首页 > 文献资料
-
鞘内注射右美托咪定对大鼠脊髓缺血再灌注损伤后FGFR3表达及血-脊髓屏障的影响
目的:观察鞘内注射右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后细胞生长因子受体3(FGFR3)表达、血-脊髓屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)结构及其相关结构蛋白occludin的影响.方法:120只SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(IR组)、Dex预处理组(Dex组)和Dex+阿替美唑(ATIP)预处理组(Dex+ATIP组),Sham组和IR组分别于造模前3d开始鞘内生理盐水30μl、Dex组鞘内注射10μg DEX(30μl);Dex+ATIP组鞘内注射右美托咪定10μg+阿替美唑10μg(共30μl),1次/d,连续3d.Sham组仅暴露主动脉弓而不结扎,其他3组开胸后用无创动脉夹夹闭主动脉弓14min后再开放,建立SCIRI模型.分别于造模后12h和48h取L4～L6脊髓,采用干湿法测定脊髓含水量;伊文思蓝(evans blue,EB)染色测定BSCB完整性;Weston blot和RT-PCR测定脊髓组织中FGFR3和occludin含量.结果:造模后12h和48h,与Sham组比较,IR组、Dex组和Dex+ATIP组相应时间点脊髓组织中含水量、EB含量、FGFR3蛋白和基因表达均显著性增加,occludin表达显著性下降(P＜0.05);Dex组与相应时间点与IR组和Dex+ATIP组相比脊髓组织中含水量、EB含量和FGFR3蛋白和基因表达均显著性降低,而occludin表达增加(P＜0.05);Dex+ATIP组与IR组相应时间点比较均无显著性差异.造模后12h和48h,EB染色荧光显微镜下观察Sham组脊髓实质内几乎未见红色荧光,Dex组红色荧光有所增加,而IR组和Dex+ATIP组红色荧光显著增加,48h变化较12h更为显著.结论:鞘内注射Dex可下调大鼠脊髓缺血再灌注损伤后脊髓组织中FGFR3蛋白表达,维持occludin蛋白含量,对血-脊髓屏障起到保护作用.
-
远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血-脊髓屏障的保护作用及相关机制研究
目的 探讨远端缺血预处理(RIPC)对脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后血-脊髓屏障(BSCB)的保护作用及相关的调控机制.方法 36只日本大耳白兔随机均分为3组(n=12):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)和远端缺血预处理组(R组).I/R组和R组阻断腹主动脉血流40 min,R组在腹主动脉阻断前lh对双侧股动脉进行2个循环的10 min缺血/10 min再灌注处理.三组动物于术后24h进行神经功能评价、BSCB通透性检测、相关蛋白(claudin-5、occludin、BDNF)及mRNA(BDNF)检测.结果 在SCIRI后24h,与S组相比,I/R组神经运动功能评分显著降低(P＜0.01),脊髓组织EB外渗量增加(P＜0.01),紧密连接蛋白claudin-5和occludin的蛋白表达量显著下降(P＜0.01),脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及BDNF mRNA表达轻微增加,差异无统计学意义(P＞0.05);而R组神经运动功能评分高于I/R组(P＜0.05),脊髓组织EB外渗量低于I/R组(P＜0.01),claudin-5、occludin及BDNF(mRNA)的蛋白表达量均高于I/R组(P＜0.01).结论 RIPC可通过阻止SCIRI后脊髓组织中紧密连接蛋白claudin-5、occludin表达的下降,降低BSCB通透性,维持BSCB结构完整.同时,在BSCB结构完整的基础上,RIPC可上调脊髓组织中BDNF的表达,发挥防治SCIRI的神经保护作用.
-
脊髓缺血再灌注时血脊髓屏障损伤机制及远端缺血预处理对其作用的研究进展
血-脊髓屏障(BSCB)是血液循环和脊髓组织之间的生理和代谢物质扩散的屏障.BSCB的破坏是脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)的重要病理改变之一,在SCIRI的发生发展中起关键作用.药物、缺血预处理等可通过保护BSCB完整性减轻SCIRI.远端缺血预处理(RIPC)可对SCIRI产生保护作用,但其内在机制仍有待阐明.本文就BSCB的形态结构与功能、SCIRI后BSCB损伤的机制及RIPC对SCIRI的保护作用作一综述.
-
脊髓缺血再灌注损伤的发生机制及其防治
脊髓缺血再灌注损伤(spinal cord ischemia-reperfusion injury,SCII)是一种发生于中枢神经系统缺血缺氧血液再灌注后的继发性损伤,多继发于脊柱脊髓创伤,包括严重颈椎病在内的脊柱外科术后.其包含一系列的病理损伤环节,常导致严重的后果,轻则发生部分肢体感觉异常、大小便失禁,重则可能会导致截瘫、全瘫,乃至脑死亡.不仅导致患者遭受身体上的创伤,还增加了患者的精神负担和患者家庭的经济负担.本文就SCII的发病机制及其防治方法进行了综述.
-
miR-122a对大鼠脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响
目的 探讨miR-122a对脊髓缺血/再灌注损伤后血-脊髓屏障的影响.方法 SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组(S组)、对照组(C组)、miR-122a反义寡核苷酸(miR-122a antagomir)组(M组).S组开胸游离主动脉弓,但不阻断;C组和M组开胸阻断主动脉弓14 min造成脊髓缺血/再灌注损伤.M组和C组脊髓缺血/再灌注损伤后,鞘内注射miR-122a antagomir或空白对照,每日1次,共3次.Real-time PCR测定损伤节段脊髓组织的miR-122a表达,Western blot测定脊髓组织中紧密连接蛋白occludin表达,伊文思蓝测定血-脊髓屏障通透性,Basso Beattie Bresnahan评分法评价神经运动功能.结果 与S组比较,C组miR-122a表达增加,occludin表达减少,血-脊髓屏障通透性增加,神经运动功能评分降低(P<0.05).与C组比较,M组miR-122a表达降低,occludin表达增加,血-脊髓屏障通透性降低,神经运动功能评分增加(P<0.05).结论 miR-122a参与调控脊髓缺血/再灌注损伤后occludin表达,影响血-脊髓屏障通透性.
-
鞘内预注右美托咪啶对脊髓缺血/再灌注损伤后脊髓水含量、小胶质细胞及基质金属蛋白酶表达的影响
既往研究发现,坐骨神经结扎前鞘内预注右美托咪啶( dexmedetomidine, DEX)能够有效减轻神经病理性疼痛,减少脊髓组织中炎性因子的产生,改善预后[1]。一些研究表明,脊髓缺血/再灌注损伤( spinal cord ischemia reperfusion injury,SCIRI)后,减轻脊髓水肿、维持血脊髓屏障( blood spi-nal cord barrier, BSCB)的完整性,可以减少SCIRI所致的神经损伤[2]。鞘内预注DEX是否通过抑制SCIRI后小胶质细胞变化和基质金属蛋白酶表达对脊髓水肿产生作用,有待深入研究。本研究采用阻断胸主动脉血流合并系统低血压建立SCIRI模型,探讨鞘内预注 DEX对 SCIRI后急性脊髓水肿、小胶质细胞、基质金属蛋白酶-9( matrix metalloproteinas-es, MMP-9)变化的影响。
-
连接蛋白43在远端缺血预处理防治兔脊髓缺血再灌注损伤中对血脊髓屏障的作用及机制
目的:探讨连接蛋白43(Cx43)在远端缺血预处理(RIPC)防治兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中对血-脊髓屏障(BSCB)的作用及机制.方法:36只健康日本大耳白兔,按照完全随机数字法分为3组(每组12只):假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、远端缺血预处理组(I/R+R组).分别于恢复灌注后48h行后肢神经运动功能评分,HE染色观察脊髓组织病理变化及正常运动神经元数量,TUNEL凋亡染色观察脊髓组织神经细胞凋亡情况,伊文思蓝(EB)检测血脊髓屏障的通透性,荧光定量PCR(RT-PCR)检测脊髓组织Cx43 mRNA水平,Western blot检测脊髓组织Cx43、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)蛋白表达变化.结果:与Sham组比较,I/R组后肢神经运动功能评分显著降低(P＜0.05),脊髓结构损伤严重,凋亡神经细胞数明显增加(P＜0.01),血脊髓屏障渗透性明显增加,Cx43 mRNA及Cx43、TNF-α、IL-1β和MMP-2/9蛋白表达均显著增加(P＜0.05);与I/R组比较,I/R+R组后肢神经运动功能评分增高(P＜0.05),脊髓损伤较轻,正常运动神经元数量增加(P＜0.05),凋亡神经性细胞数明显减少(P＜0.05),血脊髓屏障渗透性明显降低,Cx43 mRNA及Cx43、TNF-α、IL-1β和MMP-2/9蛋白表达均显著减少(P＜0.05).结论:RIPC可以保护SCIRI时BSCB的完整性,减轻脊髓损伤,改善后肢神经运动功能,其保护机制可能与RIPC抑制Cx43的表达,从而下调TNF-α、IL-1β及MMP-2/9蛋白表达水平有关.
-
血-脊髓屏障与临床疾病的关系
血-脊髓屏障是中枢神经系统所特有的屏障结构,血-脊髓屏障的破坏进而可造成脊髓组织水肿、缺血缺氧和血浆内的各种分子无选择性的进入脊髓实质,亦是后续其他损伤机制相互联系、相互作用的重要通路和中心环节.本文就血-脊髓屏障与几种临床疾病的关系做一综述.
-
大鼠脊髓损伤后紧密连接蛋白claudin-5的表达
目的：检测大鼠脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）后血-脊髓屏障（blood spinal cord barrier, BSCB）紧密连接蛋白claudin-5表达变化。方法120只成年雄性SD大鼠随机分为空白组（60只）和损伤组（60只），损伤组参照改良Allen’s法[2]建立脊髓损伤动物模型。建模后不同时间点（6h、12h、1d、3d、5d、7d）各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性，取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果损伤组制模成功率81.7%；损伤组EB含量随时间变化逐渐升高，在损伤后第3天达峰值（0.9435±0.0813）μg/g，此后逐渐降低（P均＜0.05），各时间点损伤组EB含量较空白组显著增高（P均＜0.05)；损伤组claudin-5 mRNA表达随时间变化逐渐减少，在损伤后第3天表达低（2.871±0.527），此后逐渐升高（P均＜0.05），各时间点损伤组claudin-5 mRNA表达均较空白组显著降低（P均＜0.05)；损伤组claudin-5表达随时间变化逐渐减少，第3天达低（0.072±0.008），之后逐渐增加（P均＜0.05），各时间点损伤组claudin-5表达均较空白组显著降低（P均＜0.05）。结论大鼠SCI后可能通过影响claudin-5的表达改变BSCB通透性，影响脊髓继发损伤的病理生理过程。
-
甲强龙预处理对大鼠脊髓损伤后claudin-5表达的影响
目的：探讨甲强龙（11β,17α,21-三羟基-6α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20二酮-21-琥珀酸钠）对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）后血-脊髓屏障（blood spinal cord barrier, BSCB）通透性及紧密连接蛋白claudin-5表达的影响。方法参照改良Allen’s法建立大鼠脊髓损伤模型。分为假手术组（n=50）、脊髓损伤组（n=50）、甲强龙预处理组（n=50）。建模后不同时间点（12h、1d、3d、5d、7d）各组随机取5只大鼠检测BSCB通透性，取胸段脊髓损伤区组织经RT-PCR、Western blot方法检测claudin-5表达。结果本实验制模成功率84.0%；脊髓损伤组各时间点EB含量较假手术组显著增高（F=27.732，P均＜0.05）。甲强龙预处理组各时间点EB含量较脊髓损伤组显著降低（F=48.149，P均＜0.05）；脊髓损伤组各时间点claudin-5 mRNA表达较假手术组显著降低（F=12.248，P均＜0.05）。甲强龙预处理组各时间点claudin-5 mRNA表达较脊髓损伤组显著升高（F=15.316，P均＜0.05）；脊髓损伤组各时间点claudin-5表达较假手术组显著降低（F=18.108，P均＜0.05）。甲强龙预处理组各时间点claudin-5表达较脊髓损伤组显著升高（F=20.247，P均＜0.05）。结论上调claudin-5表达可能是甲强龙改善大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性的途径之一。
-
血管生成素1通过调节Eps8的表达增强大鼠血-脊髓屏障功能
目的 探讨表皮生长因子受体底物蛋白8(Eps8)在血管生成素1(Ang1)增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用. 方法 分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型.(1)SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点(0 h、4h、8h、12h)测定跨内皮电阻(TEER)值,Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平,以未用Ang1处理者为对照.(2)将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Ang1组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理.Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值,荧光分光光度计测定荧光素钠(Na-F)、伊凡斯兰(EBA)的通透率,纤维型肌动蛋白(F-actin)荧光染色观察细胞骨架变化. 结果 (1)Ang1处理后4h、8h、12 h SCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)Eps8 siRNA组SCMEC Eps8的表达水平较对照siRNA组降低约75％,差异具有统计学意义(P＜0.05);而Eps8 siRNA+Ang1组较Eps8 siRNA组Eps8的表达水平无明显改变.Eps8 siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低,对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);而Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组相比,TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变.对照siRNA+Ang1组SCMEC经Ang1处理4h后,F-actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强,而Eps8 siRNA+Ang1组则无此改变. 结论 Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血-脊髓屏障的分布,进而影响大鼠血-脊髓屏障功能.
-
大黄对大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障的保护作用
目的 观察不同浓度大黄对大鼠脊髓损伤(SCI)后血-脊髓屏障(BSCB)的影响,筛选大黄煎药灌服的佳浓度,拟为临床治疗SCI提供一定的依据.方法 成年健康SD大鼠125只,随机分为假手术组(Sham组)、模型组及大黄低、中、高剂量组.大黄各剂量组用大黄水溶液灌胃,其余两组用等量生理盐水.记录大鼠SCI后双后肢运动功能(BBB)评分、脊髓含水量以及荧光显微镜观察注入伊文思蓝(EB)后的BSCB情况.结果 (1)BBB评分:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(2)脊髓含水量的测定:模型组和大黄低、中、高剂量组与Sham组比较差异均有统计学意义(P<0.05).(3)荧光显微镜下观察到Sham组没有EB染出,模型组EB大量染出,以3 d时染出多,大黄各剂量组EB染出较模型组有不同程度减少,以大黄中剂量组EB染出少.结论 中剂量组大黄有效地降低了大鼠SCI后BSCB的通透性,对其保护作用为明显.
-
脊髓挤压伤所致小胶质细胞的变化与血脊髓屏障的关系
为探讨脊髓损伤时血脊髓屏障的破坏和小胶质细胞被激活两者之间的关系,本实验用大鼠脊髓挤压伤模型进行了研究.将成年雄性SD大鼠64只,随机分为对照组及脊髓挤压伤后0 h.8 h、24 h.72 h、1 w、2 w.4 w等8组.分别以HE染色观察病理变化,小胶质特异性标记物OX-42的免疫荧光组化染色观察小胶质细胞,股静脉伊文思蓝注射观察血脊髓屏障的变化.结果显示,脊髓损伤面积在伤后8 h组明显扩大,72 h达顶峰,1w组时面积回缩并维持到实验后(4 w).在伤后24 h组可观察到活化的小胶质细胞,其后一部分迁移入损伤区内,吞噬坏死组织,变成巨噬细胞.至4 w时,HE染色切片上仍可在伤区内见到小胶质巨噬细胞.伤区外活化的小胶质细胞仍可见于伤后4 w.伊文思蓝不能通过正常的血脊髓屏障,脊髓挤压伤后即可进入脊髓,分布于损伤区及其邻近.至1w时脊髓内已无伊文思蓝,血脊髓屏障恢复正常.此现象与脊髓伤后活化的小胶质细胞长期存在的事实不一致.活化的小胶质细胞町损坏血脊髓屏障,血脊髓屏障在脊髓挤压伤后1 w已恢复,而活化的小胶质细胞却可在伤后长期存在,说明单纯激活的小胶质细胞不足以破坏血脊髓屏障.
-
利用外源性IgG显示大鼠脊髓撞击伤后血-脊髓屏障变化
血-脑(脊髓)屏障损伤范围的观察方法多为注射外源性示踪剂,我们曾在大鼠实验中采用内源性血浆IgG作为示踪剂,取得很好的效果.本研究在大鼠脊髓撞击伤模型中以静脉注射的兔IgG为外源性示踪剂,用免疫荧光双标显示并比较了大鼠与兔两种IgG在脊髓内的分布.用图像阈值分割技术处理图像后,分析了损伤后不同时间点(0 h,1 d,3 d,5 d,7 d,14 d)两者的异同,发现在血-脊髓屏障已恢复的部位仍有残留的内源性IgG,而外源性IgG可精确地反映注射当时血-脊髓屏障的改变.这种方法可有效地用于诸如不同药物保护血-脑屏障的时程研究.
-
成年大鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障通透性变化
为了观察脊髓挤压伤后血-脊髓屏障(BSCB)的通透性变化,本研究选用体重180～200 g成年雄性SD大鼠39只,随机分为对照组(n=3)和脊髓损伤组(n=6).后者又分为伤后0、8、24、72 h以及1周、2周等6组,每组6只,再分为A组、B组,每组各3只.脊髓损伤组A组的组织切片行H.E.染色,显微镜下观察脊髓损伤后的形态学变化.对照组和B组动物股静脉注射30g/L伊文思蓝,30 min后,以温生理盐水及4%多聚甲醛灌注动物,取出脊髓,行冰冻切片,荧光显微镜下观察.结果观察到,脊髓挤压伤术后72 h内,损伤区周围均可见伊文思蓝染色,至1周后损伤区周围未见伊文思蓝染色.本研究结果提示,脊髓损伤72 h内可能为有效给药时间窗,1周后给药,药物对脊髓损伤的治疗作用将难以达到治疗目的.
