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人类真核翻译延长因子1A2过表达对胰腺癌SW1990细胞体外侵袭及体内转移的影响
目的 探讨人类真核翻译延长因子1A2(EEF1A2)过表达对人胰腺癌SW1990细胞体外侵袭和肺转移潜能的影响.方法 通过携带EEF1A2的慢病毒感染人胰腺癌SW1990细胞建立EEF1A2稳定过表达的SW1990/EEF1A2细胞株及空质粒对照的SW1990/GFP细胞株,并以亲本SW1990细胞作为空白对照.采用实时PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞EEF1A2mRAN和蛋白的表达.应用Transwell小室检测细胞的体外侵袭能力.通过裸鼠尾静脉注射癌细胞方法构建肺转移模型,8周后观察并计数肺表面的转移结节.结果 SW1990/EEF1A2细胞EEF1A2 mRNA相对表达量为3.252±0.344,显著高于SW1990/GFP细胞的1.000±0.060及亲本细胞的0.944±0.041(t值分别为2.255、2.305,P值均＜0.01)；EEF1A2蛋白表达量为0.833±0.050,显著高于SW1990/GFP细胞的0.247±0.035及亲本细胞的0.273 ±0.041(t值分别为0.572、0.559,P值均＜0.01)；穿膜细胞数为(60 ±4)个,显著多于SW1990/GFP细胞的(33 ±4)个和亲本细胞的(26 ±3)个(t值分别为31.33、34.78,P值均＜0.01)；裸鼠肺转移结节显著多于SW1990/GFP细胞及亲本细胞组(5/5比1/5、1/5,P值均＜0.05).结论 EEF1A2过表达可以明显增强胰腺癌SW1990细胞的体外侵袭和肺转移能力.
关键词： 胰腺肿瘤 人类真核翻译延长因子1A2 慢病毒感染 肿瘤侵袭 肿瘤转移 -
靶向沉默人类真核翻译延长因子1A2可抑制胰腺癌细胞BxPC-3体外迁移和侵袭
目的:探讨靶向沉默人类真核翻译延长因子1A2 (homo sapiens eukaryotic translation elongation factor 1 alpha 2,EEF1A2)对胰腺癌BxPC-3细胞体外迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制.方法:应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测4种胰腺癌细胞株中EEF1A2的mRNA和蛋白表达水平.将EEF1A2-小干扰RNA (smallinterference RNA,siRNA)和阴性对照siRNA转染到BxPC-3细胞中,随后采用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测EEF1A2的mRNA及蛋白表达,应用体外划痕和Transwell侵袭实验分别检测BxPC-3细胞的体外迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中p -Akt和总Akt蛋白的表达变化.结果:4种胰腺癌细胞株中除SW1990细胞呈EEF1A2低表达外,BxPC-3、Patu8988和Panc-1细胞均呈EEF1A2高表达.EEF1A2-siRNA转染BxPC-3细胞48 h后,EEF1A2 mRNA及蛋白表达水平较阴性对照siRNA转染的细胞和空白对照细胞明显降低(P＜0.01).EEF1A2-siRNA转染组BxPC-3细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于阴性转染对照组和空白对照组(P＜0.05).EEF1A2-siRNA转染组细胞中Akt的磷酸化水平明显低于对照组细胞(P＜0.05),而总Akt蛋白表达水平未显著改变(P＞0.05).结论:siRNA干扰下调EEF1A2基因表达可明显抑制胰腺癌BxPC-3细胞的体外迁移和侵袭,其机制可能与EEF1A2调控Akt信号通路有关.
