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一氧化氮合酶抑制剂对软骨修复组织胶原表达的影响
目的 探讨应用苦味酸-天狼猩红染色观察诱导型一氧化氮合酶(Inos)抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响及胶原定量表达的新方法.方法 24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损,随机均分为对照组、骨形态发生蛋白(BMP)组和iNOS抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)组.术后16周及1年各组分别处死4只动物.应用苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量.结果 图像分析结果经GLM-General Factorial ANOVA作均数的显著性检验,显示术后16周SMT组Ⅰ型胶原表达量为61.8%,明显少于BMP组的83.6%,和对照组的89.4%相比,差异有统计学意义(F=23.562);术后1年SMT组Ⅰ型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组88.5%和对照组94.6%,差异有统计学意义(F=36.747).术后16周SMT组Ⅱ型胶原表达量为36.5%,明显多于BMP组12.6%和对照组8.2%,差异有统计学意义(F=68.326);术后1年SMT组Ⅱ型胶原30.7%的表达量多于BMP组的10.8%和对照组的4.5%,差异有统计学意义(F=83.876).术后16周及1年后SMT组软骨厚度(2.08±0.6,1.85±0.56),与BMP组(1.56±0.38,0.67±0.31)和对照组(0.64±0.43,0.24±0.10)相比,差异有统计学意义(F值分别为57.836,45.087).结论 iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加Ⅱ型胶原表达和软骨厚度,对于维持软骨表型有积极意义.而苦味酸-天狼猩红染色是一种观察软骨修复组织中胶原表达的理想方法.
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S-甲基异硫脲对大鼠门脉高压症食管静脉曲张的影响
目的 观察诱导型一氧化氮合酶抑制剂SMT对大鼠门脉高压症食管静脉曲张的影响.方法健康雄性SD大鼠60只随机分为5组,假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组.假手术组仅分离门静脉、左肾上腺静脉关腹,其余组门脉缩窄两步法加左肾上腺静脉结扎,建立门脉高压症食管静脉曲张模型.假手术组与模型组手术后给予腹腔注射生理盐水,其余3组手术后给予腹腔注射不同浓度SMT.手术后21 d,检测大鼠门脉血中TNOS、iNOS的活性及NO的浓度,免疫组化CD34标记食管血管内皮,测量每组大鼠食管横切面黏膜下血管的数目、面积.结果 模型组大鼠门脉血中TNOS活性与iNOS活性以及NO浓度和食管黏膜下血管数目,血管平均截面积,血管总面积均较假手术组显著升高(P＜0.01).中、高剂量组大鼠门脉血中TNOS活性与iNOS活性以及NO浓度和食管黏膜下血管的数目、血管平均面积、血管总面积较模型组均显著下调(P≤0.01).结论 大鼠门脉高压食管静脉曲张的发病机制中有NO参与,门脉缩窄型门脉高压食管静脉曲张病中NO主要由iNOS生成,SMT对大鼠门脉高压食管静脉曲张可能具有一定保护作用.
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一氧化氮合酶抑制剂在实验性兔关节软骨修复中的作用
目的探讨一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂S-甲基异硫脲在实验性关节软骨修复中的作用.方法 20只新西兰兔随机分为对照组和实验组,在双侧股骨髁间滑车关节面作全层软骨缺损.对照组应用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填缺损;实验组同样充填缺损后,并皮下注射iNOS抑制剂S-甲基异硫脲.术后16周处死动物,作修复组织质量评价;天狼猩红-苦味酸染色检测Ⅰ型和Ⅱ型胶原分布;反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测iNOS和MMP-9 mRNA基因表达,BrdU检测软骨细胞增生情况,并利用图像仪进行分析.结果形态学观察证实,术后16周,实验组关节软骨缺损修复在评分方面优于对照组(P＜0.05);天狼猩红-苦味酸染色显示实验组Ⅰ型胶原明显少于对照组,Ⅱ型胶原多于对照组;术后16周RT-PCR在对照组检测到iNOS mRNA和MMP-9 mRNA表达,实验组仅检测到少量MMP-9 mRNA表达.实验组BrdU阳性细胞8.5个/m2明显多于对照组3.2个/m2.结论 iNOS抑制剂S-甲基异硫脲的合理应用可明显提高软骨修复组织的质量.
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双膦酸盐药物与一氧化氮合酶抑制剂治疗骨质疏松大鼠的实验研究
目的 实验研究阿仑膦酸钠(ALN)与S-甲基异硫脲(SMT)治疗骨质疏松大鼠的效果.方法 将50只雌性SD大鼠(6月龄)分为5组,每组10只,分别为假手术组(Sham组),卵巢切除术后(OVX)的OVX组,ALN单独用药组,SMT单独用药组,ALN+SMT联合用药组.其中Sham组和OVX组腹腔注射生理盐水.药物治疗4周,麻醉后取血,脱颈处死.取胫骨、股骨,去净软组织.分别行血生化骨代谢指标检测、Mi croCT扫描、骨组织计量学测量.结果 单独给予ALN或SMT,各项检测结果接近或好于Sham组,差异无统计学意义.结论 3组药物治疗骨质疏松大鼠的疗效肯定,单独用药疗效好,且2种药物间差异无统计学意义；联合用药的疗效无累加效果.
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S-甲基异硫脲对大鼠门脉高压性胃病的影响
目的:观察使用诱导型一氧化氮合酶抑制剂对大鼠门脉高压性胃病的影响.方法:健康雄性SD大鼠60只随机分为5组,空白组、对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组.空白组分离门静脉、关腹,其余组门脉缩窄法造门脉高压性胃病模型.空白组与对照组手术后腹腔注射生理盐水,其余3组手术后腹腔注射不同浓度SMT.术后14 d,检测每组大鼠门脉血和胃壁组织Total Nitric Oxide Synthase(TNOS)、Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS)的活性及NO的浓度,免疫组化CD34标记胃血管内皮,测量每组大鼠胃黏膜下血管数目、面积.结果:对照组大鼠门脉血及胃壁组织TNOS活性、iNOS活性、NO浓度、胃黏膜下血管直径及血管总面积较空白组显著升高(P<0.01).中、高剂量组大鼠门脉血及胃壁组织TNOS活性、iNOS活性、NO浓度、胃黏膜下血管直径及血管总面积较对照组均显著下调(P<0.05).结论:大鼠门脉高压性胃病发病机制中有NO的参与,在门脉缩窄型门脉高压性胃病中NO主要由iNOS生成,SMT对大鼠门脉高压性胃病可能具有一定保护作用.
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S-甲基异硫脲对脂多糖诱导多巴胺能神经元变性的保护作用
目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂S-甲基异硫脲(S-methylisourea,SMT)对脂多糖(lipopo1ysaccharide,LPS)诱导多巴胺(DA)能神经元变性的保护作用及其机制.方法48只大鼠随机分成4组(n=12):磷酸缓冲液(PBS)对照组、LPS组、生理盐水治疗对照组和SMT治疗组;此4组又各分成1,7 d两个亚组.立体定向注射5μg LPS致大鼠脑黑质建立PD炎症模型,采用化学比色法检测1 d亚组黑质内NO释放量以及iNOS活性改变;RT-PCR检测iNOS mRNA的表达;酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察7d亚组黑质DA能神经元的损伤情况.结果与PBS对照组相比,LPS注人黑质导致TH阳性细胞数下降至35%(P＜O.05);同时黑质内NO含量,iNOS活性及iNOS mRNA表达明显增高;SMT治疗组NO释放量,iNOS活性及iNOS mRNA表达显著降低(P＜0.01);TH阳性细胞数亦明显增多,达70%(P＜0.05),生理盐水治疗组对此无明显改善.结论iNOS上调是LPS诱导DA能神经元变性机制中重要的因素之一,iNOS特异性抑制剂SMT可以显著抑制LPS诱导DA能神经元变性及iNOS mRNA的高表达.
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一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨缺损修复影响的形态学研究
目的探讨诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂S-甲基异硫脲(SMT)对关节软骨修复的影响.方法将20只新西兰大白兔双侧股骨髁关节面造成全层软骨缺损.随机分为2组:对照组10例,缺损软骨面用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填;给药组10例,缺损软骨面用纤维蛋白凝胶BMP复合物充填后,皮下注射SMT(5 mg*kg-1*12 h-1).术后8周、16周、1年处死动物,按组织形态学分级标准,双盲法行16周和1年修复组织评价;化学比色法检测修复组织NO释放量和NOS活性.结果形态学观察证实,术后8周、16周及1年后,给药组软骨缺损修复在缺损区结构、细胞形态和基质染色等评分方面优于对照组(P<0.05).术后16周及1年对照组NO释放量和NOS活性明显高于给药组(P<0.05).结论 iNOS抑制剂SMT可减少NO释放,降低iNOS活性,提高软骨修复质量.
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S-甲基异硫脲对急性缺血性脑卒中的保护作用
目的 研究S-甲基异硫脲(SMT)对急性缺血性脑卒中保护作用.方法 复制光化学局灶性脑梗死动物模型,通过免疫荧光双标、激光共焦显微镜观察各组缺血半暗带小胶质细胞(microglia MG)中诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的表达;采用电子自旋共振(electron spin resonance, ESR)技术,通过标准添加法检测脑血栓不同时间点NO的含量;运用TTC 染色观察SMT治疗对脑梗死灶体积的影响.结果 缺血早期2、6 h,与对照组相比,治疗组半暗带的NO含量无变化,梗死灶体积差异亦无显著性.缺血中后期12、24、48 h,SMT明显抑制半暗带MG中iNOS的表达和NO的产生.TTC染色结果 提示,对照组12 h梗死灶体积明显增大,24、48 h达到高峰,治疗组12 h、24 h、48 h脑梗死灶体积明显减小.结论 SMT通过抑制MG中iNOS的表达,减少NO的产生,对急性缺血性脑卒中产生保护作用.
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S-甲基异硫脲对阿霉素致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶活性改变的影响
目的 研究S-甲基异硫脲(SMT)对阿霉素(ADR)所致大鼠心肌线粒体腺苷三磷酸合酶(ATPS)活性改变的影响.方法 大鼠腹腔注射ADR(5.0 mg·kg-1)1次,给ADR处理的大鼠静脉注射不同剂量的SMT 1次进行干预.分别用寡霉素一无机磷法、血红蛋白氧化法测定心肌线粒体的ATPS活性、一氧化氮合酶活性;分别用荧光素酶法、硝酸还原酶法测定心肌线粒体的腺苷三磷酸(ATP)含量、一氧化氮(NO)含量;用逆转录-聚合酶链反应方法检测心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达.结果 SMT(5.0,10.O,20.0 mg·kg-1)拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPs活性降低、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATP含量降低、NO含量增加(P<0.01);拮抗ADR所致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低(P<0.01).结论 SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低而拮抗ADR导致ATPS活性降低,从而改善心肌线粒体供能;SMT拮抗ADR导致心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达水平降低可能与其选择性地抑制ADR所诱导心肌线粒体的iNOS活性使NO产生减少,从而减少NO抑制心肌线粒体的ATPS6 mRNA、ATPS8 mRNA表达有关.
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S-甲基异硫脲对阿霉素致大鼠心肌脂质过氧化的影响
目的研究S-甲基异硫脲(SMT)对阿霉素(ADM)所致大鼠心肌脂质过氧化的影响.方法 32只Wistar大鼠随机分成4组:对照组;SMT组(SMT 5.0 mg·kg-1,iv,1次);ADM组(ADM 5.0 mg·kg-1,ip,1次);ADM + SMT组(ADM、SMT的剂量及用法分别同ADM组、SMT组).于给药后24 h处死所有大鼠.分别用TBA法、硝酸还原酶法、DTNB法、邻苯三酚自氧化法、血红蛋白氧化法测定心肌的脂质过氧化物(LPO)含量、一氧化氮(NO)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、一氧化氮合酶活性;用免疫组织化学法检测心肌的硝基酪氨酸(NT)水平.结果 SMT干预ADM处理的大鼠后,降低心肌的LPO及NO含量、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、NT水平(P<0.01),增加心肌的SOD及GPx活性(P<0.01).SMT、ADM对心肌的结构型一氧化氮合酶活性无影响(P0.05).结论 SMT抑制ADM导致心肌脂质过氧化.其机制可能与SMT选择性地抑制ADM所诱导心肌的iNOS活性使心肌产生NO减少而减少心肌生成过氧亚硝基阴离子、保护心肌的SOD及GPx活性有关.
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诱导型一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲在大鼠颈椎间盘退变中的作用
目的:研究诱导型一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲(S-methylisothiourea, SMT)在大鼠颈椎间盘退变中的作用.方法:选取8月龄雌性SD大鼠45只,随机分为实验组、实验对照组和正常对照组,实验组和实验对照组分别造颈椎静动力平衡失调模型,实验组腹腔注射SMT.3个月后光镜下观察椎间盘形态,测定蛋白多糖含量及椎间盘细胞凋亡率,并比较.结果:实验对照组的椎间盘细胞凋亡率和蛋白多糖减少量高于实验组和正常对照组,差异显著;实验组凋亡率和蛋白多糖减少量高于正常对照组,差异有显著性.结论:SMT在延缓椎间盘细胞的退变过程中有一定作用.
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iNOS抑制剂对兔关节软骨修复组织胶原表达的影响
目的 观察诱导型一氧化氮合酶抑制剂对关节软骨修复组织胶原表达的影响.方法 24只新西兰大白兔双侧股骨髁间关节面造成全层软骨缺损.随机抽签均分为对照组、骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)组和一氧化氮合酶抑制剂S-甲基异硫脲组(S-methylisothiourea,SMT)组.术后1年处死动物.应用苦味酸-天狼猩红染色检测胶原的分布情况,图像分析技术定量胶原的表达及进行修复组织软骨厚度的测量.应用免疫组织化学技术检测Ⅱ型胶原的表达和分布.结果 图像分析显示,1年后SMT组Ⅰ型胶原表达量为65.9%,明显少于BMP组88.5%和对照组94.6%的表达量,Ⅱ型胶原30.7%的表达量明显多于BMP组10.8%和对照组4.5%的表达量.1年后SMT组软骨厚度(1.85±0.56) mm明显高于BMP组(0.67±0.31) mm和对照组(0.24±0.10) mm.SMT组缺损区Ⅱ型胶原含量明显高于BMP组和对照组.结论 iNOS抑制剂SMT的应用能明显增加Ⅱ型胶原表达和软骨厚度,对于维持软骨表型有积极意义.
