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FHL1在慢性胰腺炎胰腺组织中的表达及其临床意义
目的：探讨细胞转录调节因子FHL1在慢性胰腺炎（ CP）胰腺组织中的表达及其临床意义。方法采集南京军区南京总医院消化内科收治的20例CP患者和同期体检合格的健康者血清，采用酶联免疫吸附试验法检测血清FHL1水平。取20只雄性Wistar大鼠，按体重随机分成对照组和CP组。通过大鼠尾静脉注射二丁基二氯化物建立CP模型。建模后28 d处死大鼠，分离大鼠胰腺，HE染色观察胰腺组织的病理变化。采用免疫组织化学染色法和蛋白质印迹法检测胰腺组织FHL1的表达。结果 CP患者、健康对照者血清FHL1水平分别为（0．86±0．22）、（1．18±0．22） g／L，CP 患者血清FHL1水平显著低于健康者，差异具有统计学意义（t＝10．54，P＝0．001）。 CP组大鼠胰腺小叶结构破坏，腺泡萎缩变形，纤维组织增生明显，其胰腺组织异常结构、腺泡萎缩、纤维化、炎性细胞浸润的病理评分分别为（2．2±0．4）、（2．0±0．7）、（2．4±0．3）、（2．8±0．6）分，对照组均为0分，两组差异具有统计学意义（t值分别为17．24、9．01、25．22、14．75，P值均＜0．001）。 CP组大鼠胰腺组织FHL1蛋白表达量显著低于对照组，差异具有统计学意义（免疫组织化学法：15798±3247比37570±9254， t＝2．438， P＝0．016；蛋白质印迹法：0．44±0．11比0．89±0．03，t＝4．289，P＝0．002）。结论 FHL1蛋白在CP胰腺组织中低表达，可能参与胰腺纤维化的形成。
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FHL1在新辅助化疗后乳腺癌组织中的表达变化及临床意义
目的 研究经新辅助化疗(NCT)的乳腺癌组织中抑癌基因FHL1表达的变化及临床意义.方法 对76例多西他赛联合吡柔比星新辅助化疗前后的乳腺癌标本进行FHL1检测,终69例化疗前标本和63例化疗后检测结果 纳入评价,前后配对的标本共59例,对新辅助化疗前后FHL1的表达率和表达强度进行比较.结果 化疗前FHL1阳性率为79.7%,化疗后阳性率为65.1%.化疗后FHL1表达增强l7例,不变12例,下调30例,配对等级资料检验证明FHL1在化疗后表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论多西他赛加吡柔比星新辅助化疗后FHL1表达下降.新辅助化疗降低FHL1表达可能会对部分患者的预后产生不良影响.
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FHL1与COPD大鼠肺血管重塑的关系及其机制
目的 探讨FHL1与COPD大鼠肺血管重塑的关系及肺动脉平滑肌细胞增殖及表型转换在其中的作用.方法 将20只雄性SD大鼠随机分为正常组及COPD组,每组10只.COPD组香烟烟雾暴露80 d复制COPD模型.图像分析法测定肺小动脉管壁厚度占外径的百分比(WT％)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA％).Western-blot法检测肺组织FHL1蛋白,荧光定量PCR法检测肺组织FHL1 mRNA.免疫组化法检测肺小动脉FHL1、α-actin及vimentin; PCNA法检测肺动脉平滑肌增殖细胞的阳性细胞率(PI);t检验及直线相关进行数据分析.结果 COPD组WT％和WA％较正常组升高(P＜0.05),COPD组肺组织FHL1蛋白及mRNA(133.250±25.499和4.963±0.692)较正常组(51.188±18.259和1.697±0.360)升高(P＜0.05).COPD组肺小动脉FHL1、vimentin、α-actin及PI(0.316±0.093、0.085±0.030、0.219±0.049和0.575±0.076)较正常组(0.241±0.093、0.069±0.023、0.163±0.042和0.429±0.092)升高(P＜0.05).肺小动脉FHL1表达与WT％、WA％、vi-mentin及PI呈正相关(P＜0.05),但肺小动脉FHL1表达与α-actin表达无相关性(P＞0.05).结论 COPD大鼠肺血管FHL1增加与肺血管重塑相关,FHL1可能通过增加肺血管平滑肌细胞增殖及促进平滑肌细胞合成表型转换参与COPD肺血管重塑.
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FHL1基因表达与先天性马蹄内翻足:15例患者及3名正常人的对比分析
背景:前期研究表明,在马蹄内翻足患者肌肉组织中存在FHL1基因表达下调,并利用凝胶阻滞实验在体外初步验证了HOXD13和FHL1基因启动子区转录因子预测位点的结合作用,但凝胶阻滞实验结果不一定能真实地反映体内转录调控蛋白和DNA结合的状况.目的:应用Western-blot技术进一步验证先天性马蹄内翻足患者足部肌肉组织中FHL1,HOXD13基因蛋白质水平的表达,应用染色质免疫沉淀技术验证在胚胎足部发育时在体内HOXD13和预测结合位点的结合作用.方法:15份先天性马蹄内翻足患儿肌肉组织标本由中国医科大学附属第二临床医院小儿外科提供,3份同年龄组正常儿童足部肌肉组织由中国医科大学法医学院提供,1例孕13周流产胚胎由中国医科大学附属第二临床医院妇产科提供.所有标本使用均经患者及其家属知情并同意.应用Western-blot方法检测15例先天性马蹄内翻足患儿及3例同年龄组正常儿童足部肌肉组织HOXD13和FHL1表达情况;并用软件预测FHL1基因上游HOXD13的结合位点,染色质免疫沉淀实验验证胚胎发育时HOXD13和FHL1的相互作用,以不表达HOXD13蛋白的脑组织作为对照.结果与结论:与同期正常儿童足部肌肉组织相比,15例人先天性马蹄内翻足患儿肌肉组织中有7例存在FHL1基因蛋白质水平表达下调,而这7例患儿中有5例同时存在HOXD13基因蛋白质表达下调.沉淀的人胚胎足部组织染色质中有预测HOXD13结合位点的扩增,无对照位点的扩增,对照脑组织中无预测位点的扩增.结果进一步验证显示了先天性马蹄内翻足患儿足部肌肉组织中FHL1、HOXD13基因表达下调;人类胚胎肢体发育过程中HOXD13蛋白可以和FHL1启动子区的预测位点结合发挥其转录调节作用.提示在人胚胎足部发育时,HOXD13表达下调导致了FHL1表达水平的下调,进而影响了足部肌肉生长发育和分化导致马蹄内翻足畸形的发生.
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FHL1在胸主动脉瘤发病机制中的初步研究
目的:研究FHL1蛋白在胸主动脉瘤发病机制中的作用.方法:利用Western Blotting分析胸主动脉瘤患者与正常人主动脉组织中FHL1蛋白表达的情况,利用免疫组织化学检测FHL1蛋白在主动脉组织中的定位,并进一步分析该蛋白在两组中的表达情况,结合文献报道分析FHL1蛋白在胸主动脉瘤发病机制中的作用.结果:Western Blotting、免疫组织化学分析均表明FHL1蛋白在胸主动脉瘤患者主动脉组织表达水平较正常人明显降低,FHL1蛋白主要定位于主动脉血管平滑肌细胞的细胞质中.结论:FHL1蛋白在胸主动脉瘤患者主动脉组织中明显降低,这可能导致主动脉血管平滑肌细胞增殖能力下降,从而在胸主动脉瘤的发病中发挥重要的作用.
关键词： FHL1 Western blotting 免疫组织化学 胸主动脉瘤 -
FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响
目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响.方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估.结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.0022);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48％,明显高于两个低表达组(16.41％、20.12％)及空白对照组(25.90％),差异有统计学意义(P＜0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P＜0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P＜0.001).结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功.FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡.
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FHL1的结构和功能及其与疾病的关系
FHL(four and a half LIM domain)家族是含有4 个半LIM结构域的蛋白家族,现发现该家族由5 个成员,即FHL1、FHL2、FHL3、FHL4、FHL5 /ACT 组成,其表达具有组织特异性.它们通过LIM结构域与某些结构蛋白、激酶、转录调控因子等多种蛋白质相互作用,对某些基因的表达、细胞分化与发育、细胞骨架形成等发挥重要调控作用.FHL1(four and a half LIM domain 1)是FHL家族中表达广泛的成员,尤其在骨骼肌和心肌中高表达.近年研究表明其参与某些病理过程,与心血管疾病、肌肉疾病、肿瘤疾病等相关.
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FHL1在人胰腺癌族中的表达及其与胰腺癌的侵袭及转移的相关性研究
目的:探讨FHL1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与胰腺癌临床病理特征的关系.方法:利用Western blot检测62例胰腺癌手术切除标本与其相对应的癌旁胰腺组织中FHL1蛋白的表达.用Log-rank检验分析FHL1蛋白表达与预后的关系.结果:FHL1的蛋白表达在胰腺癌中与对应癌旁胰腺组织相比下降明显(0.197±0.042 vs. 0.508±0.272,P<0.01).同时,FHL1在胰腺癌中的表达与临床分期、病理分级、淋巴结转移、肿瘤累及范围、远处转移均有明显差异(P<0.05),与高表达FHL1组相比,低表达FHL1组患术后生存时间明显缩短(P<0.01).结论:FHL1的异常表达很可能与胰腺癌的侵袭、转移等密切相关,而这种异常表达又影响了胰腺癌患的预后.
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还原体肌病研究进展
还原体肌病(RBM)是一种少见肌病,目前其病因尚未清楚,发病机制多倾向于FHL1基因突变.人们对其缺少深刻认识,国内文献对其介绍的报道也较少.本文参考国外新文献就其临床表现及发病机制综述如下:
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FHL1和桩蛋白在低氧/炎症诱导形成肺动脉高压大鼠肺内的表达
目的 了解FHL1和桩蛋白(Paxillin)在低氧/炎症条件下与肺血管重塑的关系.方法 将40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、低氧组、百合碱组、低氧+百合碱组,每组10只,测大鼠平均肺动脉压力(mPAP)、右心室肥厚指数(RVHI)及肺小动脉相应管壁中膜厚度占其管径的百分比(WT％).采用免疫组织化学染色法测定各组大鼠肺内FHL1、Paxillin的表达情况,并对肺组织切片进行图像分析.结果 低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组大鼠的mPAP与对照组相比均显著升高(均P＜0.01),三组的RVHI与对照组相比均升高(均P ＜0.05),三组的WT％与对照组相比均显著升高(p＜0.01).低氧组、百合碱组及低氧+百合碱组三组大鼠的肺动脉FHL1免疫阳性染色分别为(0.16±0.03)、(0.15±0.03)、(0.21±0.03),与对照组(0.08±0.02)相比明显增强(均P ＜0.05);三组的Paxillin免疫阳性染色分别为(0.19±0.03)、(0.21±0.04)、(0.22±0.04),与对照组(0.11±0.03)相比明显增强(均P＜0.05).结论 在缺氧/炎症诱导肺动脉高压形成的过程中FHL1、Paxillin均表达增加,可能在肺血管重塑和肺动脉高压的发病过程中起到一定的作用.
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低氧性肺动脉高压大鼠肺内FHL1的表达
目的 了解低氧肺动脉高压时肺内FHL1与肺血管重建的关系.方法 将20只雄性Wistar大鼠分为对照组和低氧肺动脉高压组,低氧肺动脉高压组以常压低氧复制大鼠肺动脉高压模型,以微导管法测定各组大鼠肺动脉压,采用免疫组织化学法检测各组大鼠肺内FHL1、细胞骨架蛋白1(Talin1)及细胞周期素D(Cyclin D)的表达,对肺组织切片进行图像分析.结果 低氧3周后,低氧肺动脉高压组大鼠形成明显的肺动脉高压,管壁增厚,管腔狭窄,大鼠肺动脉压(2.86±0.39)kPa,右心室肥厚指数[RV/(LV+S)]为(43.53±3.38)％,管壁厚度占外径的百分比(WT％)为(35.24±11.2)％,管壁面积占血管总面积的百分比(WA％)为(55.09±12.38)％,分别与对照组[(1.35±0.28)kPa、(23.68±3.48)％、(23.63±9.74)％和(41.62±12.83)％]相比升高(P＜0.01);肺小动脉FHL1免疫阳性染色在低氧肺动脉高压组大鼠为1.48±0.03,与对照组(0.86±0.02)相比增强(P＜0.01);低氧肺动脉高压组大鼠Talin1免疫阳性染色为(1.52±0.04),与对照组(0.92±0.03)相比增强(P＜0.01);低氧肺动脉高压组大鼠Cyclin D免疫阳性染色为(1.46±0.02),与对照组(0.73±0.04)相比增强(P＜0.01).结论 低氧所致FHL1的合成增多在低氧性肺血管重建和肺动脉高压的发病过程中起一定的作用,其作用可能与Talin1、Cyclin D有关.
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FHL1和 Smad4在结直肠癌中的表达及与肝转移的关系
目的：探讨FHL1和Smad4在结直肠癌组织中的表达及与结直肠癌肝转移的相关性。方法选择结直肠癌患者112例，分为肝转移组及无肝转移组，应用免疫组织化学法检测FHL1和Smad4在结直肠癌及癌旁组织中的表达，分析两者在结直肠癌中的表达情况，及与肝转移的相关性。结果在结直肠癌组织中，FHL1的阳性表达率为20.5％（23／112），在癌旁组织中阳性表达率为94.6％（106／112），Smad4在两种组织中的阳性表达率分别为14.3％（16／112），96.4％（108／112），差异均有统计学意义（P均＜0.05）；无肝转移组中Smad4和FHL1的阳性表达率明显高于肝转移组中Smad4和FHL1的阳性表达率，差异有统计学意义（均P＜0.05）。单因素分析结果提示结直肠癌临床分期、淋巴结转移、FHL1及Smad4表达与肝转移相关（均P＜0.05），多因素logistic回归分析显示FHL1及Smad4蛋白表达是结直肠肝转移的独立危险因素。 Spearman相关分析显示FHL1蛋白表达与Smad4呈正相关（r＝0.462，P＜0.05）。结论结直肠癌中FHL1及Smad4低表达与肝转移相关，是结直肠癌肝转移的独立影响因素，可作为预测结直肠癌肝转移的生物学指标。
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FHL1抗体的制备与特异性鉴定
目的: 制备FHL1及其剪接体FHL1B、 FHL1C的多克隆抗体, 并对其特异性进行鉴定.方法: 融合表达GST-FHL1蛋白, 常规免疫小鼠, 制备多克隆抗体.分别构建带有FLAG标签的FHL1-5、 FHL1B、 FHL1C以及FHL1 N端和C端缺失突变体的真核表达载体.Western blot检测抗体的特异性.结果: 获得了FHL1-5、 FHL1B、 FHL1C及FHL1(1-169 aa)和FHL1(168-280 aa)的真核表达载体; 得到的多克隆抗体可特异识别FHL1、 FHL1B和FHL1C, 而不识别FHL2-5; 抗体与FHL1 N端反应, 而不与其C端反应.结论: 成功得到可特异识别FHL1、 FHL1B和FHL1C的多克隆抗体, 为进一步研究FHL1及其剪接突变体的功能奠定了坚实的基础.
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低氧性肺动脉高压大鼠血清和肺组织FHL1的变化
目的 探讨FHL1在低氧性肺动脉高压发病机制中的可能作用.方法 将20只雄性Wistar大鼠分为2组,即10只低氧性肺动脉高压为实验组(以常压低氧建立大鼠肺动脉高压模型)和10只常压常氧正常对照组.右心导管法测定2组大鼠平均肺动脉压力(mPAP),并分别计算管壁厚度占血管外径的百分比(WT%)和管壁面积占血管总面积的百分比(WA%).酶联免疫吸附法检测2组大鼠血清FHL1浓度和荧光PCR法观察大鼠肺组织FHL1 mRNA表达.结果 实验组大鼠肺动脉压(2.86±0.39)kPa,右心室肥厚指数[RV/(LV+S)]为(43.53±3.38)%、WT%为(35.24±11.2)%,WA%为(55.09±12.38)%,分别与对照组的(1.35±0.28)kPa、(23.68±3.48)%、(23.63±9.74)%和(41.62±12.83)%比较明显升高(P＜0.05);血清FHL1浓度(ng·mL-1)高于对照组[(646.2±41.8)ng·mL-1与(364.8±38.5)ng·mL-1,P＜0.05],实验组大鼠肺组织FHL1 mRNA的含量亦较对照组增加[(8.47 e-3±3.12 e-3)与(5.407 e-3±2.31 e-3),P＜0.05].相关分析表明,FHL1 mRNA与WT%、WA%、mPAP呈正相关(P＜0.05).结论 低氧后大鼠肺组织FHL1的合成和释放增多,FHL1增加可能与低氧性肺动脉高压的发生有关.
