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不同月龄大鼠大脑中低密度脂蛋白受体相关蛋白的表达
目的探讨不同月龄大鼠大脑额叶、海马、纹状体低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP-1)表达的变化.方法雄性SD大鼠15只,流式细胞技术检测并计算1,3,10月龄大鼠大脑额叶、海马、纹状体匀浆单细胞悬液LRP-1表达的平均荧光指数;免疫组织化学技术测定大脑海马CA1区神经细胞、微血管LRP-1表达,并应用MIAS图像分析系统进行平均吸光度测定.结果流式细胞研究显示,大鼠海马1、3月龄LRP-1表达强度均显著高于10月龄大鼠;而额叶及纹状体各月龄组间差异无显著性意义.1、3月龄大鼠海马区LRP-1表达强度均显著高于额叶及纹状体.免疫组织化学结果显示,LRP-1在海马CA1区微血管、神经细胞均有表达.随着月龄的增加,LRP-1在微血管的表达显著下降,而在海马CA1区神经细胞的表达各月龄组差异无显著性意义.结论随着月龄的增加,海马区LRP-1的表达有下降趋势,尤其是海马CA1区微血管LRP-1的表达显著下降.
关键词： 大脑 海马 LDL受体相关蛋白质类 流式细胞术 大鼠 -
Wnt/LRP5/β-catenin信号通路在绝经后骨质疏松发病中的作用
目的 探讨Wnt/LRPS/β-catenin信号通路在绝经后骨质疏松发病中的作用.方法 选取50只6月龄雌性Wistar大鼠,随机分为对照组(n=24)和去卵巢组(n=26),去卵巢组大鼠行双侧卵巢切除术,对照组打开大鼠腹腔后不作任何处理即缝合.去卵巢后0、4和8周分别测定两组大鼠血雌二醇水平和骨密度,4和8周用逆转录-PCR技术检测骨组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白5( LRP5)、β连环蛋白(β-catenin)及骨形成关键基因—runt相关基因2(Runx2)mRNA的表达.结果 去卵巢组大鼠术后4和8周,出现雌二醇水平明显下降,术后4周时为( 92±15) pmol/L,对照组为( 117±29) pmol/L；术后8周时为(95±22) pmol/L,对照组为(114±15) pmol/L；两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).术后4周时去卵巢组骨密度为(0.076±0.016) g/cm2,对照组为(0.098 +0.016) g/cm2;术后8周时去卵巢组为(0.052±0.013) g/cm2,对照组为(0.095±0.028)g/cm2；两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).去卵巢组大鼠术后4周骨组织中LRP5、β-catenin和Runx2 mRNA表达水平明显减少,分别为0.97±0.04、0.58±0.05、0.86±0.03,对照组为1.02±0.06、1.04±0.05、1.07±0.21,两组各指标分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Wnt/LRP5/β-catenin信号通路抑制可能是绝经后骨质疏松重要发病机制之一.
关键词： 骨质疏松 绝经后 β连环素 LDL受体相关蛋白质类 核心结合因子α1亚基 雌二醇 -
重症肌无力患者血清低密度脂蛋白受体相关蛋白4抗体的检测及其临床意义
目的 检测重症肌无力(MG)患者血清低密度脂蛋白受体相关蛋白4抗体(LRP4-ab)含量,并分析该抗体阳性患者的临床特点.方法 共纳入116例MG确诊患者为病例组,40例其他神经免疫疾病患者及40名健康体检者为对照组,采用细胞分析的方法检测LRP4-ab.结果 (1)病例组中共发现LRP4-ab阳性患者2例(1.7％).所有对照组血清中均未发现LRP4-ab.(2)LRP4-ab阳性MG患者均为同一居住地的年轻女性;分型为Osserman Ⅰ型,且伴有胸腺异常;经乙酰胆碱酯酶抑制剂及小剂量糖皮质激素治疗后均获得稳定缓解.结论 发现2例LRP4-ab阳性的MG患者,提示MG可能存在着另一种发病机制.同时,根据该类患者的免疫学特点采用个体化的治疗方案可能对临床诊疗有着重要意义.
关键词： 重症肌无力 LDL受体相关蛋白质类 自身抗体 -
人低密度脂蛋白受体检测方法的建立
肝脏是脂肪代谢的主要器官,肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDLR)是一种细胞膜表面糖蛋白,主要的生物学功能是介导低密度脂蛋白(LDL)进入细胞,调节胆固醇的代谢,在脂肪代谢中起重要作用.LDLR突变能严重影响体内脂肪代谢,从而诱发家族性高胆固醇血症,能导致未成年期冠状动脉硬化.由于高血脂而导致的各种疾病是现代社会人类健康的重大威胁,因此,细胞表面LDLR的检测对于明确高血脂的病因和确定相应的治疗方法具有重要的临床指导价值.
关键词： 脂蛋白类 LDL受体相关蛋白质类 -
高糖对足细胞表达结缔组织生长因子及其受体蛋白的调节
目的:研究长期高糖对体外培养的足细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)及其受体--低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的影响以及可能涉及的信号途径.方法:以体外培养的小鼠肾小球足细胞为研究对象,应用Western印迹分析技术,检测高糖刺激不同时间对足细胞表达CTGF蛋白的影响.观察高糖对丝裂素激活蛋白激酶(MAPKS)信号途径活化的影响以及MAPKS信号途径在高糖调节足细胞表达CTGF中的作用,同时检测高糖对足细胞CTGF的受体LRP蛋白的影响.结果:体外培养足细胞表达基础水平的CTGF蛋白,高糖刺激2天后足细胞表达CTGF水平开始升高,第4天达高峰,第6天下降,第8天降至对照组水平.正常糖和甘露醇组CTGF蛋白没有明显变化.高糖可以激活足细胞外信号调节激酶(ERK1/2),于刺激30 min时ERK1/2即开始活化,6 h达高峰,持续至24h,48 h接近基础水平.正常糖和甘露醇在各个时间点均不活化ERK1/2.应用ERK1/2活化特异抑制剂PD98059可以消减高糖刺激CTGF表达增加的效应.在各个时间点,长期高糖环境对足细胞CTGF的受体LRP蛋白没有明显作用.结论:短期(2～4 d)高糖通过活化ERK1/2信号通路刺激足细胞CTGF的表达,高糖继续培养(6～8 d)对足细胞内的CTGF蛋白表达水平没有影响.长期高糖环境对足细胞上CTGF的受体LRP蛋白的表达无影响.
关键词： 高糖 结缔组织生长因子 LDL受体相关蛋白质类 足细胞 -
转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞结缔组织生长因子及低密度脂蛋白受体相关蛋白表达的影响
目的:探讨体外培养人胚肺成纤维细胞(human pulmonary fibroblasts-1,HPF-1)在外源性转化生长因子β1(transforming growth factor beta, TGF-β1)作用下结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)与低密度脂蛋白受体相关蛋白(low density lipoprotein receptor related proteins, LRP) 的表达变化及意义.方法:将HPF-1用5 μg/L的TGF-β1分别作用0, 3, 6, 12和 24 h.用RT-PCR方法检测CTGF及LRP mRNA的表达;用蛋白免疫印迹检测LRP蛋白表达变化;用免疫沉淀方法检测TGF-β1作用不同时间,与LRP结合的CTGF的数量变化;用细胞免疫荧光检测细胞中LRP表达情况.结果:相关分析显示,以3 h为关键点,CTGF mRNA(131.53±2.86)与LRP mRNA(224.87±7.00)表达变化具有正相关性(r=0.840 2,P＜0.05);LRP蛋白随TGF-β1作用时间不同,表达水平先升高,于3 h达高峰,而后逐渐下降,用免疫印迹法分析,相对于0 h组(190.85±2.86),3 h组(222.45±3.66)表达具有统计学意义(F=18.06,P＜0.05);用免疫荧光标记细胞LRP也得到类似的结果,比较0 h组(27.56±6.72)和3 h组(88.66±15.72)LRP蛋白表达(F=244.36,P＜0.01)差异具有统计学意义.结论:LRP作为CTGF的受体蛋白,在TGF-β1作用不同时间的情况下,表达量发生变化,并与CTGF的表达成正相关,提示其在肺间质纤维发生中发挥作用.
关键词： 转化生长因子β 结缔组织生长因子 LDL受体相关蛋白质类 成纤维细胞 -
二氢睾酮通过下调LOX-1的表达抑制J774.1细胞向泡沫细胞转化
目的 探讨雄激素二氢睾酮(DHT)对雌性巨噬细胞系J774.1细胞的植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达及泡沫细胞形成的影响.方法 体外培养J774.1细胞,通过氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞向泡沫细胞转化,采用1×10-9 mol/L和1×10-8 mol/L浓度的DHT进行预处理,提取细胞mRNA及蛋白行实时定量PCR及Western印迹法检测LOX-1 mRNA及蛋白表达,油红O染色观察泡沫细胞形态,按照泡沫细胞数/视野及每个视野中油红染色的颗粒面积进行定量分析.结果 与对照组(加入乙醇)相比,ox-LDL明显增加J774.1细胞的LOX-1 mRNA(4.71 ±0.31比1.00±0.06)及蛋白(1.75 ±0.11比1.04±0.04)相对表达水平(均P＜0.01).应用1×10-9 mol/L和1×10-8 mol/L浓度的DHT可以降低ox-LDL诱导的LOX-1 mRNA(2.81±0.46、2.29±0.21比4.71±0.31,均P＜0.05)和蛋白表达水平(1.35 ±0.06、1.09±0.04比1.75±0.11,均P＜0.05).这种作用可通过雄激素受体(AR)阻滞剂逆转87.6％ (P =0.004).油红O染色表明ox-LDL明显增加泡沫细胞形成(45.9±3.7比0.0 ±0.0,P＜0.01).应用1×10-9 mol/L和1×10-8moL/L浓度的DHT可以抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成(泡沫细胞数/视野定量分析:36.0±3.0、29.1±1.3比45.9±3.7,均P＜0.05;油红O相对染色面积定量分析:7 983±1 035、4 060±390比14 750±2 489,均P＜0.05).结论 1×10-9 mol/L和1×10-8 moL/L浓度的DHT通过AR可以减少雌性巨噬细胞系J774.1细胞的LOX-1表达,并抑制J774.1细胞向泡沫细胞转化.
关键词： 双氢睾酮 雌性巨噬细胞 LDL受体相关蛋白质类 泡沫细胞 动脉粥样硬化 -
Sclerostin/Lrp4调节血管平滑肌细胞钙化的机制研究
目的 探讨sclerostin/Lrp4在高磷诱导血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)钙化过程中的可能机制及银杏叶提取物的保护作用.方法 提取SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞并鉴定,分为正常对照组,高磷诱导钙化组(10 mmol/L β-甘油磷酸钠+50μg/ml抗坏血酸),高磷诱导钙化+银杏叶提取物干预组(10 mmol/L β-甘油磷酸钠+50μg/ml抗坏血酸+0.5 mg/ml银杏叶提取物),培养基诱导干预14d.VON KOSSA染色、茜素红染色检测各组VSMC钙化情况,实时定量PCR检测β-catenin、骨钙素(bone gamma carboxyglutamic acidcontaining proteins,BGP)的mRNA表达,Western印迹检测sclerostin、Lrp4的蛋白表达. 结果 VON KOSSA染色、茜素红染色均显示,与正常对照组相比,高磷诱导VSMC钙化组有明显的钙盐沉积,银杏叶提取物干预组钙盐沉积较钙化组明显减少.实时定量PCR结果显示高磷诱导VSMC钙化组β-catenin、BGP的mRNA表达明显高于正常对照组(均P＜0.05).银杏叶提取物干预组β-catenin、BGP的mRNA表达明显低于钙化组(均P＜0.05).Western印迹结果显示,高磷诱导VSMC钙化组sclerostin蛋白表达明显高于正常对照组(P＜0.05),Lrp4蛋白表达明显低于正常对照组(P＜0.05).银杏叶提取物干预组sclerostin蛋白表达明显低于钙化组(P＜0.05),Lrp4蛋白表达明显高于钙化组(P＜0.05).结论 高磷可通过激活Wnt/β-catenin信号通路诱导VSMC钙化,Sclerostin/Lrp4参与了高磷诱导的VSMC钙化过程,而银杏叶提取物可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路减轻高磷诱导的VSMC钙化.
关键词： 肾功能不全 慢性 钙质沉积 LDL受体相关蛋白质类 骨硬化蛋白 Wnt/β-连环蛋白 银杏叶提取物
