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眼外肌中干细胞作用的研究现状
卫星细胞是肌肉分化干细胞中的一类.其中,生肌转录因子PAX3/PAX7和生肌调节因子MRFS在肌形成过程中发挥重要的调控作用.已有动物实验证实了肌调节因子在眼外肌疾病中的调控作用,对于揭示眼外肌病病因及治疗提供了依据和新途径.
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针刺对离心运动大鼠骨骼肌生肌调节因子的影响
目的:观察4周离心运动及针刺干预对生肌调节因子(MRFs)的影响,探讨MRFs变化特征及针刺在骨骼肌损伤修复中的作用.方法:72只雄性SD大鼠分为安静组(C)、运动组(E)和运动针刺组(EA),E与EA组进行坡度为-16°的4周跑台运动;免疫印迹法检测生肌调节因子MyoD、Myf5、Myogenin、MRF4蛋白表达.结果:第1、3、4周E组MyoD、MRF4蛋白表达显著低于C组和EA组(P＜0.05);EA组MyoD蛋白表达第1、3、4周接近安静水平,MRF4蛋白表达第4周显著低于C组(P＜0.05).E组Myf5蛋白表达呈上升趋势,第4周显著高于C组(P＜0.05);EA组Myf5蛋白表达第1至3周均高于E与C组;E组Myogenin蛋白表达持续升高,且第3、4周显著高于C组(P＜0.05);EA组Myogenin蛋白表达第1、2周显著高于E组(P＜0.05),第3、4周与之相反.结论:4周离心运动能上调Myf5与Myogenin蛋白表达,下调MyoD与MRF4蛋白表达;针刺具有调控骨骼肌MRFs保持正常水平的作用.
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运动与生肌调节因子研究进展
生肌调节因子(myogenic regulatory factors,MRFs)包括MyoD、myogenin、myf5、MRF4四个成员.MRFs可与E盒结合,调节基因的转录.在几个肌肉表型蛋白的调控区,如快肌肌球蛋白轻链、肌球蛋白重链(MHC)Ⅰ和MHCⅡb都有E盒的存在[1].
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生肌调节因子和连接蛋白43基因诱导大鼠成纤维细胞分化为肌细胞实验研究
目的 探讨转染生肌调节因子(myoblast determination,MyoD)基因和连接蛋白43(Connexin,Cx43)基因的大鼠真皮成纤维细胞(dermal fibroblast,DFs)生物学功能的变化及MyoD和Cx43基因转染DFs细胞治疗心力衰竭的可行性.方法 采用Gateway技术,构建真核质粒表达载体,利用慢病毒(LV)表达系统,将大鼠MyoD cDNA和Cx43 eDNA转入大鼠成纤维细胞中,经Blasticidin筛选培养,通过RT-PCR,Western印迹法等方法检测MyoD及Cx43蛋白及mRNA表达情况,并且通过显微镜观察转染后生长情况,膜片钳技术检测离子电流变化.结果 RT-PCR,Western印迹法检测出MyoD及Cx43蛋白及相应mRNA表达,膜片钳检测到转染后钙离子电流,显微镜观察到基因转染筛选后培养1 W细胞的融合现象,并有多核肌管形成.结论 MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为成肌细胞,为进一步研究基因治疗心力衰竭奠定基础.
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MYo Cx43基因转染大鼠成纤维细胞产生电偶联能力细胞实验研究
目的 通过观察转染生肌调节因子(myoblast determination,MyoD)基因和连接蛋白43(Connexin)基因的大鼠真皮成纤维细胞(dermal fibroblast,DFs)生物学功能的变化,探讨Myo和Cx43基因转染DFs细胞在治疗心律失常中意义.方法采用Gateway技术,构建真核质粒表达载体,利用慢病毒(LV)表达系统,将大鼠MyoD cDNA和Cx43 cDNA转入大鼠成纤维细胞中,经Biasticidin筛选培养,通过RT-PCR、Western blot及膜片钳技术等方法检测MyoD及Cx43蛋白及mRNA表达情况及离子电流变化,并且通过显微镜观察转染后生长情况,免疫组织化学检测肌动蛋白和结蛋白的表达.结果 RT0-PCR,Western blot检测出MyoD及Cx43蛋白及相应mRNA表达,显微镜观察到基因转染筛选后,培养1周细胞的融合现象,并有多核肌管形成及连接蛋白形成.免疫组织化学检测可见其下游蛋白Desmin及α-actin呈现阳性表达,膜片钳检测到转染后钙离子及钠离子电流改变.结论 MyoD和Cx43基因转染使DFs分化为可兴奋偶联细胞,为进一步研究基因治疗心律失常奠定基础.
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生肌调节因子在肌肉发生和发育中的作用
1 MyoD及其家族成员1.1 MyoD的发现和克隆早期实验发现,未定向中胚层干细胞C3H10T1/2经5-杂氮胞苷(去甲基剂)作用后可转变为成肌细胞;非肌细胞与成肌细胞融合后,前者静止的肌肉基因被激活;将成肌细胞基因组DNA 转染于C3H10T1/2细胞株可使其转变为成肌细胞.以上研究表明一些交互作用因子参与肌肉分化过程.Davis首选通过基因相差法分离出了MyoD cDNA,将其在C3H10T1/2细胞株表达, 产生了有生肌能力的细胞克隆[1].
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Wnt1、MyoD在正常及先天性肛门直肠畸形大鼠胚胎盆底肌发育中表达的对比研究
肛门直肠畸形术后排便功能障碍与盆底横纹肌的异常发育密切相关,然而ARMs盆底肌发育异常的机制目前仍不清楚.分子生物学的研究进展已对骨骼肌的发育机制进行了初步阐述,生肌调节因子被认为在肌肉发育过程中起到关键的作用;目前认为Wnt、Shh、Bmp等对于生肌调节因子(myogenic regulatory factors,MRFs)都有影响,其中Wnt信号通路是激活MRFs的重要因素;Wnt经典信号通路和非经典信号通路(激酶依赖通路)都对MRFs的激活起着重要作用;也有研究表明,Wnt信号可能通过参与染色质构象的改变而影响MRFs的活性.Wnt信号对于生肌调节因子的调节作用,已从初的单一的线性调节通路发展到目前的网络样调节通路,从而通过多种调节途径对胚胎期的肌发育过程产生重要影响.本研究通过研究Wnt信号通路中的重要因子Wnt1以及生肌凋节因子MyoD在正常及肛门直肠畸形大鼠E13～E21胚胎盆底肌的表达情况来探讨肛门直肠畸形大鼠胚胎盆底肌发育异常的机制.
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推拿手法对卫星细胞和生肌调节因子影响机制的研究进展
肌卫星细胞是具有增殖和分化能力的干细胞,在骨骼肌损伤后可以激活生成成肌细胞,进而分化为肌细胞.在调节卫星细胞增殖的内源性因子中,MyoD、IGF-I及bFGF是参与肌肉发生过程分子调控、启动和维持骨骼肌细胞生长发育的重要基因.而推拿手法可使卫星细胞大量增殖,生肌调控因子的表达增加,从而促进骨骼肌损伤修复.
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泮托拉唑改善小鼠肿瘤恶病质骨骼肌消耗
[目的]研究泮托拉唑对肿瘤恶病质骨骼肌消耗的缓解作用.[方法]将24只BALB/c小鼠随机分为3组,分别为正常组(NN)、恶病质组(CC)、干预组(PPI),每组8只.荷瘤小鼠采用腋下接种小鼠结肠癌细胞(c26),建立肿瘤恶病质模型.每日监测各组小鼠体质量、肿瘤大小及精神毛发等一般情况.接种后第12天干预组采取泮托拉唑灌胃,其余组采取生理盐水灌胃.干预后第12天处死小鼠收集标本.称量腓肠肌及肿瘤质量,测量肿瘤大小,HE染色观察骨骼肌形态变化,血清ELISA法检测IL-6、TNF-α水平,qRT-PCR和Werstern blot分别检测腓肠肌MuRF1、MAFBx、Myod1和myf5的mRNA和蛋白表达水平.[结果]与CC组相比,PPI组小鼠及腓肠肌质量分别增加39.8%和24.2%,腓肠肌纤维横切面积增加25.4%;PPI组Myod1和myf5的mRNA水平及蛋白表达水平明显高于CC组(P<0.05);PPI组血清IL-6及TNF-α水平较CC组分别降低30.7%和18.9%;PPI组MuRF1、MAFBx蛋白表达水平明显低于CC组(P<0.05).[结论]泮托拉唑对肿瘤恶病质骨骼肌消耗具有保护作用,其机制可能与抑制炎症及泛素蛋白酶体途径(UPS),上调生肌调节因子(MRF)有关.
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生肌调节因子在儿童横纹肌肉瘤诊断中的研究进展
横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)为常见的软组织肿瘤之一,年龄40岁以上者罕见,是儿童较常见的恶性肿瘤之一,占儿童癌症第7～8位,也是0～20岁儿童及青少年期软组织肉瘤中常见的类型,约占50%[1];其发病部位、病理类型与年龄有关[2];而决定其预后的主要因素包括肿瘤部位、病理分级和大小[3].5年生存率较低[4].
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肌损伤基因治疗中的质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD的构建及其在MSCs中的表达
目的:构建鼠真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD,为研究MyoD对肌损伤的修复作用提供物质基础.方法:从质粒EMSV上用EcoRI酶切下MyoD cDNA片段,进行琼脂凝胶电泳,切胶回收纯化;EcoRI酶切pIRES2-EGFP,将线性化的载体与回收MyoD cDNA片段用T4DNA连接酶连接,克隆出双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD,用HindⅢ酶切对重组质粒进行鉴定:用脂质体转染的方法将重组质粒转入间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)中，G418筛选，在荧光显微镜下观察其表达。结果：凝胶电泳证明将MyoD cDNA亚克隆入pIRES2-EGFP内，荧光显微镜下可MSCs胞体发出绿色荧光。结论：成功地构建了鼠真核表达的双顺反子质粒载体pIRES2-EGFP-MyoD。
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生肌调节因子研究进展
机体在发育过程中,如何调控由原始干细胞向特定的组织细胞定向分化及分化完成后其分化状态的维持一直是发育生物学关注和研究的重点.生肌调节因子(myogenic regulatory factors,MRF)的发现对深入认识肌发生及肌细胞分化调控有重要意义,也为进一步理解和研究其它组织细胞定向分化调控提供了重要线索和依据.本文就近年MRF在胚胎发育过程的表达、与其它细胞因子的相互作用及对细胞周期的调节作用等方面的研究进展综述如下.
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干细胞及其在神经肌肉疾病治疗中的应用
近年来运用干细胞重建或修复组织的观念颇受关注.其实,早在10多年前就提出了对神经肌肉疾病进行干细胞治疗的可能性.我们可以从骨髓移植成功地治疗造血系统疾病得到启示,包括遗传性疾病如免疫缺陷和地中海贫血,以及获得性疾病如白血病.
