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三种不同人群HPV检测DNA分型结果及其临床意义探讨
目的:探究DNA分型检测对三种不同人群的检测的临床意义.方法:随机选择2015年7月至2016年7月间我院皮肤科门诊诊断的109例尖锐湿疣患者为观察组,选择同时期入院检查的117例无症状的高危自检者为B对照组,选取112例定期健康检查、孕前及婚前正常体检者为A对照组.用镊子取观察组尖锐湿疣患者的可见疣体组织0.10 ～0.50 mm3;A和B对照组无疣体的参试者,用专用的HPV采样刷在女性外阴或宫颈脱落细胞,男性在冠状沟或尿道口进行采样.按照实验室指标对参试者进行检测后,并结合医院自行设计的有关尖锐湿疣的规范准则,详细记录参试者的各项测量指标,后对收集数据进行统计学分析.结果:经过检查,观察组患者的阳性检出率为93.58％,B对照组的阳性检出率为23.08％,A对照组的阳性检出率为4.46％,A对照组的阳性检出率明显低于B对照组和观察组,且B对照组明显低于观察组,差异有统计学意义(P＜0.05).参试者的HPV-DNA分型以感染单型6/11型为主,其次是16/18型和6/11+ 16/18混合型.其中单型6/11型明显高于16/18型和6/11+ 16/18混合型,差异对比有统计学意义(P＜0.05).109例尖锐湿疣患者阳性例数为102例,其中单一感染患者为81 (74.31％),多重亚型感染为21(19.27％),其中低危型是单一感染的主要类型,高危型是多重感染的主要类型.结论:尖锐湿疣患者、无症状的高危自检者及正常人的分型检测中以6/11型HPV-DNA为主,高危人群诊断阳性率有明显差异,临床上应加强对此类高危人群的HPV-DNA的分型检测,以便尽旱确诊及治疗.
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外阴尖锐湿疣患者宫颈HPV的DNA分型检测结果分析
目的 探究外阴尖锐湿疣患者的宫颈HPV的DNA分型的分布情况及结果分析.方法 对60例患者运用反向斑点杂交法进行其宫颈HPV的DNA分型的检测.结果 60例患者中,阳性的宫颈HPV 30例,HPV6型发病率高,14例,占总病患数的23.33%,占阳性的46.67%.宫颈HPV多的为单一低危型,30例中有19例,而单一的高危型例数少,30例中有5例.结论 宫颈尖锐湿疣与外阴尖锐湿疣(VCA)患者宫颈HPV的DNA分型密切相关,并且紧密影响其发展、癌变,所以定期的筛选,检查尖锐湿疣患者的宫颈HPV的DNA分型至关重要.
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宫颈脱落细胞高危人乳头瘤病毒DNA分型定量的临床应用
目的 探讨宫颈脱落细胞高危人乳头瘤病毒DNA(HR-HPV-DNA)分型定量在宫颈癌防治中的意义.方法 采用实时定量PCR-双色荧光探针法,对1417例体检妇女进行宫颈脱落细胞作HR-HPV-DNA分型定量检测和TCT检测.结果 HR-HPV16是HR-HPV单型别中阳性率高的型别(19.14％).HR-HPV-DNA总体阳性率为13.76％,HR-HPV-DNA阳性率和水平随着细胞学诊断的严重程度增加而升高.在宫颈上皮内瘤变(CIN)组,HR-HPV-DNA水平高于正常组、萎缩性鳞状上皮细胞组、轻度炎症组和中度炎症组(P＜0.05).非典型鳞状上皮细胞组HR-HPV-DNA水平高于轻度炎症组(P＜0.05).结论 细胞学诊断的严重程度不仅与HR-HPV的型别有关,还与HR-HPV-DNA的水平有关.
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人乳头瘤病毒-DNA分型检测对35岁以下妇女宫颈病变的诊断价值
目的 探讨检测人乳头瘤病毒(HPV)-DNA分型检测对35岁以下妇女宫颈病变的诊断价值,为宫颈病变的筛查提供依据.方法 对2013年1-12月收治的126例35岁以下妇女采用核酸分子快速杂交基因分型技术进行HPV-DNA分型检测及阴道镜下多点病理活检,分析HPV-DNA分型在不同级别细胞学诊断中的检测结果,并与病理结果进行对比.结果 HPV-DNA分型检测阳性率为60.23％,8种常见HPV感染频率由高至低为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-33、HPV-39;在细胞学诊断中,低度鳞状上皮内病变(LSIL)和高度鳞状上皮内病变(HSIL)HPV检出率(分别为83.33％、100.00％)差异无统计学意义(x2=0.18,P＞0.05);且两者均与不明确意义的非典型鳞状上皮细胞(ASC-US)细胞学诊断HPV检出率(56.25％)差异有统计学意义(P＜0.05);HPV阳性病理确诊为宫颈上皮内瘤变(CIN)者47例,HPV阴性病理确诊为宫颈上皮内瘤变(CIN)者12例,差异有统计学意义(x2=43.57,P＜0.05).结论 HPV-DNA分型检测对35岁以下妇女宫颈病变的筛查具有较高的指导意义,且高危型HPV感染与宫颈病变的严重程度密切相关,能够为其病情和疗效评估提供科学依据.
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采用 PCR-SSP法检测HLA-B27基因
目的:建立顺序特异引物聚合酶链反应(PCR-SSP)方法检测HLA-B27基因并与血清学方法比较.方法:设计合成B27特异引物3个和内源性阳性对照2个,建立PCR-SSP方法,用于B27基因分型.血清学分型为一步法单克隆抗体方法.临床样本100份,来源于可疑强直性脊柱炎患者.快速酚氯仿法提取模板DNA.结果:100例临床样本PCR-SSP行B27基因分型均获成功.总耗时4 h.其中B27阴性58例,阳性42例,5例临床诊断为强直性脊柱炎,占11.9%.30份样本同时行血清学分型,20份B27阴性,5份阳性,5份可疑阳性.其中20份阴性中3例为阳性,5份可疑阳性中2例为阴性.结论:PCR-SSP行B27基因分型,分辨度高、特异性强,快捷、准确,适合于临床应用.
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人乳头瘤病毒(HPV)-DNA分型检测在30岁以下妇女宫颈病变诊断中的价值
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,发病率较高,仅次于乳腺癌,居女性恶性肿瘤的第2位.近年来子宫颈癌的研究表明,人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌及宫颈上皮内瘤变(CIN)的主要危险因素,分子生物学研究结果显示,90%以上的宫颈癌患者伴有HPV感染[1],HPV是宫颈癌的主要致病因子,根据其能否导致恶性病变,将HPV分为高危型及低危型.
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强直性脊椎炎致病基因的多态性及中医治疗研究
目的:探讨汉族人HLA-B27亚型基因结构特点,合成HLA-B27基因检测试剂;对HLA-B27基因阳性的强直性脊椎炎(AS)患者进行中医治疗.方法:采用聚合酶链式反应(PCR)顺序特异性引物法(SSP)和核苷酸探针杂交技术(SOPSH).对120例健康人和46例AS患者的HLA-B27基因进行了分析.结果:在汉族人群至少存在二种HLA-B27基因亚型,其中B*2704分布频率高占50%,其次是B*2705占39.13%,两者间分布频率无显著差异.制备的HLA-B27基因检测试剂,具有快速简便、准确性高和特异性强等优点;用中药"正清风痛宁"治疗AS,按全国中西医结合会议制定的标准,有效率达90%以上.结论:HLA-B27的B*2704和B*2705是AS的主要致病基因;DNA分型检测HLA-B27基因完全可以取代目前的血清学方法,具有很大的应用价值;正清风痛宁对AS的治疗效果明显.
关键词： 强直性脊椎炎 HLA-B27亚基因 DNA分型 中医治疗 -
贝叶斯计算理论在亲子鉴定中的应用
论述如何采用贝叶斯计算理论对亲子鉴定过程中典型情况下基因分型结果进行处理。通过对实验结果进行量化，得出科学鉴定结论。通过构建假设，采用贝叶斯计算理论根据构建好的假设对分型结果进行计算，后得出亲权指数。该方法设计合理，充分利用了鉴定过程中所有基因分型相关信息，为目前法医 DNA实验室所广泛采用。
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婴儿错换对社会家庭的影响——附12例怀疑婴儿错换亲子鉴定案例
目的 探讨婴儿错换对社会家庭的影响.方法 对1997年1月至2006年12月,12例怀疑婴儿错换亲子鉴定案例进行分析.结果 怀疑婴儿错换案占整个亲子鉴定案总数的0.531%.12例怀疑婴儿错换亲子鉴定案中2例证实为真正错换,10例没有错换.结论 虽然涉及此类案件仅占亲子鉴定总数的极少部分,但对当事人及社会家庭产生极大的负面影响,应该引起院方领导和医护人员的高度重视.
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羊水亲子鉴定及其社会问题思考--附28例羊水亲子鉴定分析
目的探讨羊水亲子鉴定折射出的社会道德问题.方法对1999年1月至2003年12月28日羊水亲子鉴定进行回顾性分析,与单亲和双亲亲子鉴定在数量、来源、鉴定事由、鉴定结论等作对比分析.结果羊水亲子鉴定占总数的2.15%.案例来源均为自诉案件.鉴定事由中,妻子怀疑胎儿不是丈夫亲生的,带情人做鉴定25例,占羊水亲子鉴定总数的89.29%.夫妻关系2例,恋爱关系1例.结果表明,25例婚外性关系排除亲生关系,2例夫妻关系和1例恋爱关系认定亲生关系.结论羊水亲子鉴定虽然仅占亲子鉴定总数的2.15%,但近九成为婚外性关系,这种现象值得我们深思.
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610例亲子鉴定回顾性分析--探讨亲子鉴定与社会家庭问题的微妙关系
对1994年1月至1999年12月610例亲子鉴定进行回顾性分析.对案例的数量、来源、鉴定事由、被鉴定人职业、年龄鉴定结论作统计分析.结果表明:案例数呈逐年上升趋势,1998年142例,比1997年上升67.06%,1999年185例,上升39.6%.案件来源以自诉为主,占67.7%.被鉴定人男性平均年龄36.6岁,女性为30.8岁,孩子为4.6岁.鉴定事由中,怀疑婚外性关系为主,占48.69%.610例中认定亲生关系539例,占71.97%,排除亲生关系占28.03%.亲子关系排除率低的是怀疑婚外恋,占9.43%,排除率高为超计划生育,占92.54%.
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用PCR和DNA印渍术对100例单纯性生殖器疱疹病毒感染分型的测定分析
使用PCR和DNA印渍术对100例泌尿生殖道HSV感染患者进行了分型测定.结果在100例中,阳性病例为94例(占94%),阴性病例6例(6%).结论:上述结果为HSV泌尿生殖道感染临床诊疗工作提供了一个有价值的参考信息.
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HLA-B40组等位基因多态性和血清学分型不明确标本分析
目的利用DNA分型技术调查上海汉族人群HLA-B40组等位基因多态性并比较配型标本中HLA-B40抗原血清学和DNA分型的结果.方法采用反向PCR-SS0P技术进行DNA分型,可检出HLA-B*4001-4011等11个等位基因.结果所有样本DNA分型均获成功,无假阳性和假阴性结果出现.质控DNA分型结果与uCLA结果相符.上海地区汉族人群共检出B*4001-4003、4005-4007、4011等等位基因,未检出B*4004、4008-4010等等位基因.296名无关个体中HLA-B40*组等位基因频率为0.1402.血清学方法检测HLA-B40组抗原错误率为12.82%(10/78).结论该技术用于HLA-B40分型分辨率高,分型结果较血清学方法更加精确,可确保HLA分型的准确.
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试验性法医DNA数据库的研究
目的通过对大规模样本的DNA分型,探讨DNA数据库的建库指标;评估手动系统与自动系统DNA分型的兼容性;探讨DNA数据库计算机管理和需要立法解决的有关问题.方法对 1000份样本包括血液、血痕、唾液斑、精斑、混合斑、肌肉组织进行D3S1358、D9S1118、vWA、D5S818、D16S539、D8S1179、CSF1PO、D20S161等8个STR基因座的DNA分型.构建8个STR基因座的人类等位基因分型标准物;PCR扩增8个STR基因座.样本PCR产物与等位基因分型标准物同步电泳,比较样本PCR产物的电泳谱带对应分型标准物所处的位置,确定样本基因型.采用Microsoft的Access编写DNA数据库计算机管理软件.结果完成了对1000份样本D3S1358、D9S1118、vWA、D5S818、D16S539、D8S1179、CSF1PO、D20S161等8个STR基因座的DNA分型.构建了成都市试验性法医DNA数据库.结论明确了法医DNA数据库建立的核心目的是为侦查提供犯罪嫌疑人的线索;所选择的8个STR基因座累积个人识别能力大于0.99999999,适合在成都群体中用于建立法医DNA数据库.用于DNA分型的手工电泳银染和自动激光荧光检测系统具有可重复性和兼容性,手工电泳银染更易向基层单位推广.设计的计算机管理软件允许现场生物检材DNA分型数据缺项检索;允许DNA数据库容量任意扩大.积累的经验提示法医DNA数据库建库应首先立法确定入库的对象和解决保护个人隐私问题.为建设适合中国国情的法医DNA数据库提供了一个参考模式.
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短串联重复序列基因座嵌合引物复合扩增
目的探索一种新的短串联重复序列(short tandem repeats, STR)基因座复合扩增方法即嵌合引物STR复合扩增法.方法采用公共引物和基因座特异性嵌合引物的复合扩增技术,扩增4个 STR基因座,用聚丙烯酰胺电泳对PCR产物分离,银染.结果建立了法医STR基因座嵌合引物复合扩增方法,可正确分型.结论这种方法扩增条件易于优化,不同基因座扩增条件的齐同性要求不高,对引物二聚体有一定程度的包容性,是一种成本低、效率高的法医STR基因座复合扩增的方法.
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四川造血干细胞捐献者资料库HLA-A,B,DRB1基因和单倍型研究
目的了解中国造血干细胞捐献者资料库四川分库(以下简称"四川分库")HLA基因及单倍型分布特征.方法采用PCR-SSP及PCR-SSO对四川分库内11134名四川籍捐献者HLA-A、B、DRB1基因低分辨分型,用Excel软件计算HLA基因频率、Hardy-Weinberg平衡吻合度、单倍型频率及其连锁不平衡参数.结果在四川分库内,HLA-A、B、DRB1基因(含血清学特异性)分别有18、41、13种,累积频率>50%的显著高频率基因是:A*11、A*02,B*46、B*40(60)、B*13、B*58、B*15(75),DRB1*09、DRB1*12、DRB1*15、DRB1*04.频率大于5%的单倍型有A*02-B*46、A*11-B*40(60)、A*33-B*58、B*46-DRB1*09、A*02-DRB1*09、A*11-DRB1*12、A*11-DRB1*15、A*02-B*46-DRB1*09.紧密相关的单倍型是A*33-B*58、A*30-DRB1*07、B*37-DRB1*10、A*02-B*37-DRB1*10.结论此资料有助于为临床移植寻找合适匹配的供受对,并为四川地区健康人群HLA基因多态性以及HLA相关疾病的研究提供有意义的参照数据.
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HPV-DNA分型联合宫颈脱落细胞类型检测在宫颈癌早期诊断中的价值
目的:探讨人乳头瘤病毒(HPV)-DNA分型联合宫颈脱落细胞类型检测在宫颈癌早期诊断中的价值.方法:350例宫颈病变患者,应用PCR反向点杂交法和液基薄层细胞检测(TCT)检测其宫颈分泌物HPV-DNA类型及宫颈脱落细胞类型,以子宫颈组织的病理学检查结果为依据,比较单纯HPV-DNA分型检测、单纯TCT检测、HPV-DNA联合TCT检测在子宫颈癌早期诊断中的阳性率、灵敏度、特异度及准确性.结果:HPV-DNA分型、TCT检测及阴道镜组织病理活检阳性率分别为32.3％、29.7％及20.6％,HPV-DNA分型和TCT检测均出现假阳性;以病理学检查结果为判断依据,HPV-DNA联合TCT检测对子宫颈癌诊断的阳性率及特异度,与单纯HPV-DNA或TCT检测比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但HPV-DNA联合TCT检测对子宫颈癌诊断的灵敏度高于单纯HPV-DNA或TCT检测(P＜0.05),准确度虽升高,但仅与TCT检测差异有统计学意义(P＜0.05).结论:HPV-DNA联合TCT检测可显著提高宫颈癌早期诊断的灵敏度和准确性,对诊断特异度无影响.
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河南汉族人群27个Y-STR基因座的突变观察与分析
目的 观察分析河南汉族人群中27个Y-STR基因座的突变情况.方法 收集1 000对经常染色体STR检测确定父子关系的血样本,采用STRtyper-27Y系统扩增27个Y-STR基因座分型,统计各基因座发生突变次数和类型,计算突变率以及95％ CI(可信区间).结果 27个基因座中共有27 000次等位基因传递,共发现涉及24个基因座共92次突变,平均突变率(95％ CI)为3.4×10-3(2.7～4.2 ×10-3),其中一步突变90次(97.8％),两步突变2次(2.2％);突变共涉及89对父子,其中86对仅1个基因座发生突变(96.6％),3对同时有2个基因座发生突变(3.4％).等位基因增加突变与等位基因减少突变分别为43次和49次,两者比例为1:1.14.结论 河南汉族人群Y-STR基因座突变可涉及基因座较多,因此在数据库建设与日常检案中应注意防止错判.
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17个STR基因座快速多重扩增体系的建立及应用
目的 建立17个STR基因座多重PCR快速扩增体系.方法 采用人血样本提取DNA并定量,用于多重快速扩增体系分型准确性检测;采用标准品9948,设定稀释度,检测体系灵敏度;采用定量男女DNA样本按11种比例混合,检测体系对混合样本的分型能力;在标准品中加入干扰物质血红素和腐植酸,检测体系的抗干扰能力;对5种非人样本进行检测,评价体系的特异性;对实际案例进行检验,评价体系实际应用价值.结果 采用本文体系,在65min 内,用0.5 ～ 2ngDNA模板量能获得较好的扩增效果,分型结果准确稳定,扩增均衡;种属特异性好;血红素≤50 μmol/L,腐植酸≤25ng/μL时可不受干扰准确分型;男女混合样本中单一样本量不低于1/10即可进准确进行判断;对实际案例常见生物检材的检验结果良好.结论 本文17个STR基因座快速多重扩增体系可显著缩短扩增时间,技术性能符合实际检案要求,可在实践中选用.
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中国汉族人群17个Y-STR基因座突变情况分析
目的 调查分析17个Y-STR基因座等位基因突变的情况.方法 收集中国汉族人群867对父子共1 649份男性血样本.采用YfilerTM复合扩增试剂盒进行17个Y-STR基因座分型,共检测出14 739次等位基因传递,统计各基因座发生等位基因突变的频率.结果 在17个基因座中发现涉及13个基因座共41次突变,其中一步突变40次(97.6％),两步突变1次(2.4％)；突变共涉及40对父子,其中39对仅1个基因座发生突变(97.5％),1对同时有2个基因座发生突变(2.5％)；平均突变率为2.8×10-3(95％CI 2.0～3.8×10-3).等位基因突变时获得重复单位数19次,丢失重复单位数22次,两者比例接近.结论 中国汉族人群Y-STR基因座突变可涉及多数基因座,突变率在2.8×10-3左右,在数据库的建立与应用中应重视,注意采用相关方法进行甄别.
关键词： 法医物证学 Y染色体 短串联重复序列(STR) DNA分型 突变率
