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血管生成素1通过调节Eps8的表达增强大鼠血-脊髓屏障功能
目的 探讨表皮生长因子受体底物蛋白8(Eps8)在血管生成素1(Ang1)增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用. 方法 分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC),建立体外血-脊髓屏障模型.(1)SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点(0 h、4h、8h、12h)测定跨内皮电阻(TEER)值,Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平,以未用Ang1处理者为对照.(2)将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Ang1组,分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理.Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值,荧光分光光度计测定荧光素钠(Na-F)、伊凡斯兰(EBA)的通透率,纤维型肌动蛋白(F-actin)荧光染色观察细胞骨架变化. 结果 (1)Ang1处理后4h、8h、12 h SCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)Eps8 siRNA组SCMEC Eps8的表达水平较对照siRNA组降低约75％,差异具有统计学意义(P＜0.05);而Eps8 siRNA+Ang1组较Eps8 siRNA组Eps8的表达水平无明显改变.Eps8 siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低,对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);而Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组相比,TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变.对照siRNA+Ang1组SCMEC经Ang1处理4h后,F-actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强,而Eps8 siRNA+Ang1组则无此改变. 结论 Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血-脊髓屏障的分布,进而影响大鼠血-脊髓屏障功能.
