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Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

郑厚兵;单秀英;刘照亮;王彪;郭国祥;张炜强;庄福连

摘要: 目的 构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达我体.方法 先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过Xba I酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP- U6- Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度.结果 成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过Xba I酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL.结论 成功构建了Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体.

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