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血管生成素及其受体Tie2在婴幼儿血管瘤表达的研究
目的 研究婴幼儿血管瘤血管内皮细胞血管生成素及其受体Tie2的表达情况,初步探讨婴幼儿血管瘤生长异常的病理生理学机制,为其治疗奠定理论基础.方法 以40例血管瘤患儿手术切除的血管瘤组织为研究对象,其中增生期和消退期标本各20例,另取正常皮肤组织(包茎患儿包皮环切术切除的包皮组织)20例作为正常对照.应用半定量PCR技术检测血管生成素-1(Ang1)、血管生成素-2(Ang2)及其受体Tie2 mRNA表达情况;应用Western blotting技术检测Ang1、Ang2及其受体Tie2蛋白表达情况.结果 Rt-PCR和Westem blotting结果均显示:在增生期和消退期瘤体中,Angl mRNA和蛋白的表达量明显低于正常包皮组织,P ＜0.05;Ang2和Tie2 mRNA和蛋白的的表达量明显高于正常包皮组织,P＜0.05;三者的表达在增生期和消退期瘤体之间没有统计学差异,P ＞0.05.结论 婴幼儿血管瘤中存在Ang1、Ang2和Tie2的异常表达,可能参与了血管瘤的发生与发展机制.
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Tie2受体在人肝癌的表达及其与血管生成和肿瘤发展的关系
目的探讨Tie2受体在肝癌血管生成中的作用.方法检测CD34、Tie2受体在22例人肝细胞性肝癌、8例门脉性肝硬化和5例正常肝脏的表达,并对Tie2表达水平与肿瘤生物学行为的关系进行分析.结果(1)CD34在正常肝脏无表达,在肝硬化肝脏偶见,在肝癌表达明显增加(P＜0.01);(2)Tie2受体在正常肝脏无表达,在肝硬化肝脏偶见(11.3±8.7/HP),在肝癌微血管内皮大量表达(52.4±16.7/HP,P＜0.01).(3)Tie2表达水平和肝癌直径、血管生成、门静脉侵犯相关,而与肿瘤包膜浸润、组织学分级、复发无关.结论人肝细胞肝癌血管生成增加,Tie2受体和肝癌血管生成、肝癌大小、血管侵犯等相关,Angiopoietin/Tie 2可能参与肝癌血管生成的调节.
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Ang1、Ang2及其受体Tie2在血管瘤组织中的表达及意义
目的 探讨血管瘤的血管生成与促血管生成素家族(Ang/Tie2)之间的关系.方法 通过免疫组化SP法、RT-PCR检测增生期血管瘤17例、消退期血管瘤13例和小儿正常皮肤10例的组织中促血管生成素1(Ang1)、促血管生成素2(Ang2)及其受体Tie2的表达情况.结果 增生期血管瘤组织Ang2、Tie2表达高于消退期血管瘤(P＜0.01);Ang2、Tie2在小儿正常皮肤表达较弱或阴性;Ang1在血管瘤和小儿正常皮肤表达均较弱或阴性,二者比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Ang/Tie2体系在血管瘤的增生和消退过程中可能起重要的作用.
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血管生成素及其Tie2受体在血管瘤中表达的实验研究
目的 检测血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang-1)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)及其Tie2受体在人体血管瘤裸小鼠移植模型中的表达.方法 以裸小鼠为载体,将人体血管瘤组织块移植于裸小鼠的皮下建立动物模型,任其自然生长.于移植后第56、第120 天各切取12个移植成活瘤体作RT-PCR荧光定量检测、Western blot免疫印迹和免疫组织化学检测.结果 成功建立人体血管瘤裸小鼠移植模型,进一步证实该模型的真实、可靠性.在增生期和消退期移植瘤中,Ang-1的表达低于正常包皮组织,Ang-2和Tie2的表达明显高于正常包皮组织.在移植瘤内发现血管发生这种原始血管生成方式.结论 Ang-1,Ang-2及Tie2 受体在人体血管瘤裸小鼠移植模型中呈异常表达,移植瘤内存在血管发生这种原始的血管生成方式,提示婴幼儿血管瘤可能不是一种真性肿瘤,而是一种血管生成异常疾病.
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血管生成素受体Tie2甲基化变异在婴幼儿血管瘤中的表达和意义
[目的]通过对血管生成素受体Tie2在血管瘤组织的表达及其甲基化状态的测定,初步探讨其与婴幼儿血管瘤发生、发展的关系.[方法]收集60例血管瘤患儿手术切除的血管瘤标本(其中增生期和消退期标本各30例)及30例正常皮肤组织(包茎患儿包皮环切术切除的包皮组织).应用甲基化特异性PCR(methylation-specfic PCR,MSP)测定Tie2基因甲基化状态;应用qPCR 、Westem blotting检测Tie2 mRNA和蛋白表达水平.[结果]30例增生期血管瘤组织、30例消退期血管瘤组织及30例对照组织中Tie2基因启动子区CpG岛发生甲基化的例数分别为25、14、0例.3组Tie2基因甲基化发生率分别为84.70％、46.64％、0.增生期血管瘤组织甲基化发生率显著高于消退期血管瘤和对照组,差异有显著统计学意义(P＜0.01),消退期血管瘤组织甲基化发生率显著高于对照组,差异有显著统计学意义(P＜0.01);在增生期和消退期瘤体中Tie2 mRNA和蛋白的表达量明显高于正常包皮组织(P＜0.05),其表达在增生期和消退期瘤体之间没有统计学差异(P＞0.05).[结论]婴幼儿血管瘤中存在Tie2基因异常甲基化,且其表达升高,可能参与了血管瘤的发生与发展机制.
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心肌梗死大鼠血管生成过程中血管生成素1及其Tie2受体的表达
目的:通过检测正常心肌组织及心肌梗死后血管生成素1及其受体Tie2受件mRNA的表达水平,探讨其在心肌梗死后的血管新生过程的作用.方法:实验于2006-04/2007-04在北京大学医学部生物化学与分子生物学基因组实验室完成.将40只雄性SD大鼠随机分为急性心肌梗死组和假手术组,急性心肌梗死组通过结扎前降支建立心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎.于术后3,7,14,28d旭个时间点,每组取5只处死,取心脏左室裁壁同一部位,提取总RNA,用RT-PCR的力法,以GAPDH基因为内参,进行半定量分析检测正常心脏及梗死后血管生成素Ⅰ及Tie2 mRNA的表达;同时用免疫组化的方法检测各时间点梗死区域以及梗死周边区域血管数量.实验过程中动物处置符台动物伦理学标准.结果:40只大鼠进入结果分析.血管生成素1及Tie2在正常心肌组织中均有所表达.在心肌梗死后的28d内,血管生成素1维持在相对不变的水平,而ne2的表选在心肌梗死后3 d略有升高,于7 d后达顶峰,14 d后恢复正常;急性心肌梗死后7 d,梗死区及梗死周边区域的血管数量均明显增多,并不随时间的延长而改变,维持在同一水平.结论:心肌梗死后Tie2受体的表达上调,与血管生成的时间相吻合,提示其在心肌梗死后的血管生成和稳定过程中起了一定的作用.
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Tie2基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定
目的 构建并鉴定Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达我体.方法 先构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,通过Xba I酶切电泳及测序鉴定,再以pNL-EGFP- U6- Tie2-siRNA慢病毒转移质粒,pVSVG包膜质粒和pHelper包装质粒三质粒共转染293T细胞,产生慢病毒,收集病毒上清液并测定病毒滴度.结果 成功构建pNL-EGFP-U6-Tie2-siRNA慢病毒转移质粒2条,通过Xba I酶切及测序鉴定,Tie2-siRNA核苷酸序列插入正确,利用三质粒慢病毒包装系统生产EGFP-Tie2-siRNA病毒,收集病毒上清,并测得病毒滴度为9×103/μL.结论 成功构建了Tie2基因的RNA干扰慢病毒表达载体.
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血管生成素/Tie2受体通路与白血病的关系
血管生成素(Angs)家族是新近发现的促血管新生因子家族,有4个成员Angl,Ang2,Ang3和Ang4.研究发现血管生成素在白血病肿瘤血管新生中发挥重要作用,已成为白血病独立的预后因子.
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Ang/Tie2体系与VEGF、bFGF在血管瘤增生退化过程中的协同作用
目的:探讨促血管生成素家族(Ang/Tie2)与血管内皮生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在血管瘤增生退化过程中的协同作用.方法:采用免疫组化SP法,检测增生期血管瘤32例、退化期血管瘤1 0例及小儿正常皮肤10例标本中促血管生成素1(Ang1)、促血管生成素2(Ang2)及其受体Tie2、VEGF及bFGF的表达情况.结果:增生期血管瘤组织Ang2、Tie2、VEGF及bFGF表达明显高于消退期血管瘤(P＜0.01);消退期血管瘤组织Ang2、Tie2、VEGF及bFGF表达明显高于小儿正常皮肤(P＜0.01);Ang1在血管瘤和小儿正常皮肤表达均较弱,各组之间的比较无显著性差异(P□0.05);血管瘤中Ang2、Tie2分别与VEGF、bFGF标记指数间具有强的正相关性(P＜0.01).结论:Ang/Tie2体系与VEGF、bFGF在血管瘤增生退化过程中可能起协同的作用.
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Tie2受体在直肠癌组织中的表达与调控作用
目的:探讨Tie2在直肠癌中的表达及其与血管生成的关系.方法:利用免疫组化S-P法,对40例直肠癌组织中的Tie2受体表达进行研究.结果:Tie2受体定位于癌组织中内皮细胞胞浆及胞核,部分癌细胞胞浆也存在阳性表达,直肠癌组织中的Tie2表达阳性率明显高于正常直肠组织(P＜0.05),Tie2受体的表达与临床病理中的分化程度、浸润深度、Dukes 分期无关(P>0.05),而与淋巴转移相关(P＜0.05).结论:Tie2受体在直肠癌肿瘤组织的生成、分化、生长过程中具有重要调控作用.
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内皮抑素在直肠癌中的表达与血管生成的关系
目的:探讨内皮抑素(Endostatin)在直肠癌中的表达及其与血管生成的关系.方法:利用免疫组化S-P法,对40例直肠癌组织中的Endostatin表达进行研究.结果:Endostatin定位于癌组织中血管内皮细胞胞浆及胞膜,部分癌细胞胞浆也存在阳性表达,直肠癌组织中的Endostatin表达阳性率与正常直肠组织无明显差异(P》0.05),Endostatin表达与直肠癌临床病理中的分化程度、浸润深度无关(P》0.05),而与淋巴转移、Dukes分期相关(P《0.05).结论:Endostatin在直肠癌的血管生成调控中具有重要作用.
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血管生成素受体Tie2在直肠癌中的表达及作用
目的 探讨Tie2在直肠癌中的表达及其与直肠癌侵袭、转移的关系.方法 利用免疫组化S-P法,对10例正常直肠组织与40例直肠癌组织中的Tie2受体表达进行研究.结果 Tie2受体定位于癌组织中血管内皮细胞胞浆及胞核,部分癌细胞胞浆也存在阳性表达,直肠癌组织中的Tie2表达阳性率明显高于正常直肠组织(P＜0.05),Tie2受体的表达与临床病理中的分化程度、浸润深度、Dukes分期无关(P＞0.05),而与淋巴结转移相关(P＜0.05).结论 Tie2受体在直肠癌的发展及淋巴结转移中具有重要意义.
