13±0.52g,30.45±1.55ml,差异有统计学意义(P<0.01);(4)HE染色结果显示,纳米粒组肿瘤细胞核分裂相少见,且不侵犯淋巴结;(5)纳米粒组肿瘤细胞凋亡率为(36.51±0.42)%,市售紫杉醇组为(20.63±0.11)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论:低剂量紫杉醇纳米粒腹腔给药安全,治疗卵巢癌有较好效果.
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大鼠骨髓树突状细胞的分离和培养
目的:探讨体外分离和培养大鼠源性树突状细胞的方法,及其经卵巢肿瘤提取物致敏后在体内诱发抗肿瘤免疫效应.方法:(1)取大鼠骨髓悬液,经Tris-NH<,4>Cl裂解红细胞后得到大鼠骨髓单个核细胞;(2)应用大鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、大鼠重组白细胞介素4(rrIL-4)、大鼠重组肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)进行体外培养;(3)培养第5天时加入NuTu-19 Fischer 344大鼠卵巢肿瘤细胞提取物,获得负载卵巢肿瘤提取物的树突状细胞;(4)体内实验检测DC诱发抗肿瘤免疫效力.结果:(1)大鼠骨髓来源的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)在相关细胞因子作用下可培养出成熟的树突状细胞;(2)体内实验表明,预先免疫的大鼠肿瘤出现时间较晚,肿瘤生长速度较慢,与对照组有显著差异(P<0.05),抑瘤率59.4%;治疗组大鼠在实验过程中肿瘤体积小,终肿瘤质量轻,与对照组有显著差异(P<0.05),与先行免疫组无明显差异(P>0.05),抑瘤率69.3%.结论:大鼠骨髓来源的BMMNC可培养出成熟的树突状细胞.DC可负载并提呈肿瘤提取物,体内实验显示肿瘤提取物致敏的树突状细胞可以杀伤肿瘤细胞.
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树突细胞疫苗诱发抗肿瘤免疫特异性的体内研究
目的:探讨卵巢肿瘤提取物负载的树突细胞(DC)体内诱发抗肿瘤免疫效应的特异性.方法:应用rrGM-CSF(终浓度40ng/ml)、rrIL-4(终浓度40ng/ml)及rrTNF-α(终浓度40ng/ml)体外培养Fischer344大鼠骨髓来源的单个核细胞,于培养第12天通过流式细胞仪检测细胞标志CD86、OX62抗原,用电镜观察细胞形态,证实获得树突细胞.分别利用NuTu-19卵巢肿瘤细胞和CBRH-7919大鼠肝癌细胞肿瘤提取物制备肿瘤抗原致敏Fischer344大鼠骨髓来源的树突细胞,得到两种肿瘤DC疫苗,即NuTu-DC和CBRH-DC.体内试验:Fischer344大鼠随机分为3组(1)对照组;(2)NuTu-DC治疗组;(3)CBRH-DC治疗组.于大鼠皮下接种NuTu-19细胞,5天后出瘤,开始于肿瘤接种对侧接种DC疫苗,每隔1周给予疫苗1次,共治疗2次.于第0天(未荷瘤时),第5天(出瘤后),第26天(治疗后1周),第40天(治疗后3周)天眼球取血分析各组动物外周血CD3/4/8表达水平;于荷瘤30,32,34,36,38,40天测量肿瘤体积,观察大鼠皮下肿瘤生长情况.于荷瘤40天处死各组实验动物,取肿瘤组织称重,评价治疗效果.结果:大鼠骨髓来源的骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BMMNC)在相关细胞因子的作用下可以培养出成熟的树突细胞,负载肿瘤提取物后,高表达表面抗原OX-152,CD-86.流式细胞仪检测外周血CD3/4/8水平显示:各组大鼠CD4/CD8比值升高,与未荷瘤时(第0天)相比,差异有统计学意义(P<0.05);CD3+CD4+T细胞表达百分率及CD4/CD8在治疗后3周时(第40天)NuTu-DC治疗组明显高于另两组(P<0.05),而对照组与CBRH-DC比较无差异.通过测量肿瘤生长曲线可见NuTu-DC治疗组各大鼠肿瘤体积较其它两组小,荷瘤第40天时,NuTu-DC治疗组为106.57±56.65mm3,对照组为299.78±118.17mm3,CBRH-DC治疗组为299.12±85.61mm3,与对照组和CBRH-DC组比较差异有统计学意义(P<0.01);而且NuTu-DC治疗组肿瘤平均瘤重为0.197±0.039g,与对照组和CBRH-DC治疗组有显著差异(P<0.01),其抑瘤率为64.4%;而CBRH-DC治疗组大鼠平均肿瘤体积、生长速度及瘤重与对照组无明显差异(P>0.05),其抑瘤率仅为0.22%.结论:应用大鼠卵巢癌细胞肿瘤提取物负载的树突细胞体内治疗卵巢癌荷瘤大鼠,能有效抑制肿瘤生长,且所诱发的抗肿瘤免疫具有组织特异性.
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氩氦冷冻治疗9L/Fischer344大鼠脑胶质瘤疗效观察
目的 研究氩氦冷冻治疗9L/Fischer344大鼠脑胶质瘤的疗效及预后.方法 Fischer344大鼠胶质瘤模型建立成功后,随机分为空白对照组、手术组、氩氦冷冻组,每组10只.游标卡尺测量并计算肿瘤体积,观察各组大鼠行为及生存期.结果 空白对照组、手术组和氩氦冷冻组大鼠生存时间分别为(78.5±1.1)d、(171.0±10.8)d和(252.8±5.0)d,差异具有统计学意义(P=0.002).氩氦冷冻组肿瘤体积呈逐渐缩小趋势.结论 氩氦冷冻是治疗胶质瘤有效方法,推测可能与瘤细胞破裂,抗原暴露,而刺激机体产生抗肿瘤的抗体有关.
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近交系F344大鼠喉移植改良模型的建立
背景与目的:喉为非生命必需器官,喉移植研究一直滞后于其它生命必需器官的移植,然而,一旦宿主对移植喉的免疫耐受诱导成功,那么,喉移植将是晚期喉癌治疗和喉功能重建的重要手段.本研究的目的在于建立改良鼠喉移植模型,提高受体鼠和移植喉的存活率,为喉移植抗免疫排斥和免疫耐受诱导研究提供动物模型.方法:采用近交系F344大白鼠建立喉移植Strome模型,并对该模型进行改良:供体喉切取时保留甲状腺上动脉和咽升动脉,形成舌骨、舌根、下咽、喉、甲状腺、部分颈段食管、气管的移植复合体,移植喉血运通过供体鼠双侧颈总动脉分别与受体鼠颈总动脉和颈前静脉端-端吻合重建,术中行对侧颈外静脉穿刺补液,术后皮下注射补液.术后1周解剖移植喉,观察移植喉大体形态和血管通畅情况,常规病理检查评价移植喉的组织变化和存活状况,对比Strome模型和改良模型的受体鼠及移植喉存活率.结果:Strome A组、Strome B组、改良组的受体鼠存活率和各组移植喉存活率分别为70%(14/20)、85%(17/20)、95%(19/20)和30%(6/20)、40%(8/20)、80%(16/20),改良模型优于Strome模型.结论:与Strome模型比较,改良模型加强围手术期的处理,降低受体鼠的死亡率;将咽升动脉及其分支包含在移植复合体中,增加移植血管蒂中喉供血动脉的侧支循环,降低侧支循环阻力,减少微循环障碍的发生率,提高移植喉的存活率.
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9L/Fischer344与C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型的比较研究
目的探讨9L/Fischer344和C6/Wistar两种大鼠脑胶质瘤模型的对比研究.方法采用立体定向技术,大鼠脑内接种定量的肿瘤细胞建立模型,比较两种模型大鼠脑内肿瘤生长情况;采用免疫组织化学方法,比较两种模型脑内肿瘤局部细胞免疫反应情况.结果 (1)9L/Fischer344大鼠脑内有肿瘤持续生长,而C6/Wistar大鼠脑内早期可见肿瘤生长,但肿瘤局部有大量淋巴细胞浸润,肿瘤周边血管呈现"淋巴细胞血管套"现象,后期脑内肿瘤逐渐消退、消失,仅见残留轨迹和含褐色素沉着的吞噬细胞;(2)9L/Fischer344肿瘤局部可见CD68阳性细胞,未见CD4、CD8阳性细胞,而C6/Wistar肿瘤局部CD68阳性细胞数量明显较9L模型多(P＜0.01),并可见CD4、CD8阳性的淋巴细胞.结论 9L/Fischer344模型稳定性高,重复性好,肿瘤局部T淋巴细胞浸润极少,是一种较为理想的脑胶质瘤免疫治疗研究的动物模型;C6/Wistar模型脑内肿瘤不能持续生长,脑内肿瘤可自发性消退,肿瘤局部T淋巴细胞浸润明显,存在较强的细胞免疫反应,可能是肿瘤的消退的原因,该模型不适合用于胶质瘤治疗,尤其是免疫治疗的实验研究.
