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PARP-1抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用
目的:研究聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)抑制剂PJ34对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响及其作用机制,以及PJ34是否进一步增强γ射线对肝癌细胞的增殖抑制作用.方法:细胞增殖实验观察不同浓度的PJ34,以及PJ34合并γ射线照射对HepG2细胞增殖的影响,流式细胞仪检测PJ34对HepG2N细胞凋亡的影响.结果:PJ34对HepG2细胞的增殖有显著的抑制作用(t=15.175,P＜0.01).随着PJ34浓度的增加,其抑制作用进一步增强.1Gy的γ射线照射对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,但γ射线照射联合PJ34与单用PJ34或γ射线照射对肝癌细胞的增殖抑制作用相比较无明显统计学差异(t=-1.413,P＞0.05).PJ34能诱导HepG2细胞凋亡,72h时凋亡率明显高于对照组,二者有显著性差异(33.2% vs 11.4%,P＜0.01).结论:PARP-1抑制剂PJ34通过诱导HepG2细胞凋亡抑制人肝癌细胞的增殖;PJ34并不显著增加γ射线对HepG2细胞增殖的抑制作用.
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PJ34对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑组织MMP-9、Claudin-5表达的影响
目的 探讨多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)抑制剂PJ34对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血侧皮层金属蛋白酶9(MMP-9)和Claudin-5表达的影响.方法 采用线栓法制备大鼠局灶脑缺血再灌注模型,腹腔注射PJ34,用伊文思蓝(EB)法检测血脑屏障通透性变化,采用2,3,5-三氨基苯甲四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积变化,免疫组化和western blot方法检测脑缺血侧皮层MMP-9和Claudin-5表达.结果 与假手术组比较,随缺血再灌注时间延长,模型组MMP-9表达、EB含量、脑梗死体积逐渐增加,48 h达峰;Claudin-5的表达、EB含量、脑梗死体积逐渐减少,48 h低(P均<0.05).与模型组比较,PJ34组MMP-9表达、EB含量、脑梗死体积在各个时间点明显降低,Claudin-5的表达、EB含量、脑梗死体积在各个时间点明显增高(P均<0.05).结论PJ34通过抑制MMP-9的表达,增加Claudin-5的表达来维持血脑屏障通透性,对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用.
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PARP-1抑制剂PJ34对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的影响
目的 探讨PARP-1抑制剂PJ34对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的影响.方法 线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,135只大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注模型组(IR组)、PJ34干预组(PJ34组),每组45只,每组大鼠再随机分为3个亚组,分别在再灌注6、24和48 h时间点处死.测定伊文思蓝(EB)含量,观察脑组织血脑屏障通透性.免疫组织化学及western bolt方法观察缺血侧皮层肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性变化.结果与sham组比较,IR组大鼠EB含量、TNF-α及MMP-9的表达明显升高(P<0.05);与IR组比较,PJ34组EB含量、TNF-α及MMP-9表达水平明显降低(P<0.05).结论 PARP-1抑制剂PJ34对大鼠脑缺血再灌注损伤后血脑屏障有一定的保护作用,其作用机制与降低缺血侧皮层TNF-α、MMP-9的表达水平,维持血脑屏障的稳定性有关.
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PJ34对帕金森病小鼠黑质凋亡诱导因子核移位的影响
目的 探讨多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺(DA)能神经元凋亡诱导因子(AIF)核移位的影响. 方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,2、24、72 h后取中脑组织进行酪氨酸羟化酶(TH)免疫染色观察黑质DA能神经元的损害情况,AIF免疫组化染色和Western印迹方法检测AIF的核移位情况.另经PJ34预处理该模型后,对上述指标进行检测. 结果 PD小鼠黑质DA能神经元出现AIF核移位,PJ34预处理显著抑制AIF的核移位,减少PD小鼠黑质致密部DA能神经元的脱失现象(P＜0.01).结论 AIF的核移位在PD的发病过程发挥重要作用,PJ34通过抑制黑质DA能神经元AIF的核移位对PD小鼠产生保护作用.
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PJ34对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元保护的实验研究
目的 研究多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对帕金森病(PD)小鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的保护作用.方法 采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)制备PD小鼠模型,2、24、72 h后取中脑组织进行酪氨酸羟化酶(TH)观察DA能神经元的损害情况,同时应用多聚ADP核糖聚合物(PAR)免疫组化染色检测PARP的活性改变.另经PJ34预处理该模型后,对上述指标进行检测.结果 PD小鼠黑质DA能神经元出现一过性PARP的过度活化,PJ34预处理显著抑制PARP活性,减轻PD小鼠黑质致密部TH阳性神经元的脱失现象(P＜0.01).结论 PARP的活性改变在PD的发病过程发挥重要作用,PJ34通过抑制PARP过度活化对PD小鼠黑质DA能神经元产生保护作用.
关键词： 帕金森病 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 多聚ADP-核糖聚合酶 PJ34 -
聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1抑制剂对氢醌致人胚肺成纤维细胞凋亡的影响
目的 探讨聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(PARP-1)特异性抑制剂N-(6-氧-5,6-二氢菲啶-2-羟基)-N,N.二甲基乙酰胺-盐酸(PJ34)对氢醌(HQ)所致人胚肺成纤维细胞(HLF 细胞)凋亡的影响及其作用机制.方法 将离体传代培养的HLF细胞分为阴性对照组、阳性对照组(HQ组)、3个PJ34组和3个PJ34+HQ组.按PJ34不同浓度(0.5、1.0、2.0 μmoLL)分为PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用4 h后检测结果;按PJ34的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组浓度及作用4 h后再分别加入HQ(80μmol/L)分为PJ34+HQ的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,作用24 h检测结果;HQ组仅用HQ 24 h处理.采用PARP-1单克隆抗体荧光标记,流式细胞术检测HLF细胞中PARP-1蛋白表达、细胞凋亡和细胞复制后期(G2)细胞数情况,噻唑蓝(MTT)比色法测定HLF细胞相对存活率.结果 各组给予不同剂量的PJ34 4 h后,HLF细胞的存活(增殖)明显受抑制(P
关键词： 聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1 PJ34 氢醌 凋亡 人胚肺成纤维细胞 -
PJ34对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
目的 探讨多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)抑制剂PJ34对糖尿病大鼠肾脏保护作用及其可能机制.方法 将SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、模型治疗组,模型治疗组给予PJ34 10mg/kg,正常对照组及模型对照组给予同等剂量的纯化水.测定尿白蛋白排泄量(UAE)、内生肌酐清除率(Ccr)、血浆及肾组织一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、转化生长因子β1(TGF-β1)和肾小球蛋白激酶C(PKC) 水平,并行肾组织形态学观察.结果 4周时,模型对照组Ccr、UAE、NO、NOS及肾小球细胞膜PKC明显高于正常对照组,ET低于正常对照组;8周时,糖尿病大鼠肾小球细胞膜PKC明显高于正常对照组,NO和NOS均低于正常对照组,ET高于正常对照组.8周时模型治疗组大鼠的Ccr、尿白蛋白量和肾小球细胞膜PKC,以及4周时NO、NOS明显低于模型对照组.模型治疗组的肾功能及肾病变明显改善,肾组织中ET水平、TGF-β1表达减少.结论 PJ34对糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,可能与抑制PKC、肾脏NO合成及降低肾组织ET和TGF-β1水平有关.
关键词： 多聚(ADP-核糖)聚合酶 糖尿病肾病 蛋白激酶C PJ34 -
PARP抑制剂PJ34在绿脓菌素引起的巨噬细胞损伤中的作用
目的:研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂PJ34对绿脓菌素(Pyocyanin,PCN)引起的腹腔来源巨噬细胞RAW264.7损伤的保护作用.方法:分别采用800 nM的PJ34预处理细胞2 h(对照组给与0.1％Dimethyl sulfoxide,DMSO)后,不同浓度的PCN(50μM,100μM)刺激24 h,M T T法检测绿脓菌素及PJ34对RAW264.7细胞存活率的影响;采用800 nM的PJ34预处理细胞2 h(对照组给与0.1％DMSO),给与PCN(100μM,3 h)刺激,荧光显微镜及流式细胞术检测细胞内活性氧自由基(Reactive oxi-dant species,ROS)的水平,并采用激光共聚焦显微镜观察RAW264.7细胞内钙离子水平;或加入18μg·mL-1碳颗粒继续共孵育2 h,显微镜下观察RAW264.7细胞吞噬碳颗粒的情况.结果:PJ34预处理组细胞与单用PCN处理组比较,细胞存活率提高近20％;PJ34预处理缓解了PCN刺激诱导的RAW264.7细胞内ROS和Ca2+水平的升高(P<0.05),并降低了RAW264.7细胞由PCN刺激引起的吞噬功能损伤.结论:PJ34通过抑制PCN引起的RAW264.7细胞内ROS和Ca2+水平升高,提高细胞的存活率并增强细胞的吞噬功能.
关键词： 绿脓菌素 氧化应激 RAW264.7细胞 PJ34 -
PJ34对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞体外生长及其对马法兰敏感性的影响
目的:观察PJ34对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226体外生长的影响以及与小剂量马法兰的协同作用,初步探讨其作用机制.方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,Western blot方法检测FA/BRCA途径中的相关蛋白表达、流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率.结果:PJ34能使细胞发生G2/M期阻滞、协同马法兰诱导 细胞凋亡作用.PJ34与马法兰联用与单用马法兰相比,细 胞凋亡率由(31.08±0.47)%增至(45.38±4.53)%.PJ34介导的FA/BRCA途径相关因子受抑制及γH2AX表达增强,从而抑制DNA的损伤修复.结论:PJ34对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞有显著的抑制作用,并可增加RPMI8226细胞对烷化剂类化疗药物马法兰的敏感性,其作用机制可能是通过抑制FA/BRCA途径对DNA损伤的修复.PJ34与小剂量烷化剂化疗药物合用,是一种安全有效的逆转耐药的治疗方案.
