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胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响
目的 探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响.方法 设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800.测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法,比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异.选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin V FITC/PI双标记法检测凋亡细胞,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性.结果 经测序证实,干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG-800,组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2.重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株.与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,mRNA的表达分别下调44.9%和49.5%;Western印迹法结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,蛋白的表达分别下调55.3%和64.2%.与转染空载体的细胞相比,转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢,细胞周期表现为处于G0～G1期的细胞有所增加,G2/M期和(或)S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加,细胞克隆形成数量减少,裸鼠体内成瘤性降低.结论 胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染,可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的成瘤性.
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铜绿假单胞菌制剂胃癌细胞抑制作用研究
目的 探讨铜绿假单胞菌制剂对胃腺癌高转移MKN45细胞的作用及作用机制.方法 用流式细胞仪、软琼脂集落形成实验、细胞侵袭实验分别检测铜绿假单胞菌制剂对胃腺癌MKN45细胞的作用,并分析其作用机制.结论 铜绿假单胞菌制剂可抑制MKN45细胞的增殖,阻滞其G1期到S期的演进;并且可明显抑制该细胞的侵袭转移能力;降低其恶性程度,是腹腔免疲化疗胃癌腹水、腹腔脱落癌细胞及腹腔种植转移的较好选择.
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奥曲肽对人胃癌细胞抑制作用的实验研究
目的探讨生长抑素类似物奥曲肽(OCT)对胃癌细胞株MKN45生长的体外调节作用.方法MTT法测定OCT对MKN45细胞增殖的调控;流式细胞术分析OCT对MKN45细胞周期分布的影响;RIA法测定表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α)含量的变化.结果OCT对MKN45细胞生长有抑制作用,以在1×10-6mol/L浓度时明显;OCT可诱导MKN45细胞G0/G1阻滞,加入OCT后24 h显著,同期G2/M期细胞比例亦减少;OCT能抑制胃癌细胞合成EGF、TGF-α的能力.结论OCT对胃癌生长具有负性调控作用,为胃癌患者应用OCT治疗提供了依据.
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SOX7对胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭的影响
目的 探讨转录调节因子SOX7对人胃癌MKN45细胞株体外迁移侵袭能力的影响.方法 以人胃癌MKN45细胞株作为研究对象,用脂质体介导转染pIRES2-EGFP-SOX7重组质粒并建立稳定过表达SOX7的MKN45细胞株,用Real-time PCR和Western blot验证SOX7过表达的情况,并检测转染前后MKN45细胞增殖和侵袭能力的变化,并用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9的表达情况.结果 Real-time PCR和Western blot证实转染后的MKN45细胞SOX7表达明显上调,转染组较对照组增殖和侵袭能力明显下降,且Wnt/β-catenin信号通路下游关键因子MMP-9表达明显下调.结论 SOX7在体外可以有效抑制人胃癌MKN45细胞株的增殖和侵袭,其机制可能是通过负性调控Wnt/β-catenin信号通路引起的.
关键词： 胃癌 SOX7 MKN45 Wnt/β-catenin 侵袭转移 -
参术胶囊对胃癌细胞NKN45显微结构和超微结构的影响
目的:研究参术胶囊对胃癌细胞MKN45显微结构和超微结构的影响及参术胶囊能否诱导MKN45细胞凋亡.方法:用姬姆萨染色技术研究参术胶囊对MKN45细胞株的一般形态学产生的影响;用电子显微镜技术研究参术胶囊对MKN45细胞株超微结构的影响.结果:光镜下姬姆萨染色后观察显示4.4、22、44、220、440μg/ml参术胶囊作用24h后,部分细胞变小,着色较深、结构混乱、染色质边聚.电镜显示4.4、22、44、220、440μg/ml参术胶囊能造成细胞核内染色质聚成团决,核膜完整,细胞内线粒体肿胀,胞浆内空泡增加.结论:参术胶囊能抑制胃癌细胞株MKN45生长,其机制与诱导细胞凋亡有关.可能是通过线粒体途径诱导细胞凋亡的.
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胃泌素及丙谷胺对胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达的影响
目的:观察五肽胃泌素(PG)及其受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人胃癌细胞株MKN45增殖及表皮生长因子(EGF)表达的影响.方法:MTT法检测人胃癌细胞株MKN45增殖;放射免疫法(RIA)测定表皮生长因子(EGF)的表达.结果:PG(10-6 mol/L)明显促进人胃癌细胞株MKN45增殖,24、48h的促细胞增殖率分别为11.24%、17.63%,丙谷胺(2.0～10.0 mmol/L)能阻断这一促增殖作用,并可剂量依赖性地抑制胃癌细胞的生长,且随作用时间延长而增强.同时,在胃癌细胞株MKN45培养液中可检测到EGF,且随培养时间延长EGF含量增加;PG(10-6 mol/L)可显著增加MKN45培养液中EGF的含量,丙谷胺(6.0 mmol/L)不仅明显阻断PG诱导的EGF增加,并且能够减少胃癌细胞MKN45培养液EGF的含量.结论:五肽胃泌素能促进胃癌细胞株MKN45增殖及EGF表达,而其受体拮抗剂丙谷胺不仅能阻断这一的促进作用,并可抑制胃癌细胞株MKN45增殖及EGF的表达.提示PG的促胃癌细胞增殖作用可能与促进EGF表达有关.
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双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对不同胃癌细胞抑制作用的比较
目的 比较肝细胞生长因子第一环状结构域基因(hepatocyte growth factor kringle 1,HGFK1)溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞系SGC7901、MKN45、MGC803的抑制杀伤效果.方法 以野生型腺病毒(AD5-EGFP)和空载体双靶向腺病毒(TH-AD-EGFP)为对照组,以双靶向HGFK1溶瘤腺病毒(TH-AD-HGFK1-EGFP)为试验组在感染复数(MOI)为100的条件下分别感染这三种胃癌细胞,测定其在72小时的细胞生存率状况(CCK8试验),并比较三种胃癌细胞试验组的差异.结果 试验组双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞的72小时细胞抑制率均明显高于对照组(P<0.001),MKN45试验组明显低于SGC7901和MGC803试验组(分别是P=0.004和P=0.002).而SGC7901试验组和MGC803试验组之间没有明显差别(P=0.599).结论 双靶向HGFK1溶瘤腺病毒对三种胃癌细胞SGC7901、MKN45、MGC803均具有抑制杀伤作用,但对SGC7901和MGC803的抑制效果明显高于MKN45.
