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细菌荧光酶的融合luxAB基因在肝癌细胞中的表达
目的探索细菌荧光酶的融合luxAB基因作为新的报告基因在肝癌细胞中表达的可行性.方法基于PCR的位点突变技术,构建了含有细菌荧光酶融合AB基因的哺乳动物表达载体pcDNA3-luxAB,通过脂质体转染,使其在肝癌细胞BEL7402中稳定表达.以序列测定和PCR分别确定融合luxAB基因构建的正确性和质粒转染的成功.以MTT和生物发光法分别测定细胞群体生长曲线和细菌荧光酶发光强度.结果构建的融合luxAB基因是单顺反子,与设计完全一致;pcDNA3-luxAB的转染对BEL7402肝癌细胞的群体生长无显著影响;表达载体在BEL7402细胞中可稳定表达,在细胞水平可检测到(8.71±1.21) mV/40 μg蛋白的细菌荧光酶发光强度.结论细菌荧光酶luxAB基因可作为一种新的灵敏和无伤害的报告基因在肝癌细胞的研究中应用.
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LuxAB标记的N2106-L在小麦根圈的定植动态
目的 研究小麦PGPR(植物根际促生菌)菌株的个体生态学及其在小麦根圈的定植动态.方法 采用三亲本杂交法将发光酶基因luxAB转入具有固氮能力的小麦根际促生菌Azotobacter N2106菌株中,获得标记菌株N2106-L,将标记菌株接种到灭菌和非灭菌的黄褐土、红壤和黄潮土中研究其存活状况,采用根盒试验追踪标记菌株在小麦根圈的定植动态.结果 标记菌株N2106-L具有发光活性和对km、str、tet三种抗生素的抗性,且具有较好的遗传稳定性.N2106-L在灭菌土壤中的数量稍高于非灭菌土壤;在3种土壤中的数量依次为:黄褐土>黄潮土>红壤.N2106-L在小麦根表定植密度大于根际定植密度;在小麦根际,小麦播种10 d时标记菌株在0～2 cm深度根际土壤定植达到大值(2.17±0.25)×106CFU/g土,20 d时在2～4 cm深度的根际土壤中达到高定植水平(3.92±0.47)×105CFU/g土;在小麦根表,标记菌株在小麦播种10 d时在所有深度的根段均达到高定植水平,0～2 cm根段定植密度为(3.60±0.60)×106CFU/g鲜根,12 cm以下根段达到(2.78±0.56)×104CFU/g鲜根.结论 标记菌株随着根的伸长不断向根尖方向扩散,且较为稳定地在小麦根圈定植,研究结果为小麦PGPR菌株的应用提供了可靠实验数据.
