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XIAP在急性髓系白血病患者及其细胞株中的表达及意义
急性髓系白血病(AML)为第一位的恶性血液系统肿瘤。近年来，通过化疗此类患者的生存率已明显提高，但随之而来的是化疗所导致的耐药。凋亡抑制基因的过度表达是肿瘤发生耐药的主要机制之一，其中XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)在包括AML在内的许多恶性肿瘤中的过表达预示预后较差[1-2]。本研究以初治、复发AML患者及正常人为研究对象，同时选用HL-60、K562及HL-60/ADR、K562/ADR(阿霉素诱导)耐药细胞株，通过检测XIAP 的表达，来观察正常人与AML患者之间、耐药与非耐药细胞株之间XIAP表达的差异及意义。
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白血病细胞株耐药与核因子κB蛋白质诱导表达的关系
目的:探讨慢性粒细胞性白血病细胞K562与其耐药株K562/ADR细胞中IκB-α和NF-κB的表达,以及三氧化二砷(As2O3)诱导白血病细胞凋亡的关系.方法:应用不同浓度的As2O3诱导K562和K562/ADR细胞凋亡,以Western-blot免疫印迹电泳检测NF-κB、IκB-α的表达,流式细胞术检测细胞凋亡及分析IκB-α的阳性表达率变化.结果:As2O3诱导K562/ADR细胞凋亡率明显低于K562细胞,当As2O3浓度为1 μmol/L时,两种细胞凋亡率分别是(6.33±1.51)%、(13.25±1.83)%,当As2O3浓度增高到4 μmol/L时,细胞凋亡率则分别为(8.00±1.47)%、(50.56±8.62)%(P＜0.05).在K562细胞胞浆中,IκB-α阳性表达率则由(88.07±0.99)%减少到(49.21±0.95)%(P＜0.01),胞核中P65量逐渐增加;而K562/ADR细胞中无明显变化.结论:As2O3可诱导K562细胞凋亡,伴有IκB-α的降解及NF-κB的激活;K562/ADR细胞NF-κB表达增加,对As2O3诱导的反应无明显改变.
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siRNA真核表达载体对白血病K562/ADR细胞凋亡的实验研究
目的特异性siRNA真核表达载体pSilence neo-MDR1和pSilence neo-GSTπ对白血病多药耐药细胞K562/ADR凋亡的影响.方法特异性siRNA真核表达载体pSilence neo-MDR1、pSilence neo-GSTπ共转染K562/ADR细胞,同时以空载体pSilencer2.1-U6转染K562/ADR细胞(mock)作为对照.流式细胞仪检测细胞凋亡;MTT法检测阿霉素的半数抑制浓度(IC50).结果流式细胞仪显示空载体pSilencer2.1-U6转染细胞凋亡率为(11.65±4.06)%,pSilence neo-MDRI和pSilence neo-GSTπ共转染组细胞凋亡率(44.98±11.27)%,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P＜0.01.K562/ADR细胞对阿霉素的耐药指数为24,空载体转染后耐药指数为23,pSilence-MDR1、pSilence-GST共转染后耐药指数降低为7,半数抑制浓度(IC50)值分别从转染前(1.16±0.38)mol/ml下降为(0.33±0.04)mol/ml,重组质粒转染组与空质粒转染组比较,差异有统计学意义,P＜0.01.结论siRNA真核表达载体pSilence MDR-1和pSilence neo-GSTπ可以诱导K562/ADR细胞发生凋亡,并且可有效逆转K562/Adr细胞株的多药耐药.
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一种新四氢异喹啉类化合物H108体外抑制P-糖蛋白功能及对PC12细胞损伤的保护作用
目的:观察新合成四氢异喹啉衍生物H108抑制P-糖蛋白(P-gp)功能及对PC12细胞损伤的保护作用.方法:测定H108对K562/ADR细胞株及大鼠脑微血管内皮细胞(RBMECs)内罗丹明123(Rh123)积聚的影响,考察H108逆转P-gp介导的多药耐药性及对血脑屏障上P-gp药物外排功能的影响.以连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立缺血缺氧损伤模型,过氧化氢(H2O2)建立氧化应激损伤模型, 硝普钠(SNP)建立NO损伤模型, MTT法测定H108对三种PC12损伤细胞存活率的影响.结果:H108浓度依赖性地增加K562/ADR及RBMECs细胞中Rh123的累积浓度.并可明显对抗Na2S2O4及SNP诱导的PC12细胞损伤,增加细胞存活率.结论:H108具有一定的P-gp逆转作,并可能具有一定的神经保护作用.其有可能成为一种新型、高效,特别是用于促进血脑屏障上药物转运的P-gp逆转剂.
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补骨脂素逆转多药耐药细胞系K562/ADR耐药性研究
目的研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K562/ADR)多药耐药(multidrug resistance, MDR)性的逆转作用及其机制.方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素(ADR)的浓度,流式细胞术测定细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果补骨脂素(1～20 μmol*L-1)能不同程度地降低ADR对K562/ADR细胞的IC50.20 μmol*L-1能显著提高ADR在K562/ADR细胞内的浓度,降低K562/ADR细胞P-gp的表达.结论补骨脂素能逆转K562/ADR细胞的MDR,其机制与抑制P-gp的功能及其表达,增加细胞内ADR的积累有关.
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siRNA沉默c-FLIP对K562/ADR耐药性的影响
目的：探讨c-FLIP siRNA干扰c-FLIP mRNA水平对阿霉素耐药细胞K562/ADR的耐药性的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰的方法抑制K562及K562/ADR细胞c-FLIP的表达，通过荧光定量PCR的方法检测c-FLIP mRNA表达及对多药耐药基因MDR1 mRNA水平的影响。MTT法检测c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞增殖的影响，Annexin V/7-ADD双染研究c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞凋亡的影响。结果与阴性siRNA转染组相比较，c-FLIP siRNA转染下调K562细胞中c-FLIP的mRNA后，K562细胞增殖受到一定程度的抑制(P<0.05)，但是并未显著诱导细胞凋亡，c-FLIP干扰与否K562细胞48 h增殖率分别为(69.14±1.82)%和(60.69±2.23)%，凋亡率分别为(1.7±0.3)%和(1.8±0.2)%。与阴性siRNA转染组相比较， c-FLIP siRNA转染抑制K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA后，K562/ADR细胞增殖显著被抑制(P<0.05)，并显著诱导了细胞凋亡增加(P<0.05)，c-FLIP干扰与否K562/ADR细胞48 h增殖率分别为(-6.07±0.71)%和(-37.45±3.53)%，凋亡率分别为(5.2±0.4)%和(9.2±0.4)%。并且c-FLIP siRNA下调c-FLIP mRNA水平后，K562/ADR细胞中的多药耐药基因MDR1的mRNA表达水平也被显著下调(P<0.05)。结论 c-FLIP siRNA下调K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA水平抑制了多药耐药基因MDR1的表达，从而抑制了K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性。
关键词： c-FLIP siRNA MDR1 K562/ADR 阿霉素耐药 -
维药异常黑胆质成熟剂总黄酮杀伤K562／ADR 细胞株作用研究
目的：探讨维药异常黑胆质成熟剂总黄酮（ASMq）对人慢性骨髓性白血病细胞（K562）及人白血病阿霉素耐药株（K562／ADR）的细胞毒性作用。方法对 K562细胞株及 K562／ADR 细胞株细胞进行培养，在培养过程中注意 K562／ADR 细胞株对阿霉素的耐药性。取对数生长期 K562、K562／ADR 细胞株，96板孔中加入RPMI-1640培养液配制5×104个／mL 细胞悬液100μL／每孔，37℃、5％ CO2培养24 h 贴壁，然后加入不同浓度（0、50、100、200、400、800和1600μg／mL）的 ASMq，在37℃共培养48 h，每组5个重复，按照 CCK-8说明书检测细胞活性。结果K562细胞株对不同浓度的 ASMq 的细胞毒性的敏感性不同，差异有统计学意义（P ＜0．05）；K562／ADR 细胞株对0～1600μg／mL 浓度的 ASMq 的细胞毒性的敏感性差异无统计学意义（P ＞0．05）；结论ASMq 对 K562细胞具有细胞毒性作用，为临床治疗血液肿瘤提供了新的线索。
关键词： 异常黑胆质成熟剂总黄酮 K562 K562/ADR 杀伤 耐药逆转
