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p53凋亡刺激蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义
目的 研究分析p53遗传背景不同的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的表达和调节,以及在NSCLC诊断和化疗监测中的临床意义.方法 用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测NSCLC细胞株A549(野生型)和NCI-H157(突变型)及37例肺癌患者组织与外周血单个核细胞中ASPP1、ASPP2 mRNA表达,免疫印迹技术检测NSCLC细胞株ASPP1、ASPP2蛋白含量.同时,检测2株细胞对顺铂(CDDP)的敏感性以及化疗药物处理后ASPP1、ASPP2mRNA表达变化.此外,还比较NSCLC患者与37名健康对照者ASPP1、ASPP2 mRNA表达情况,并监测NSCLC患者化疗前后ASPP1、ASPP2 mRNA表达变化.结果 FQ-RT-PCR检测ASPP标准品曲线斜率均值分别为-3.249、-3.358,r＞0.98,标准曲线的扩增效率分别为1.156、1.028;CDDP处理后NCI-H157细胞株的IC_(50)值是3.70μg/ml,A549的IC_(50)是10.48μg/ml.NCI-H157细胞株中ASPP1,ASPP2 mRNA平均表达量比A549分别高2.66倍和6.98倍.肺癌患者组织和外周血单个核细胞中ASPP1 mRNA表达分别为(4.27 ±0.57)×10~3和(2.49±0.32)×10~3,ASPP2 mRNA表达分别为(2.34±0.75)×10~3和(7.00±1.17)×10~3,而健康对照组组织和外周血单个核细胞中ASPP1 mRNA 表达分别为(1.32±0.21)×10~4和(1.46±0.31)×10~4,ASPP2 mRNA表达分别为(1.38±0.19)×10~4和(1.28±0.18)×10~4.肺癌组中ASPP1和ASPP2 mRNA明显低于健康对照组(t值分别为2.58、3.94、3.62、3.76,P均＜0.05).NSCLC组中18例患者术后化疗前ASPP1和ASPP2 mRNA分别为(2.34±0.56)×10~3和(6.64±0.72)×10~3,进行2个周期化疗后分别为(3.66±0.64)×10~3和(9.42±0.44)×10~3,基因表达量均明显升高(t值分别为3.02、4.50,P均＜0.05).结论 NSCLC突变型细胞株ASPP1和ASPP2 mRNA的表达均高于野生型细胞株,ASPP1和ASPP2表达升高有可能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.NSCLC患者化疗过程中,ASPP1和ASPP2 mRNA表达的变化可能与化疗药物作用有关,提高ASPP1、ASPP2的表达将有助于肿瘤的治疗.
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ASPP蛋白家族的研究进展
P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,ASPP)家族是新近发现的与P53有关的肿瘤抑制基因家族.P53是目前公认的肿瘤抑制基因,他能诱导细胞周期阻滞或直接诱导细胞凋亡,但其如何作用这两种不同选择的机制一直不清,直到ASPP家族的发现,才使这一问题逐渐明了.ASPP与P53的作用主要是能特异性增强P53的细胞凋亡功能,而对P53的细胞生长停滞功能则没有影响.
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自噬和p53凋亡刺激蛋白在大鼠急性肾损伤模型中的表达及早期诊断价值
目的 观察自噬相关蛋白和p53凋亡刺激蛋白(ASPPs)在肾损伤早期的表达变化,探讨自噬相关蛋白和ASPPs是否可能成为急性肾损伤(AKI)早期损伤生物标志物.方法 建立顺铂AKI大鼠模型,将46只雄性SD青年大鼠随机分为假手术组(Sham),顺铂模型组;模型组大鼠一次性腹腔注射顺铂5 mg/kg,Sham组相同途径注射等容量生理盐水;在给药1、3、7、10、14 d 时检测大鼠血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)和胱抑素 C (cystatin C,Cys C)水平;光镜观察大鼠肾脏病理变化;透射电镜观察大鼠肾小管上皮细胞超微结构变化及自噬体的情况;免疫印迹法检测肾脏组织LC3、Atg5-Atg12、Beclin 1、LAMP-2、p62、p53及iASPP和ASPP1表达情况.所有数据采用SPSS 17.0统计软件分析.结果 青年大鼠暴露于顺铂1 d时,与Sham组比较,顺铂模型组大鼠Scr、BUN、胱抑素 C显著升高(P<0.05);光镜检查发现肾小管损害明显加重;电镜结果显示,顺铂模型组大鼠平均自噬体数量明显增多;顺铂诱导后1 d开始,肾脏组织iASPP蛋白表达明显减少(P<0.05),Atg5-Atg12、Beclin 1、LAMP-2、p62、p53及ASPP1蛋白表达明显升高(P<0.05).肾脏组织LC3表达从3 d时明显降低(P<0.05).结论 自噬和ASPPs在AKI发生早期即可出现并参与了AKI的发生发展,在Scr开始升高前,反应性自噬已经启动.自噬相关蛋白和ASPPs有望成为AKI更早期的损伤标志物,可能是AKI早期干预的新靶点,但仍需更深入的研究.
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p53凋亡刺激蛋白家族蛋白表达与非小细胞肺癌患者预后的关系
目的 分析p53凋亡刺激蛋白(ASPP)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后的关系.方法 收集1997年9月至2005年12月经病理或细胞学确诊的91例NSCLC患者的临床资料.采用免疫组化方法检测ASPP1、ASPP2、iASPP和p53的表达,分析ASPP家族蛋白的表达与患者预后的关系.结果 在Ⅲ～Ⅳ期NSCLC患者中,ASPP2阳性组和阴性组患者的中位生存期分别为18和7个月,差异有统计学意义(P =0.002).Ⅰ期NSCLC患者中,iASPP阴性组和阳性组的中位生存期分别为22个月和2个月,差异有统计学意义(P=0.000 3).Ⅲ期NSCLC患者中,iASPP阴性组和阳性组的中位生存期分别为19个月和7个月,差异有统计学意义(P =0.014 1).p53野生型患者54例,其中Ⅲ期NSCLC患者15例,其ASPP2阳性组和阴性组患者的中位生存期分别为22和11个月,差异有统计学意义(P =0.029 3);Ⅰ期NSCLC患者14例,其iASPP阴性组和阳性组的中位生存期分别为41个月和7个月,差异有统计学意义(P =0.021 6).Ⅲ期NSCLC患者iASPP阴性组和阳性组的中位生存期分别为21个月和2个月,差异有统计学意义(P =0.001 1).突变型p53患者37例,其中15例Ⅲ期NSCLC患者获得随访,ASPP2阳性组的生存期高于阴性组(P =0.019 2).Cox多因素分析结果显示,ASPP2、iASPP蛋白表达和治疗方式与患者的预后有关(均P＜0.05).结论 ASPP2和iASPP的表达对NSCLC生存期有一定的预测作用,ASPP2表达阳性的患者预后较好,iASPP表达阳性的患者预后较差.
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iASPP在压力诱导的视网膜神经节细胞凋亡中的表达及意义
目的：观察P53凋亡刺激蛋白（ASPP家族的抑制因子 iASPP）在压力诱导的视网膜神经节细胞（RGC-5）凋亡中的表达及意义。方法将视网膜神经节细胞（RGC-5细胞）分别在60mmHg和80mmHg压力条件下培养48小时，MTT方法检测细胞活力，细胞染色检测凋亡，RT-PCR，WESTERN-BLOT检测 P53和 iASPP基因的变化。结果随着压力的增加 RGC-5细胞活力下降，细胞凋亡逐渐增加，P53基因表达增加，iASPP基因的表达下降。结论在压力诱导的RGC-5细胞凋亡中iASPP 表达下降可能使P53活性增加，促进RGC-5细胞凋亡的发生，上调iASPP表达可能具有神经保护作用。
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结肠癌组织中p53凋亡刺激蛋白家族表达水平及其与临床病理学特征的相关性研究
目的:探讨结肠癌组织中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族表达水平及其与临床病理学特征的相关性.方法:选取结肠癌患者的结肠癌组织共50例,以及健康人的正常结肠组织共30例.分析ASPP家族与结肠癌的组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移等临床特征的相关性.结果:结肠癌组织与正常结肠组织中ASPP1和ASPP2的阳性表达率差异均无统计学意义(P>0.05);而结肠癌组织中iASPP的阳性表达率显著高于正常结肠组织(P<0.05);结肠癌组织中iASPP的阳性表达率在肿瘤病理分级间差异均无统计学意义(P>0.05),而ASPP1和ASPP2的阳性表达在肿瘤病理分级间差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01);结肠癌组织中ASPP1与iASPP的阳性表达在肿瘤浸润深度间差异均无统计学意义(P>0.05),ASPP2的阳性表达在肿瘤浸润深度间差异有统计学意义(P<0.05);而结肠癌组织中ASPP1、ASPP2和iASPP的阳性表达均在淋巴结有无转移间差异均无统计学意义(P>0.05).结论:iASPP在结肠癌组织和正常组织的阳性表达的差异,表明其有可能成为结肠疾病良、恶性的诊断及鉴别指标之一;ASPP2的阳性表达与结肠癌病理分期和分级有相关关系,表明其有可能成为结肠癌预后指标之一.
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P53和iASPP在子宫颈癌组织的表达及意义
目的 探讨P53、P53凋亡刺激蛋白(iASPP)在子宫颈癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化PV-6000二步法,检测P53和iASPP在40例慢性子宫颈炎、60例宫颈上皮内瘤变(CIN)、65例宫颈癌组织中的表达.结果 子宫颈癌、CIN及慢性子宫颈炎组织中iASPP阳性表达率分别为81.5％(53/65)、43.3％(26/60)、12.5％(5/26),3组比较差异有显著性(x2=10.67～47.73,P＜0.01).慢性子宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中P53的阳性表达率分别为10.0％(4/26)、33.3％(20/60)和58.5％(38/65),CIN及宫颈癌组织中P53蛋白的阳性表达率均高于慢性子宫颈炎组织,差异有显著性(x2 =7.16～124.23,P＜0.05).临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期宫颈癌组织的P53阳性表达率分别为48.6％(17/35)、57.9％(11/19)、90.9％(10/11),差异有显著性(x2=6.181,P＜0.05)；高、中、低分化宫颈癌组织iASPP的阳性表达率分别为68.2％(15/22)、73.3％(11/15)、96.4％(27/28),差异有显著性(x2 =7.402,P＜0.05).宫颈癌组织中P53、iASPP的表达呈正相关(r=0.31,P＜0.05).结论 iASPP、P53在子宫颈癌组织中高表达,两者与子宫颈癌的发生、发展相关,iASPP的表达与子宫颈癌的恶性程度有关.
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食管鳞癌组织中 ASPP2、p53、E-cad 表达及其与预后的相关性
目的：探讨ASPP2、p53、E-cad在食管鳞癌组织中的表达，分析其与预后的相关性。方法采用免疫组化SP法检测136例食管鳞癌及37例正常食管黏膜组织中ASPP2、p53、E-cad的阳性表达情况，分析其与食管鳞癌患者临床病理特征的关系，采用单因素Kaplan-Meier法及Cox多因素比例风险模型分析ASPP2、p53、E-cad的表达与患者术后生存的关系。结果 ASPP2、p53、E-cad在食管鳞癌组织中的阳性率分别为49．3％、89．7％、46．3％，在正常食管黏膜组织中的阳性率分别为94．6％、21．6％、78．4％（P均＜0．05）。 ASPP2、p53、E-cad的异常表达均与食管鳞癌的淋巴结转移情况有关，ASPP2、E-cad的异常表达与肿瘤的组织学分级和TNM分期有关，E-cad的异常表达与肿瘤浸润深度有关（P＜0．05或＜0．01）。食管鳞癌组织中，ASPP2与p53呈负相关，ASPP2与E-cad呈正相关， p53与E-cad呈负相关（r分别为－0．295、0．620、－0．169，P均＜0．05）。 ASPP2、E-cad是影响食管鳞癌术后生存的独立因素。结论 ASPP2、p53、E-cad异常表达在食管鳞癌的淋巴结转移中可能起协同作用，且ASPP2、E-cad与食管鳞癌的预后密切相关，联合检测ASPP2、p53、E-cad有助于判断食管鳞癌患者的预后。
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ASPP家族及其与p53相互作用的研究进展
p53是一个肿瘤抑制蛋白,它通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞,同时还会因为DNA的损伤增多,诱导细胞发生细胞凋亡.p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚,而近发现的p53凋亡刺激蛋白-ASPP蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展.ASPP蛋白家族与p53的作用主要是特异性增强p53的细胞凋亡功能,而对p53的细胞生长停滞功能则没有作用.ASPP蛋白家族增强p53的细胞凋亡功能是通过增强p53的促凋亡基因启动子与DNA的结合而促进细胞凋亡,现就此作一综述.
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p53凋亡刺激蛋白基因5′端非编码区CpG岛高甲基化与其mRNA表达的改变
目的了解ASPP1和ASPP2基因5′端非编码区CpG岛在野生型p53肿瘤细胞中的甲基化状况及其与mRNA异常表达的关系.方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异的PCR方法测定DNA甲基化.结果肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2 mRNA表达减少,同时ASPP基因的5′端非编码区出现异常高甲基化.结论 ASPP基因的异常高甲基化可能是引起ASPP mRNA表达降低的影响因素之一.
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酒精性肝纤维化及肝癌大鼠P53基因及ASPP蛋白的表达
目的:研究不同白酒引起的酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠肝组织中P53基因突变及其相关ASPP蛋白家族的表达.方法:运用A、B(分为低剂量D和高剂量G)2种白酒和黄曲霉素B1(AFB1)对大鼠进行处理,制备酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型,用PCR及DNA测序技术检测大鼠肝脏组织中P53基因第5、6、7、8外显子的突变情况;用免疫组织化学Envision法检测大鼠肝脏组织中P53、P53凋亡刺激蛋白1(ASPP1)、ASPP2、ASPP家族抑制因子(iASPP)的表达.结果:成功制备了酒精性肝纤维化、肝硬化合并肝癌大鼠模型,不同白酒诱导大鼠肝纤维化、肝硬化合并肝癌的程度不同.免疫组化检测结果发现,P53及iASPP表达的阳性率在白酒B组(BD组和BG组)明显高于白酒A组(AD组和AG组),差异有统计学意义(P＜0.05);ASPP1、ASPP2的阳性率在白酒B组(BD组和BG组)明显低于白酒A组(AD组和AG组),差异有统计学意义(P＜0.05);iASPP表达量高的酒精性肝病和肝癌中,ASPP1、ASPP2表达量降低,差异有统计学意义(P＜0.05);P53基因的突变检测显示P53的突变方式以碱基插入为主,其次为碱基突变及缺失;AD组和AG组突变率为42.3 %,BD组和BG组突变率为78.3 %,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:不同白酒对大鼠肝脏肝纤维化、肝硬化和肝硬化并肝癌的诱发程度不一样,可能与其对P53基因突变及P53相关蛋白(ASPP1、ASPP2、iASPP)表达影响不同有关.
