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P-gp和GST π对结直肠癌埋植式给药装置化疗的指导作用
目的探索耐药标记P-gp和GST π对结直肠癌埋植式给药装置化疗的指导作用.方法研究对象为近3年来经结直肠镜活检确诊为结直肠腺癌的患者,并按根治术标准宽切病灶,选择相应供血动脉插管,接埋植式给药装置(药壶,IDDS)埋植于皮下.标本用SP法检测P-gp和GSTπ的表达并按结果采用推荐方案P-gp+/GST π-:A(即5-Fu,DDP);P-gp-/GSTπ+:B(即VCR,HCPT);P-gp+/GSTπ+:C(即5-Fu,HCPT);P-gp-/GSTπ-:D(即VCR,DDP);化疗药均经术中留置的IDDS施药;给药剂量为5-Fu 500mg,DDP 50mg,VCR 2mg,HCPT 4mg.观察记录疗效及毒副反应、随访结果.结果初治有效率(CR+PR)93.5%(29/31例);随访3年生存率为93.5%,PD2例:1例9个月后黏液腺癌腹壁转移,腹腔积液1 000 ml中查见转移癌细胞后改造瘘术;1例1年后出现肝、腰椎、肺广泛转移;2例均死于衰竭.结论P-gp和GST π对结直肠癌埋植式给药装置化疗具指导意义,可提高疗效及3年生存率并降低毒副反应.
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多药耐药基因、谷胱甘肽S-转移酶特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药
目的 研究多药耐药基因(mdr1)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)特异性siRNA逆转K562/A02细胞多药耐药性.方法 以mdr1 mRNA第79～99和GSTπmRNA第308～327核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的siRNA,克隆入pSilence2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ,脂质体介导下转染K562/A02细胞.用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测多柔比星的半数抑制浓度(IC50).结果 经酶切、测序分析表明,成功构建siRNA真核表达载体.经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞株mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,从(2.8±1.65)×108拷贝/μg RNA下降至(3.9±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπmRNA表达量较显示空载体pSilence2.1-U6转染组下降了39.8%,从(2.3±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.4±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜0.01);流式细胞仪显示空载体pSilence2.1-U6转染组细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组细胞凋亡率为(44.98±11.27)%(P＜0.01);空载体转染组耐药指数为23,pSilence-mdr1和pSilence-GSTπ共转染组耐药指数降低为7,IC50值从转染前的(1.16±0.38)mmol/ml下降为(0.33±0.04)mmol/ml(P＜0.01).结论 siRNA真核表达载体pSilence-mdr1、pSilence-GSTπ对K562/A02细胞株多药耐药性具有明显的下调作用.
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氧化应激蛋白GSTπ及HO-1在烟草相关口腔癌中的表达
目的 检测吸烟与非吸烟者口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中氧化应激蛋白GSTπ、HO-1及核转录因子NF-κB的表达,初步探讨烟草在口腔癌中的作用机制.方法 随机选取40例OSCC福尔马林固定组织标本、20例OSCC新鲜组织标本以及10例正常口腔黏膜标本.采用免疫组织化学染色和荧光定量PCR方法,检测氧化应激蛋白GSTπ、HO-1及核转录因子NF-κB在吸烟与非吸烟者OSCC组织中的表达.结果 OSCC组织中GSTπ、HO-1和NF-κB表达均显著高于正常口腔黏膜(P<0.05).吸烟者OSCC组织中GSTπ、HO-1、NF-κB表达高于非吸烟者(P<0.05).结论 氧化应激蛋白GSTπ、HO-1与烟草相关口腔癌的发生发展密切相关,烟草可能是通过激活核转录因子NF-κB,调控其下游抗氧化基因GSTπ、HO-1表达发挥抗氧化作用的.
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mdr1和GSTπ基因缄默逆转K562/A02细胞多药耐药性的研究
目的研究短发夹状小分子干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)对白血病多药耐药细胞株K562/A02 mdr1和谷胱甘肽S-转移酶(GST)π基因的表达和功能的影响.方法根据mdr1mRNA第79～99位和GSTπ mRNA第308～327位核苷酸为作用靶点,合成针对靶区域序列的shRNA,克隆入pSilencer2.1-U6 neo,克隆产物为pSilence-mdrl和pSilence-GSTπ,转染K562/A02细胞株.用实时荧光定量PCR检测K562/A02细胞mdr1和GSTπ mRNA的表达;MTT法检测阿霉素对K562/A02细胞半数抑制浓度(IC50).结果经pSilence-mdr1转染后的K562/A02细胞mdr1 mRNA表达量下降了71.5%,从(2.80±1.65)×108拷贝/μgRNA下降至(3.90±2.37)×107拷贝/μg RNA(P＜0.01);同时pSilence-GSTπ作用后,K562/A02细胞GSTπ mRNA表达量较对照组下降了39.8%,从(2.30±1.14)×105拷贝/μg RNA下降至(5.40±2.45)×104拷贝/μg RNA(P＜O.01);空载体转染后阿霉素的耐药指数为23,pSilence-mdr1转染后为8,pSilence-GSTπ转染后为10,差异有统计学意义(P＜0.01).结论shRNA可有效逆转K562/A02细胞mdr1和GSTπ的多药耐药性.
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乳腺癌中医辨证分型与GSTπ表达的相关性分析
目的：探讨中医辨证分型与乳腺癌GSTπ表达的相关性。方法：根据中医辨证分型将80例乳腺癌患者分为血瘀证23例，肝郁证30例，脾虚证17例，肾阴虚证10例。采用免疫组化法测定不同中医类型及GSTπ表达。结果：血瘀证型乳腺癌患者GSTπ表达的阳性率为82.61%，肝郁证、脾虚证及肾阴虚证型乳腺癌患者GSTπ表达的阳性率分别为33.33%，64.71%及30.00%，血瘀证型GSTπ的阳性表达率明显高于其它类型组，经统计学处理有统计学意义(P<0.05)。结论：乳腺癌癌组织中GSTπ的表达与中医辨证有相关性,血瘀证者GSTπ表达的阳性率高，预后差。
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多种耐药基因蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义
目的探讨P-gp、GSTπ和TopoⅡα蛋白的表达特点及其与乳腺癌临床病理因素的关系.方法采用免疫组化S-P法对86例乳腺癌进行P-gp、GSTπ和TopoⅡα蛋白表达的检测.结果P-gp、GSTπ和TopoⅡα蛋白在乳腺癌中表达的阳性率分别为48.8%(42/86)、43.0%(37/86)及36.0%(31/86);P-gp和TopoⅡα蛋白的的表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).结论P-gp、GSTπ和TopoⅡα蛋白在乳腺癌中的表达可能与乳腺癌的耐药有关.
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多药耐药基因蛋白与乳腺癌临床病理观察
目的：检测乳腺癌组织中多种耐药相关基因和三阴乳腺癌表达差别，进一步了解三阴乳腺癌的耐药特性，为临床治疗三阴乳腺癌选择化疗方案提供依据，评价其能否作为乳腺癌预后的分子生物学指标。方法选取术前未行化疗及内分泌治疗的31例乳腺癌标本，其中三阴乳腺癌病10例。采用免疫组化方法检测LRP，MDR-1，谷胱甘肽S转移酶（GSTπ），TopoⅡα在乳腺癌和三阴乳腺癌中的表达差别。结果 MDR-1，LRP，GSTπ，TopoⅡα4种耐药基因相关蛋白在所有乳腺癌病例中阳性表达率分别为40．95％，58．37％，59．31％，62．45％；MDR-1，LRP，GSTπ，TopoⅡα在非三阴组与三阴组阳性表达率分别为40．20％，47．61％，58．62％，57．14％和44．98．％，74．95％，60．00％，74．87％，其中GSTπ在两组中的表达差异有统计学意义（ P＜0．05）。两组乳腺癌中多基因共表达率分别为39．95％，10．99％差异有统计学意义（P＜0．05）。结论初治乳腺癌中存在多个耐药基因蛋白表达及共表达，三阴乳腺癌比非三阴乳腺癌化疗耐药性强，化疗效果不如非三阴组敏感。 GSTπ表达强于非三阴组，提示三阴乳腺癌预后较差，化疗不敏感。
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结直肠癌中错配修复基因表达与临床病理及Pgp、GSTπ、TopoⅡ、Ki-67表达的关系研究
目的：探讨结直肠癌错配修复基因(MLH1，PMS2，MSH2，MSH6)免疫组化表达特点及其与临床病理的关系，以及错配修复基因(MLH1，PMS2，MSH2，MSH6)与结直肠癌中P-糖蛋白(Pgp)、谷胱甘肽-S-转移酶(GSTπ)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、细胞增殖抗原Ki-67免疫组化表达关系。方法：回顾性分析2014年2月至2015年12月我院收治的93例结直肠癌患者的临床病理资料，采用免疫组织化学法，检测癌组织中错配修复基因(MLH1，PMS2，MSH2，MSH6)、Pgp、GSTπ、TopoⅡ、Ki-67的表达，分析其表达特点。采用多个样本率(或构成比)的比较(即：R×C表的χ2检验)，分析结直肠癌错配修复基因(MLH1，PMS2，MSH2，MSH6)与临床病理的关系及其与Pgp、GSTπ、TopoⅡ、Ki-67免疫组化表达关系。利用Pearson相关分析法分析MLH1、PMS2、MSH2、MSH6与Ki-67表达相关性。结果：错配修复基因MLH1、PMS2、MSH2、MSH6表达缺失阳性率分别占14.0%、17.2%、10.8%、11.8%，Pgp(?)、Pgp (+)、Pgp (++)、Pgp (+++)表达率分别占3.2%、25.8%、51.6%、19.3%。GSTπ(?)、GSTπ(+)、GSTπ(++)、GSTπ(+++)表达率分别占3.3%、16.7%、56.7%、23.3%。TopoⅡ阴性表达及IV级表达未见，TopoⅡⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级表达率分别占19.3%、77.4%、3.2%。Ki-67表达<10%(+)、10-50%(+)、>50%(+)分别占1.3%、25%、50%。错配修复基因MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达与患者的性别、年龄、病理分化、TNM分期无统计学差异(P>0.05)。MSH2缺失表达与发病部位无统计学差异(P>0.05)。MLH1、PMS2、MSH6基因缺失表达与发病部位有一定差异性(P<0.05)，发生左半结肠的缺失表达阳性率分别为：10.7%、10.7%、7.1%，右半结肠缺失表达阳性率分别为28.6%、35.7%、25%，直肠缺失表达阳性率为5.4%、8.1%、5.4%。MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达与Pgp、GSTπ、TopoⅡ的表达无统计学差异(P>0.05)。MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达与Ki-67表达有一定差异性(P<0.05)， Ki-67<10%(+)的MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达率为62.5%，Ki-6710%~50%(+)的MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达率分别为21.1%、0、10.5%、5.3%，Ki-67>50%(+)的MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达率分别为6.1%、4.1%、8.2%、6.1%。MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达与Ki-67表达呈负相关(相关系数分别为r=?0.969、r=?0.464、r=?0.143、r=?0.344， P<0.05)。结论：错配修复基因MLH1、PMS2、MSH6基因缺失表达发生右半结肠几率相对较高，其次依次是左半结肠、直肠。MLH1、PMS2、MSH2、MSH6缺失表达与Ki-67表达呈负相关。
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阿司匹林对顺铂抗卵巢癌作用增敏效应的体外实验研究
目的 观察阿司匹林对顺铂抗卵巢癌效应的影响并对其相关机制进行初步探讨.方法 MTT法检测阿司匹林+顺铂与单纯顺铂或阿司匹林对卵巢癌顺铂耐药细胞株(COC1/DDP)细胞生长曲线的影响,流式细胞仪分别检测不同组别多药耐药相关蛋白P-gp、MRP、GSTπ及核转录因子NF-κB的表达变化.结果 单纯阿司匹林和顺铂对COC1/DDP细胞生长的影响较弱(P＞0.05),阿司匹林+顺铂显著抑制COC1/DDP细胞生长(P＜0.05).P-gp在COC1/DDP细胞系呈低表达状态,MRP、GSTπ表达率在各组间差异无显著性(P＞0.05),阿司匹林+顺铂组核转录因子NF-κB的表达量降低(P＜0.05).结论 阿司匹林可以增强顺铂的抗卵巢癌作用,其作用可能与核因子NF-κB的表达量降低有关.
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多种耐药蛋白在三阴性乳腺癌中表达的临床意义
目的 研究多种耐药蛋白在三阴性乳腺癌中表达的临床意义.方法 采用免疫组化法检测76例三阴性乳腺癌患者谷胱甘肽S转移酶(GSTπ)、P-糖蛋白(Pgp)、肺耐药蛋白(LRP)和拓扑异构酶-Ⅱ(TOPOⅡ)的表达,分析它们与患者的临床病理特征的相关性.结果 三阴性乳腺癌患者中GSTπ、Pgp、LRP、TOPOⅡ的阳性表达率分别为63.16％、25.00％、34.21％、32.89％,GSTπ的高表达与脉管癌栓有相关性,而与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级无相关性;TOPOⅡ的表达与患者的年龄有相关性,而与肿瘤大小、淋巴结转移、脉管癌栓及组织学分级无相关性;Pgp、LRP的表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、脉管癌栓和组织学分级均无相关性;GSTπ与LRP表达呈正相关(r=0.393,P=0.003),其他基因表达水平间无相关性.结论 GSTπ表达水平与三阴性乳腺癌临床病理特征如血道转移等相关,且GSTπ与LRP表达呈正相关,提示联合检测GSTπ和LRP在三阴性乳腺癌中的表达对判断肿瘤转移具有一定的参考价值.
