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Ang1、Ang2及其受体Tie2在血管瘤组织中的表达及意义
目的 探讨血管瘤的血管生成与促血管生成素家族(Ang/Tie2)之间的关系.方法 通过免疫组化SP法、RT-PCR检测增生期血管瘤17例、消退期血管瘤13例和小儿正常皮肤10例的组织中促血管生成素1(Ang1)、促血管生成素2(Ang2)及其受体Tie2的表达情况.结果 增生期血管瘤组织Ang2、Tie2表达高于消退期血管瘤(P＜0.01);Ang2、Tie2在小儿正常皮肤表达较弱或阴性;Ang1在血管瘤和小儿正常皮肤表达均较弱或阴性,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ang/Tie2体系在血管瘤的增生和消退过程中可能起重要的作用.
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喉癌组织PTEN和Ang-2表达及其临床意义的研究
目的:探讨抑癌基因(PTEN)和促血管生成素2(Ang-2)在喉鳞状细胞癌、正常喉组织中的表达关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测30例喉鳞状细胞癌患者的病理标本及10例正常喉组织例标本中PTEN和Ang-2的表达.结果:PTEN阳性表达灰度值在癌组织中低于正常喉黏膜组织(P＜0.05),与组织分化程度有相关性,P＜0.031;Ang-2阳性表达灰度值在癌组织中明显高于正常喉黏膜组织(P＜0.041),与组织分化程度有相关性,P＜0.01.PTEN与Ang-2呈直线负相关.结论:在喉鳞状细胞癌发生的过程中,PTEN和Ang-2可能发生异常表达,对喉鳞状细胞癌发展作用不同,但与喉鳞状细胞癌的进展无关.
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头颈鳞状细胞癌Ang-2表达临床意义Meta分析
目的 血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)是调节肿瘤血管生成的重要因子,提示不良预后,但其与头颈鳞癌(head and neck squamous carcinoma,HNSCC)的关系尚不明确.本研究通过Meta分析探讨促Ang-2表达与HNSCC发生的相关性.方法 计算机检索EMbase、PubMed、Cocharance Library、CBM、CNKI、VIP和万方数据库,查找公开发表的关于Ang-2表达及其临床病理特征关系的病例-对照研究,检索时限从建库至2017-04.由2位评价员按照纳入与排除标准选择文献、提取资料和质量评估后,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析.结果终纳入11篇文献,其中HNSCC组676例,对照组183例.Meta分析结果显示,HNSCC组Ang-2表达高于正常对照组,OR=6.68,95％CI为4.43～10.08;而且HNSCC患者Ang-2阳性表达率与淋巴结转移(OR=2.29,95％CI为1.50～3.48)和肿瘤分期(OR=0.42,95％CI为0.21～0.86)呈正相关,但Ang-2阳性表达率与肿瘤组织的分化程度差异无统计学意义,OR=0.62,95％CI为0.28～1.40.结论 当前证据表明,Ang-2 通过运用自身调节血管生成的作用,可能参与了 HNSCC 发生、侵袭和转移,与 HNSCC 患者的不良预后有关.
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促血管生成素2及其受体Tie2基因RNA干扰表达载体的构建与鉴定
目的 构建促血管生成素2(Ang-2)及其受体Tie2基因的RNA干扰(RNAi)表达载体.方法 以Ang-2、Tje2的mRNA已知序列为靶点,化学合成能编码针对Ang-2、Tje2基因的短发夹RNA(shRNA)序列的寡核苷酸各2对,退火处理后克隆到pSilencer1.0-U6-siRNA表达载体的U6RNA聚合酶Ⅲ启动子的下游,构建重组质粒pSliencer-1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA.结果 将与目的 片段相符的双链shRNA和线性化的pSilencer 1.0-U6-siRNA质粒连接后,经限制性内切酶HindⅢ酶切电泳及测序分析证实,2条重组质粒载体构建正确,无任何碱基突变.结论 成功构建pSilencer 1.0-U6-Ang-2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,为进一步研究其对血管生成的作用打下基础.
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过表达缺氧诱导因子1α影响前列腺癌血管生成的体内研究
目的:观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在体内环境下对人前列腺癌血管形成的影响,并探讨其分子机制.方法:对构建的转染HIF-1α人前列腺癌LNCaP细胞(LNCaP/HIF-1α)复苏后培养,ELISA法检测转染前后培养液上清PSA水平;流式细胞术检测细胞周期;将转染前后的LNCaP细胞建立免疫裸鼠皮下肿瘤模型,观察肿瘤生长情况;收集肿瘤标本后针对肿瘤血管生成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF),诱导型一氧化氮合酶(iNOS),促血管生成素2(Ang-2)行免疫组化染色.结果:与LNCaP细胞相比,转染HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞培养液PSA水平明显降低(t=8.243,P<0.05);流式细胞术显示其更具有增殖活性.体内实验显示皮下肿瘤成瘤率提高,成瘤时间提前.LNCaP/HIF-1α免疫组化研究显示VEGF、iNOS、Ang-2表达较LNCaP组增强.结论:在体内环境下,HIF-1α过表达能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞血管形成相关蛋白VEGF、iNOS表达上调,提高肿瘤血管形成能力.并通过诱导肿瘤血管形成来增强肿瘤的侵袭转移能力;体内外实验显示HIF-1α可能对人前列腺癌LNCaP细胞Ang-2表达不产生影响,而在体内环境下Ang-2表达受其他因素调控.
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促血管生成素2和Endoglin与胎儿生长受限的相关性
目的 探讨促血管生成素2(Ang-2)和Endoglin(Eng)在孕妇血清中的水平和在胎盘组织中的表达与胎儿生长受限( FGR)发病的关系.方法 选取剖宫产分娩的FGR孕妇30例作为FGR组,同期剖宫产分娩的正常足月孕妇30例作为对照组.采用ELISA测定孕妇血清中Ang-2、可溶性Endoglin(sEng)的水平；采用SP检测胎盘组织中Ang-2、Eng的表达.结果 (1)FGR组血清Ang-2为(8.86±0.43) ng/ml,显著低于对照组的(19.31±0.25) ng/ml(P＜0.01);FGR组sEng为(4.63±0.09) ng/ml,显著高于对照组的(2.77±0.09) ng/ml(P＜0.01).FGR组胎盘组织Ang-2的表达为118.17±1.59,显著低于对照组的151.64±1.64(P＜0.01)；FGR组胎盘组织Eng的表达为106.04±1.12,显著高于对照组的92.64±1.26(P＜0.01).(2)FGR组胎盘组织中Ang-2的表达与孕妇血清Ang-2水平呈正相关(r=0.93,P＜0.01)；FGR组胎盘组织中Eng的表达与孕妇血清中sEng水平呈正相关(r=0.88,P＜0.01)；FGR组胎盘组织中Ang-2的表达与Eng的表达无相关性；FGR组孕妇血清Ang-2水平与sEng水平无相关性.结论 血清Ang-2水平和胎盘组织中表达显著降低,血清sEng和胎盘组织Eng表达水平显著升高可能参与了FGR的发病过程.
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胶质瘤促血管生成素2基因表达的临床意义(附52例分析)
目的探讨胶质瘤促血管生成素2(Ang2)基因在脑胶质瘤的表达及其临床意义.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和链酶亲和素过氧化物酶复合物SABC法检测52例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中Ang2基因表达.结果50例脑胶质瘤和8例正常脑组织均可表达Ang2 mRNA片段.高恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于低恶度胶质瘤(P＜0.01);低恶度胶质瘤Ang2 mRNA及蛋白表达显著高于正常脑组织(P＜0.05).免疫组化染色显示,Ang2蛋白主要分布在高恶度胶质瘤组织的瘤细胞和内皮细胞,低恶度胶质瘤呈低水平表达,正常脑组织不表达.结论Ang2的表达与胶质瘤的分级密切相关,可能对胶质瘤的恶性演进起促进作用.
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Ang-2和bFGF的表达对卵巢上皮性癌血管生成的影响
目的 探讨促血管生成素2(Ang-2)和碱性成纤维生长因子(bFGF)在卵巢上皮性癌(OEC)组织中的表达及其对血管生成的影响.方法 应用免疫组化SP法检测人卵巢上皮癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢中的Ang-2和bFGF,计数各组中的微血管密度(MVD).结果 Ang-2和bFGF在卵巢上皮性癌中的阳性表达率分别为69.6%、73.9%,在良性肿瘤组织中的阳性表达率分别为25.0%、16.7%;在正常卵巢组织的表达率均为0.卵巢上皮性癌组两个指标的阳性率均显著高于良性卵巢肿瘤组及正常对照组(P均＜0.05).卵巢上皮性癌中Ang-2和bFGF的表达与MVD呈正相关(r分别为0.8和0.6,P均＜0.05),且Ang-2和bFGF的表达亦呈正相关(r=0.8,P＜0.05).结论 Ang-2、bFGF在卵巢上皮性癌的表达升高,并与血管生成密切相关.
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Ang2-siRNA 慢病毒干预裸鼠移植性恶性黑色素瘤的研究
目的 研究血管生成素2小干扰 RNA(Ang2-siRNA)对裸鼠移植性恶性黑色素瘤血管形成及其生长的影响.方法 建立人恶性黑色素肿瘤裸鼠异种移植瘤模型.在体内使用 pNL-EGFP-Ang2-siRNA 慢病毒干扰裸鼠移植性恶性黑色素瘤 Ang2 基因的表达,观察统计各组肿瘤(空白组、空载组、实验组)生长情况.应用实时荧光定量 RT-PCR 检测肿瘤组织中 Ang2 基因的 mRNA 表达水平;CD34 单克隆抗体作为血管内皮标志物,免疫组织化学法检测其表达,以评价肿瘤微血管密度.结果 成功建立了恶性黑色素瘤裸鼠异种移植瘤模型,实验组肿瘤 Ang2 基因 mRNA 水平、微血管密度、肿瘤体积显著小于空白组和空载组(P<0.01),空白组和空载组之间无统计学意义 (P>0.05).结论 pNL-EGFP-Ang2-siRNA 慢病毒能沉默Ang2 的表达,显著抑制恶性黑色素瘤血管的形成和肿瘤的生长,可能为临床恶性黑色素肿瘤的基因治疗开辟新的途径.
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pSilencer1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒的构建及其在体外人脐静脉内皮细胞中抑制Ang2.Tie2基因的表达
目的 探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制Ang2、Tie2基因的表达情况,为进一步研究其在体外抑制血管生成以及抑制肿瘤血管生成的动物实验研究奠定基础.方法 构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条并予以鉴定.用pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用免疫细胞化学染色和RT-PCR方法检测各组HUVECs中Ang2及Tie2的蛋白及mRNA的表达状况.结果 成功构建pSilencer 1.0-U6-Ang2/Tie2-siRNA重组质粒各2条,用其转染HUVECs后,免疫细胞化学染色和RT-PCR检测结果显示,Ang2、Tie2在蛋白和mRNA的表达水平均受到明显抑制(P＜0.05),并且siRNA的2条重组质粒之间均差异无统计学意义(P＞0.05).结论 pSilencer 1.0-u6-Ang2/Tie2-siRNA在体外能够抑制HUVECs的Ang2和Tie2的蛋白及mRNA的表达.
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Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定
目的 构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达我体.方法 先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过Xba I酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP- U6- Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度.结果 成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过Xba I酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL.结论 成功构建了Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体.
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促血管生成素-2与糖尿病肾病关系的研究进展
糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)主要的微血管并发症之一,也是导致慢性肾功能衰竭的主要原因之一.如何阻止DN的发展是当今临床医学的重要难题.DN早期的病理特征是肾小球、肾小管细胞肥大伴基底膜增厚,临床表现为高滤过和微量蛋白尿[1].糖尿病肾病进展导致肾小球系膜基质增加,促进肾小球硬化和肾小球间质纤维化,使肾小球功能丧失并终导致终末期肾病.高糖可刺激氧自由基(Reactive oxygenspecies,ROS)的增加,高糖诱导肾内肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system,RAS)激活,导致氧化应激,过多ROS进一步激活RAS[2].
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肺癌患者血清中促血管生成素2的研究
目的 探讨促血管生成素2 (Ang-2)在肺癌患者中的筛查作用.方法 应用单克隆抗体微球免疫比浊法检测Ang-2的浓度水平,计算并比较其相应的敏感性和特异性,并与其他肿瘤标志物进行比较.结果 肺癌患者中,Ang-2与癌胚抗原(CEA)及CA125阳性率均较高,三者之间比较差异无统计学意义,与疾病对照组及健康对照组对比差异有统计学意义.甲胎蛋白(AFP)对肺癌的检测无统计学意义.结论 联合检测Ang-2、CEA、CA125,有助于提高肺癌的早期检出率.
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促血管生成素2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响
目的:探讨促血管生成素2 (angiopoietin2,Ang2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系；观察反义Ang2基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响.方法:用Western blot法检测Ang2蛋白在10例胃癌组织及10例正常胃黏膜组织中的表达,用免疫组化法检测53例不同病理分期的胃癌组织中Ang2蛋白的表达；应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的pEGFP-N 1-anti Ang2转染体外培养的人胃癌细胞SGC-7901,以空载体(pEGFP-N1)转染组和未转染组作对照,RT-PCR及免疫组化检测转染后Ang2基因及蛋白的表达,MTT法和流氏细胞仪(flow cytometry,FCM)检测反义Ang2基因转染对细胞生长和细胞凋亡的影响;分别用上述3组细胞注射于裸鼠皮下,对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量.结果:Ang2蛋白在正常胃黏膜组织中不表达,在不同病理分期的胃癌组织中均呈阳性表达(F=166.76,P＜0.000 1)；RT-PCR及免疫组化显示反义Ang2基因转染组无Ang2 mRNA及Ang2蛋白的表达,MTT法检测显示反义Ang2基因转染组细胞体外增殖能力明显低于其他两组(F=10.39,P=0.002 4),FCM检测显示其活细胞比率明显低于其他两组(x2=3 188.980 5,P＜0.000 1)；转染了反义Ang2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢[第6天(F=10.18,P=0.000 5)、第18天(F=7.80,P=0.002 1)及第30天(F=79.58,P＜0.000 1)],肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少[第1周(F=15.18,P＜0.000 1)、第2周(F=3.50,P=0.044 4)、第3周(F=39.02,P＜0.000 1)].结论:胃癌组织中Ang2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵袭能力密切相关；反义Ang2基因转染可封闭人胃癌细胞SGC-7901中Ang2 mRNA及Ang2蛋白的表达,抑制其体外生长,促进其凋亡；并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用.
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反义促血管生成素2基因稳定转染对人胃癌细胞SGC-7901体外生长的抑制作用
目的:观察以pEGFP-N1为载体的促血管生成素2(angiopoietin2,Ang2)反义基因转染的人胃癌细胞SGC-7901中Ang2蛋白的表达,研究其对人胃癌细胞体外生长的抑制作用.方法:应用重组质粒转染反义Ang2的pEGFP-N1载体(pEGFP-N1-anti Ang2)、pEGFP-N1空载体质粒以脂质体转染法转染体外培养的人胃癌细胞株,以未转染组为对照,经G418筛选抗性克隆,扩大培养后,应用RT-PCR技术与免疫组化法检测Ang2基因及其蛋白的表达,MTT法分析细胞生长抑制作用,AnnexinV-FITC和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:RT-PCR与免疫组化均示pEGFP-N1-anti Ang2转染组无Ang2 mRNA及其Ang2蛋白的表达,MTT检测表明pEGFP-N1-anti Ang2转染组活细胞数较其它两组均低,差异有统计学意义(F=10.39,P=0.002 4),流式细胞仪检测则显示其凋亡率较其它两组明显增高,差异有统计学意义(x2=3 188.98,P＜0.000 1).结论:pEGFP-N1-anti Ang2成功转染人胃癌细胞SGC-7901且可封闭Ang2 mRNA表达,使已转染pEGFP-N1-anti Ang2的人胃癌细胞Ang2蛋白的表达减少,并抑制人胃癌细胞的恶性表型.
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Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌患者血循环中的表达及临床意义
目的 探讨Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)患者血循环中的表达及其临床意义.方法 应用酶联免疫吸附试验检测2009年5月至2010年6月本科收治的低分化鳞状细胞癌患者68例,其中男性52例,女性16例,中位年龄42(19 ～65)岁(初治32例,完全缓解20例,复发16例)及20例健康对照者血清Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2水平.结果 初治组和复发组NPC患者血清Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2的水平均高于完全缓解组及健康对照组(P＜0.01),而这些分子的含量在完全缓解组和健康对照组比较无明显差异(P＞0.05).Ang-2及Tie-2的水平在NPC患者不同T分期、临床分期比较有差异(P＜0.05),并随着NPC进展呈上升趋势；Ang-1水平在不同T分期、临床分期比较差异不显著(P＞0.05)；Ang-2水平在不同N分期比较有差异(P＜0.05).转移NPC患者血清Ang-2及其受体Tie-2水平明显高于无转移组(P＜0.01).Ⅰ+Ⅱ期NPC患者血清Ang-1/Ang-2比值高于Ⅲ+Ⅳa期(P＜0.01).结论 Ang-1和Ang-2及其受体Tie-2在鼻咽癌的发生、发展过程中起重要作用,并与肿瘤的侵袭转移有密切关系.
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局部注射促血管生成素2调控自噬促进体内组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复的研究
目的 探讨兔桡骨骨缺损处局部注射促血管生成素2 (angiopoietin 2,Ang-2),通过调控自噬促进组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复的机制.方法 取48只新西兰大白兔,构建单侧1.5 cm长桡骨缺损模型,于骨缺损处植入羟基磷灰石/胶原支架后,随机分为两组,对照组(A组)和Ang-2组(B组)分别于术后2周内每日于骨缺损处注射1 mL生理盐水和1 mL溶于生理盐水的400 ng/mL Ang-2.采用Western blot检测骨痂区自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3 (microtubule associated protein 1 lightchain 3,LC3)和Beclin-1,血管生成相关蛋白VEGF及自噬降解底物蛋白SQSTMl/p62的表达.术后4、8、12周行X线片检查,采用Lane-Sandhu X线评分法对骨缺损修复情况进行评分;术后12周处死动物取标本行大体观察,采用HE染色观察骨缺损区血管生成情况.结果 Western blot检测示,B组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1及VEGF相对表达量高于A组,SQSTMl/p62相对表达量低于A组,差异均有统计学意义(P＜0.05).影像学及标本大体观察示A组仅有少量骨痂生成,但骨缺损未修复;B组新生骨痂较多,骨缺损处完全修复.术后4、8、12周B组Lane-Sandhu评分均显著高于A组(P＜0.05).HE染色示B组哈佛管排列整齐,新生血管显著多于A组,差异有统计学意义(t=-11.879,P=0.000).结论 局部注射适宜浓度Ang-2可能通过增强自噬促进兔体内组织工程人工骨早期血管化和骨缺损修复.
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Ang-2在大鼠内毒素性急性肺损伤中的作用
目的:探讨促血管生成素2 (Ang-2 )在不同程度急性肺损伤(ALI)中的作用.方法:清洁级SD大鼠共40只, 随机分为4组: 正常对照组, 不同剂量大肠杆菌脂多糖(LPS)组(3个剂量组: 2 mg/kg、 4 mg/kg及8 mg/kg), 每组平均10只.HE染色光镜观察肺组织标本病理改变并进行肺损伤评分, Western blot检测各组大鼠血浆中Ang-2的表达情况.结果:LPS可致肺泡间隔增宽、出血及大量炎性细胞浸润等急性肺损伤病理改变, LPS各组的肺损伤评分明显高于正常对照组(P<0.01);LPS不同剂量与肺损伤评分呈量效依赖关系(P<0.05).LPS不同剂量组的血浆中Ang-2蛋白表达较空白对照组增高(P<0.01), LPS不同剂量与Ang-2蛋白表达水平呈量效依赖关系(P<0.05).血浆中Ang-2的蛋白表达与肺组织炎症程度积分呈正相关(r=0.862, P<0.05).结论:Ang-2参与大鼠内毒素性急性肺损伤的病理过程, 且血浆Ang-2水平与急性肺损伤程度呈正相关.
