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S mad交互蛋白1在增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响
目的：研究Smad 交互蛋白1（SIP1）在人增生性瘢痕组织中的表达及其对纤维化相关因子的影响。方法收集临床整形手术切取的9例患者增生性瘢痕标本及其自体正常皮肤标本。分离培养原代人增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs），取第3～5代细胞用于实验。（1）免疫组织化学法检测增生性瘢痕组织标本及其自体正常皮肤组织标本中SIP1的表达情况。（2）真核表达质粒pcDNA 3．1（＋）/SIP1转染HSFBs。按照随机数字表法将细胞分为6组：对照组；pcDNA3．1（＋）组（空载体组）；pcDNA3．1（＋）/SIP1组；对照＋TGF-β1组；pcDNA3．1（＋）＋TGF-β1组；pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组。于转染后第48 h和72 h分别提取细胞总RNA和细胞总蛋白。应用实时荧光定量PCR法检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及结缔组织生长因子（CTGF）的mRNA表达水平；采用Western-blotting检测α-SMA的蛋白表达水平。结果（1）免疫组织化学染色结果显示：增生性瘢痕组织中SIP1表达明显低于自体正常皮肤组织。（2）pcDNA3．1（＋）/SIP1转染HSFBs后纤维化相关因子的表达：①α-SMA的mRNA和蛋白表达水平：与对照组和pcDNA3．1（＋）组相比，pcDNA3．1（＋）/SIP1组在 mRNA和蛋白表达水平均显著下调，差异有统计学意义（P＜0．05）。当细胞给予TGF-β1刺激后，各组α-SMA表达均上调，但pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA和蛋白表达水仍低于对照＋TGF-β1组，差异有统计学意义（P＜0．05）。② CTGF的mRNA表达水平：与对照组和pcDNA3．1（＋）组相比，pcDNA3．1（＋）/SIP1组在mRNA表达水平显著下调，差异有统计学意义（P＜0．05）。当细胞给予TGF-β1刺激后，各组CTGF表达均显著上调，但pcDNA3．1（＋）/SIP1＋TGF-β1组mRNA表达水仍低于对照＋TGF-β1组，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论与正常皮肤组织相比较，SIP1在增生性瘢痕组织中低表达。SIP1基因转染 HSFBs 可降低纤维化相关因子α-SMA 和CTGF的表达，有利于抑制瘢痕形成和减轻挛缩。
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增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的研究
目的:研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异.方法:应用消化法建立成纤维细胞系,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线,测定细胞生长速度.结果:增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤维细胞胞体大,形态不规则.前者细胞倍增时间约为6d,后者细胞倍增时间为3d.细胞融合后前者细胞数为后者的56%.结论:增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞是两种不同基因表现型的细胞.
关键词： 增生性瘢痕成纤维细胞 正常皮肤成纤维细胞 形态学 生长特性 -
苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞抑制增殖和促进凋亡的实验观察
目的研究苦参碱(matrine,Mat) 对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期和细胞核内增殖 性抗原(proliferating cell nuclear antigen ,PCNA) 的表达影响.方法将不同浓度梯度 Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、 DNA相 对含量,利用用免疫组织化学的检测 PCNA的表达.结果不同浓度梯度的 Mat作用增生性瘢痕成 纤维细胞 72 h后,出现 G0～ G1期细胞数量明显增加,S期细胞、 G2～ M期细胞明显减少,DNA相 对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱,(P< 0.01).结论 Mat能明显抑制增生性瘢痕成纤 维细胞的增殖活性和细胞的有丝分裂,但对 DNA含量无明显影响 .
关键词： 苦参碱 增生性瘢痕成纤维细胞 细胞周期 增殖性细胞核抗原 -
苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞周期和 PCNA表达的影响
目的研究苦参碱 (Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞周期和细胞核内增殖性抗原 (Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)的表达影响 . 方法将不同浓度梯度 Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞 , 利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、 DNA相对含量 , 利用免疫组织化学的方法检测 PCNA的表达 . 结果不同浓度梯度的 Mat作用增生性瘢痕成纤维细胞 72 h后 , 出现 G0～ G1期细胞数量明显增加 , S期细胞、 G2～ M期细胞明显减少 , DNA相对含量无明显变化 , PCNA表达逐渐减弱 (P<0.01). 结论 Mat能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性和细胞有丝分裂 , 但对 DNA含量无明显影响 .
关键词： 苦参碱 增生性瘢痕成纤维细胞 细胞周期 增殖性细胞核抗原 -
粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达和意义
目的 探讨粘着斑激酶(FAK)在增生性瘢痕成纤维细胞(HSFB)中的表达和意义.方法 运用细胞免疫组化技术,测定HSFB和正常皮肤成纤维细胞(NSFB)中的FAK、整合素α1、转化生长因子受体1(TGF-βR1)及α肌动蛋白(α-SMA)的表达;同时将HSFB分别用抗FAK、整合素α1、TGF-βR1及α-SMA抗体进行阻断培养,并测定培养前后整合素α1、TGF-βR1、α-SMA及FAK的表达.结果 与NSFB相比,HSFB中的FAK、整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达增高,差异具有显著意义(P＜0.05).分别用抗整合素α1、TGF-βR1、α-SMA抗体进行阻断培养后,HSFB中的FAK表达下降(P＜0.01);阻断FAK表达也可分别导致了整合素α1、TGF-βR1、α-SMA的表达降低(P＜0.01).结论 FAK对整合素α1、TGF-βR1及α-SMA的蛋白合成具有重要的调控作用,与增生性瘢痕的发生、发展关系密切.减少FAK在成纤维细胞中的过度表达,可能是抑制瘢痕增生、软化瘢痕的新途径.
关键词： 增生性瘢痕成纤维细胞 粘着斑激酶 整合素α 转化生长因子受体1 α肌动蛋白 -
甲基莲心碱对增生性瘢痕成纤维细胞Bcl-2、Bax及Caspase-3表达影响的研究
目的:研究甲基莲心碱对增生性瘢痕成纤维细胞中Bcl-2、Bax及Caspase-3 中mRNA和蛋白表达的影响.方法:体外培养增生性瘢痕成纤维细胞及正常皮肤组织,随机分为4组:对照组、甲基莲心碱低、中、高剂量组(5、10、20μg/ml).各组分别加入不同浓度药物培养24h后,采用RT-PCR检测Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA的表达,并运用Western Blot检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达.结果:与对照组相比,低剂量组Bcl-2、Bax及Caspase-3 mRNA表达量均无明显变化(P>0.05);中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达量明显降低,Bax及Caspase-3 mRNA表达量明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).与对照组相比,低剂量组Bcl-2蛋白表达量无明显变化,中、高剂量组Bcl-2蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量组Bax及Caspase-3蛋白表达量均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论:甲基莲心碱能上调增生性瘢痕成纤维细胞中Bax、Caspase-3的表达,同时下调Bcl-2的表达.
关键词： 甲基莲心碱 增生性瘢痕成纤维细胞 Bcl-2 Bax Caspase-3 -
苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响
目的:探讨苦参碱(Matrine,简称Mat)的药理活性,研究苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,为皮肤损伤后出现的增生性瘢痕的治疗提供理论支持及实验依据.方法:将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,测MTT反应的A0值及LDH值,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量,用免疫组织化学检测Mat用药前后的细胞核内增殖性抗原(proliferatingcell nuclear antigen,PCNA)的表达.结果:增生性瘢痕成纤维细胞在一定范围内呈剂量依赖性增殖抑制,但LDH值无明显改变；DNA相对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱.结论:Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖而不引起细胞坏死性改变,但对DNA含量无明显影响.
关键词： 苦参碱 增生性瘢痕成纤维细胞 -
PPARγ激动剂对增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1和Smad信号途径的作用研究
增生性瘢痕是以成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度沉积为主要特征的结缔组织疾病.其发病机制至今尚未彻底阐明.目前已知,转化生长因子(TGF)β1是主要致纤维化因子之一,Smad是参与TGF-β主要信号转导途径,Smad2和Smad3磷酸化参与其信号转导.
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P物质抑制剂辣椒素和bFGF抗体对增生性瘢痕成纤维细胞增殖协同抑制作用的实验研究
目的:探讨P物质抑制剂-辣椒素及bFGF抗体单独或联合使用对体外培养的人体增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响.方法:体外培养12例增生性瘢痕组织的成纤维细胞,分别加入不同浓度的辣椒素或/和bFGF抗体,培养24h后观察细胞形态学变化,并用MTT法检测细胞增殖抑制率.结果:所有不同浓度的辣椒素(2.5,5,20,40,60,80mg/L)均能使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用随剂量增大而增加.中高浓度bFGF抗体(40,80mg/L)也可促使细胞皱缩、坏死,抑制细胞增殖,其抑制作用也随剂量增大而增加.辣椒素与bFGF抗体联合应用对成纤维细胞抑制作用较单独使用效果更显著(P□0.05).结论:辣椒素及bFGF抗体可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其抑制作用随浓度增加而增加,两者联合使用有协调作用,本研究结果可能在增生性瘢痕的治疗提供新的思路和手段.
关键词： P物质抑制剂(辣椒素) 抗bFGF抗体 增生性瘢痕成纤维细胞
