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锌转运体8自身抗体的放射配体检测法
目的 建立锌转运体8自身抗体(ZnT8A)的放射配体检测法(RLA). 方法 采用重组人ZnT8质粒,经试管内转录与翻译,获得35S- ZnT8抗原,35S-ZnT8与血清在自制旋转孵育器上旋转温育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物.免疫复合物经TBST缓冲液洗涤后,用多功能闪烁发光分析仪检测沉淀物放射性计数值.参加国际糖尿病免疫学会(IDS)和美国疾病预防控制中心联合举办的第六次糖尿病自身抗体国际标准化评估(DASP 2009),评价该方法的敏感性和特异性.检测429例1型、855例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步评价其临床应用价值. 结果 该方法批内CV 3.9%～9.8%,批间CV4.3%～13.8%; DASP 2009显示,该方法敏感性66%,特异性100%.受试者操作特性曲线(ROC)分析显示,曲线下面积为0.879±0.034;该方法阳性阈值ZnT8A指数为0.011(405名正常人的99%百分位点),检测1型糖尿病患者阳性率24.0%,高于初诊2型糖尿病患者1.3%和健康人0.99%(P均＜0.01). 结论 建立的RLA法检测ZnT8A敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于自身免疫糖尿病的诊断与分型.
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Graves病及1型糖尿病患者促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体及谷氨酸脱羧酶抗体表达水平比较
目的 探讨Graves病患者促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体、谷氨酸脱羧酶抗体水平及其相关性.方法 招募2009年11月至2011年3月吉林大学白求恩第二医院内分泌科门诊和病房收治的51例Graves病患者(Graves病组；男9例,女42例)及72例1型糖尿病患者(1型糖尿病组；男30例,女42例),另以70名志愿者为健康对照组.利用放射免疫分析法检测各组血清促甲状腺激素受体抗体水平,采用放射免疫沉淀法检测锌转运体8抗体及谷氨酸脱羧酶抗体水平.Pearson相关分析进行组间相关性分析.结果 Graves病组促甲状腺激素受体抗体、锌转运体8抗体、谷氨酸脱羧酶抗体的阳性率分别为90.2％(46/51)、15.7％(8/51)和5.9％(3/51),1型糖尿病组上述3种抗体的阳性率依次为4.2％( 3/72)、45.8％ (33/72)和41.7％(30/72),健康对照组上述3种抗体的阳性率依次为0、1.4％(1/70)和1.4％ (1/70).Graves病组促甲状腺激素受体抗体与锌转运体8抗体呈正线性相关(r =0.278,P＜0.05)；促甲状腺激素受体抗体阳性的Graves病患者促甲状腺激素受体抗体与锌转运体8抗体呈正线性相关(r =0.537,P＜0.01).1型糖尿病组锌转运体8抗体与谷氨酸脱羧酶抗体呈明显正线性相关(r =0.892,P＜0.01).结论 自身免疫性甲状腺病与自身免疫性糖尿病可能存在一定关联.1型糖尿病患者锌转运体8抗体水平与谷氨酸脱羧酶抗体水平高度相关.
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锌转运体8在胰岛功能和血糖稳态中的作用
锌转运体8(ZnT8)是新近发现的特异性高表达于胰岛的锌转运体,主要功能是参与锌在细胞内的区室化以及锌的外排,从而降低胞质内锌的浓度.同时,SLC30A8多态性影响2型糖尿病的易患性,与2型糖尿病的发病机制有关.虽然ZnT8全身剔除的小鼠空腹及葡萄糖刺激后胰岛素均减少,但血糖浓度无明显改变,表明了ZnT8的缺乏影响胰岛功能,而对全身血糖代谢的影响比较局限.
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锌转运体8自身抗体和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体对成人隐匿性自身免疫糖尿病患者胰岛功能的影响
目的 研究锌转运体8自身抗体(ZnT8A)和蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)阳性的成人隐匿性自身免疫糖尿病(LA DA)患者胰岛功能的变化特点,为LADA的早期干预提供依据.方法 选择2005至2010年在我院就诊的初诊谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)+ ZnT8A双阳性的LADA患者13例(GADA+ ZnT8A双阳性组),GADA+ IA-2A双阳性的LADA患者14例(GADA+ IA-2A双阳性组),GADA单独阳性的LADA患者42例(GADA单独阳性组),并选择同期抗体阴性的2型糖尿病(T2DM)患者40例作为对照组.对各组患者每年随访1次,连续随访3年,检测并比较各组患者基线和随访期间空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbAl c)、空腹和餐后2hC肽(FCP、2 h CP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平等临床指标的变化情况.本研究经中南大学湘雅二医院伦理委员会批准[(2006)伦审第(S05)号].结果 GADA+ IA-2A双阳性组FBG和HbAlc均高于GADA单独阳性组[(10.5±3.6) mmol/L、(9.3±2.6)％比(9.2±2.0) mmol/L、(7.4±2.0)％,P=0.017,0.011]和对照组[(10.5±3.6) mmol/L、(9.3±2.6)％比(8.5±1.2) mmol/L、(7.2±2.1)％,P=0.007,0.013],而FCP水平为415(68 ～934)pmol/L,低于GADA单独阳性组[538(224 ～1 146) pmol/L]以及对照组[643(163～l 658)pmol/L],P=0.015,0.003.GADA+ ZnT8A双阳性组、GADA+IA-2A双阳性组和GADA单独阳性组的空腹C肽水平均呈逐年下降趋势.GADA+ ZnT8A双阳性组和GADA+ IA-2A双阳性组空腹C肽水平年平均下降率为14.2％和12.4％,高于GADA单独阳性组和对照组的7.9％和0(均P＜0.01).结论 GADA合并IA-2A阳性的LADA患者初诊时胰岛功能较差,且ZnT8A和IA-2A均能加速LADA患者随病程延长而出现的胰岛功能衰竭.
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锌转运体8及其自身抗体
锌是胰岛素储存和分泌机制中的一个重要组分,β细胞需要有效且特异的转运体来累积足够量的锌.锌转运体8(ZnT8)是新近发现的一种1型糖尿病自身抗原,具有高度β细胞特异性,通过影响锌离子浓度而在胰岛素合成和分泌中发挥重要作用.ZnT8自身抗体对自身免疫性糖尿病(尤其对其他自身抗体阴性者)有着重要的诊断与预测价值.ZnT8基因(SLC30A8基因)多态性影响ZnT8自身抗体的特异性.
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锌转运体8及其自身抗体与糖尿病
锌转运体8 (Zinc transporter 8,ZnT8)表达主要局限于胰腺的内分泌部分尤其是胰岛β细胞,其在胰岛β细胞锌的转运中发挥直接作用,在胰岛素的合成、储存和分泌中发挥着间接作用.锌转运体8自身抗体(Zinc transporter 8 autoantibodies,ZnT8A)作为新近发现的1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)胰岛自身抗体,在经典T1DM、成人隐匿性自身免疫糖尿病(latent autoimmune diabetes in adult,LADA)具有重要的诊断价值.ZnT8A与妊娠糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的关系需进一步确定.ZnT8的编码基因SLC30A8的罕见变异体和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的保护性有关.现将其结构和功能综述如下.
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锌转运体8与小鼠睾丸间质细胞睾酮生成相关
目的 锌转运体8 (ZnT8)与胰岛素等激素的分泌有关,但其在睾丸的功能尚不清楚,本实验旨在探讨ZnT8在小鼠睾丸的分布与功能.方法 通过免疫组织化学技术检测成年雄性小鼠睾丸ZnT8的分布;乳鼠腹腔注射hCG(human chorionic gonadotrophin,人绒毛膜促性腺激素),注射5d后,检测乳鼠睾丸ZnT8的分布;化学发光法检测乳鼠血清睾酮水平.结果 ZNT8主要分布在成年雄鼠睾丸间质细胞,hCG处理乳鼠在血清睾酮升高的同时伴有睾丸间质细胞ZnT8表达增加.结论 ZnT8的功能可能与小鼠睾丸间质细胞睾酮合成有关.
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不同胰岛自身抗体阳性1型糖尿病临床特征分析
目的 探讨单独或合并锌转运体8自身抗体(ZnT8A)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)及蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)阳性患者的1型糖尿病(T1DM)患者临床特征.方法 采用放射配体检测法检测中南大学湘雅二医院1999-2009年收治的539例T1DM患者的ZnT8A、GADA及IA-2A,并将其分成三个亚组进行比较.结果 (1)单一ZnT8A阳性组较抗体阴性组病程更长,胰岛素用量更大,收缩压更低,合并代谢综合征比例更少.单一ZnT8A阳性组较单一GADA阳性组BMI、WHR及空腹C肽值更高(P＜0.05),而糖化血红蛋白水平更低(P＜0.05)；(2)多个抗体阳性组起病年龄显著低于抗体阴性组(P＜0.05)；1个抗体阳性患者的空腹C肽及餐后2hC肽显著低于抗体阴性组(P＜0.05)；3个抗体阳性患者较1个抗体阳性患者的起病年龄更小(P＜0.01),BMI更低(P＜0.05),病程更短(P＜0.05).(3)合并任意两种抗体阳性中“GADA阳性与IA-2A阳性”组餐后C肽低(P＜0.01),空腹C肽也较低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 单独或合并ZnT8A,GADA及IA-2A的T1DM临床特征分析对临床具有重要的指导意义.
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1型糖尿病自身抗原研究进展
自身免疫是1型糖尿病发病的重要机制.1型糖尿病自身抗原的发现为疾病的发病机制及临床诊治开拓了视野.胰岛素、谷氨酸脱羧酶65、胰岛细胞瘤相关抗原2等是已发现的1型糖尿病主要的自身抗原.近年来,1型糖尿病自身抗原如嗜铬粒蛋白A、胰岛淀粉样多肽、锌转运体8、胰-十二指肠同源盒因子1备受重视.该文就1型糖尿病自身抗原的研究进展进行综述.
关键词： 1型糖尿病 嗜铬粒蛋白 胰岛淀粉样多肽 锌转运体8 胰-十二指肠同源盒因子1 -
锌转运体8自身抗体在1型糖尿病诊断及风险预测中的应用
目的 探讨锌转运体8自身抗体(zinc transporter isoform 8 autoantibody,ZnT8A)在1型糖尿病(T1DM)诊断及风险评估中的作用.方法 采用放射免疫沉淀法检测115例T1DM初诊病例、100例2型糖尿病(T2DM)患者对照,100例健康对照和120例T1DM高风险个体的ZnT8A阳性率,同时采用放免法检测谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)胰岛素自身抗体(IAA)及酪氨酸磷酸酶抗体2(IA-2A).对多种抗体联合检测效果用ROC曲线评价.结果 ZnT8A在T1DM组的检出率为33.0%(38/115),显著高于T2DM组(2.0%,2/100)和健康对照组(2.0%,2/100),差异有统计学意义(P＜0.001),T2DM组和健康对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).IAA、GADA和IA-2A在T1DM患者中的检出率分别为20.0%(23/115)、49.6%(57/115)和20.9%(24/115),ZnT8A阳性率低于GADA(P＜0.05),但高于IAA和IA-2A(P＜0.05),各抗体互有交叉重叠,单独的ZnT8A阳性率为6.1%(7/115).4种抗体联合检测总阳性率为67.8%(78/115),与ZnT8A+GADA+IAA三者联合、ZnT8A+GADA两者联合相比,ROC曲线下面积大,但差异无统计学意义(P>0.05).120例T1DM高危个体中,1例发现ZnT8A和GADA同时阳性,并在随访22个月后诊断为T1DM.结论 ZnT8A在T1DM初发病例中阳性率仅次于GADA,对判断T1DM发病风险和诊断T1DM有重要意义;多种抗体联合检测可以有效提高T1DM的诊断率,抗体种类越多,诊断价值越高,其中首选抗体为GADA和ZnT8A.
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GADA和ZnT8A与IA-2A在T1DM不同病程阶段的变化特点
目的 探讨锌转运体8自身抗体(ZnT8A)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和酪氨酸磷酸酶抗体2(IA-2A)在1型糖尿病(T1DM)初发病后不同病程的变化.方法 60例病程2年(每隔3月复诊)和75例病程5～ 10年(中位数6.9年)的T1DM患者于初发病和复诊时采集血清,用放免法检测ZnT8A、GADA和IA-2A水平.结果 135例T1DM患者初发病时ZnT8A、GADA和IA-2A的检出率分别为35.6％(48/135),57.0％(77/135)和23.7％(32/135),三抗体联合检测总阳性率为70.4％(95/135).病程2年的患者ZnT8A和IA-2A的滴度分别在发病后第15、18个月内下降了42.2％和44.8％,变化显著(P＜0.001),其后下降不显著(P＞0.05)；GADA则无显著变化(P＞0.05).75例T1DM患者病程5-10年后,ZnT8A和IA-2A的水平下降了48.2％和54.1％,变化显著(P值均＜0.001),而GADA则无显著变化(P＞0.05).结论 ZnT8A和IA-2A水平在T1DM发病早期尤其是发病后18个月内随病程延长而显著降低,GADA则不随病程变化.
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人ZnT-8作为1型糖尿病新型免疫调节剂的研究
目的:构建人锌转运体8(Zinctransporter 8,ZnT-8)羧基端原核表达载体,表达和纯化人ZnT-8羧基端(ZnT-8-COOH)重组蛋白,为寻找1型糖尿病新型免疫调节剂创造条件.方法:人ZnT-8-COOH cDNA克隆入pET-32a载体,在大肠杆菌BL21中利用异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-thio-β-D-galactoside,IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定表达产物,镍离子亲和层析纯化重组蛋白.40只4周龄的雌性非肥胖型糖尿病(non obese diabetic,NOD)小鼠随机分为ZnT-8重组蛋白预处理组及生理盐水对照组,分别腹腔注射ZnT-8重组蛋白和生理盐水,每周测量各组NOD小鼠体质量,检测血糖、血清C肽水平.结果:经PCR扩增后得到306 bp的DNA片段,成功构建到pET-32a表达载体上,经测序分析序列正确;ZnT-8重组蛋白在大肠杆BL21中获得成功表达,并得以有效纯化.ZnT-8重组蛋白预处理组NOD小鼠与生理盐水对照组相比,28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的体质量高于生理盐水对照组(P＜0.05).28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血糖低于生理盐水对照组(P＜0.05);28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血清C肽水平高于生理盐水对照组(P＜0.05).结论:成功制备人ZnT-8-COOH重组蛋白,并初步证实了其对1型糖尿病的免疫调节作用.
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ZnT8在糖尿病发病机制中的作用研究进展
众所周知,无论是1型糖尿病还是2型糖尿病,胰岛细胞功能障碍和胰岛素分泌不足在其中占有重要地位.而在人体的各个组织中,胰岛细胞含锌量高.研究发现胰岛中的锌含量与血糖水平密切相关,已证实锌转运体8(Zn Transporter 8,ZnT8)参与胰岛β细胞中锌浓度的调节过程,并在胰岛素生物合成及囊泡的形成和成熟过程中占有重要地位[1].
