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慢性肾衰竭大鼠主动脉UPP组分表达变化
目的 探讨慢性肾衰竭大鼠主动脉泛素-蛋白酶体组分表达变化及意义.方法 采用单肾切除、对侧肾动脉部分结扎法建立慢性肾衰竭模型,RT-PCR检测Ub、E2 mRNA表达水平,免疫组织化学检测Ub蛋白表达,免疫印迹法测定泛素化蛋白含量,并用图像分析定量.结果 与正常大鼠比较,慢性.肾衰竭人鼠术后4个月和6个月时主动脉Ub mRNA(灰度值)分别为(1.436±0.142)、(1.480±0.124),E2 mRNA(灰度值)分别为(2.253±0.689)、(2.002±0.383),均显著升高(P<0.01).与正常大鼠比较,慢性肾衰竭大鼠主动脉Ub蛋白表达(积分光密度)在4个月和6个月时分别为(8.20±1.15)、(9.48±2.80),也显著升高(P<0.01).而慢性.肾衰竭大鼠主动脉泛素化蛋白含量在术后4个月和6个月时分别为(积分光密度)(1.46±0.26)、(2.32±0.83),均显著低于正常大鼠(P<0.01).蛋白酶体抑制剂MG-132可明显抑制慢性肾衰竭人鼠丰动脉Ub和E2 mRNA和蛋白质表达,泛素化蛋白积聚增多.结论 慢性肾衰竭人鼠主动脉泛素-蛋白酶体信号通路显著活化.
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缺血性心力衰竭损害蛋白酶体功能
背景 泛素蛋白酶体系统(UPS)是ATP依赖性的、非溶酶体蛋白质的降解通路,在扩张型心肌病、压力负荷引起的心力衰竭中泛素化蛋白积聚,存在着蛋白酶体功能损害,而在缺血性慢性心力衰竭中UPS的变化尚未见报道.目的 研究UPS在缺血性慢性心力衰竭中的变化.方法 雄性GFPdgn转基因小鼠,通过缝扎冠状动脉左前降支制作慢性心力衰竭模型,随机分为冠状动脉结扎术后1周组(MI-1)和3周组(MI-3),每组取16只制模成功小鼠进行实验.16只转基因小鼠开胸,撕开心包,不结扎冠状动脉,作为对照组.超声心动图测定心脏参数,荧光底物测定糜蛋白酶样(Ch-TL)活性,应用免疫荧光标记共聚焦显微镜法检测心肌组织泛素化蛋白,Westernblot法检测心肌组织泛素化蛋白和26S蛋白酶体亚单位蛋白表达水平.结果 冠状动脉结扎后,左室舒张末内径(LVDd)、左室收缩末内径(LVDs)增加[LVDd:MI-1(0.37±0.05)、MI-3(0.40±0.07)比对照组(0.31±0.02)cm;LVDs:MI-1(0.28±0.03)、MI-3(0.31±0.05)比对照组(0.17±0.03)cm;P<0.05或0.01],短轴缩短率降低[MI-1(23.5±5.2)%、MI-3(22.3±5.5)%比对照组(49.5±7.8)%;均P<0.01].与对照组相比,Ch-TL活性在MI-1和MI-3组分别降低约27%和56%(P<0.01).MI-3组心肌细胞泛素化蛋白积聚,肌丝破坏,且26S蛋白酶体亚单位β1、β2、β5、Rpt5和Rpn2蛋白表达均较对照组明显下降.结论 缺血性慢性心力衰竭时UPS功能异常,其蛋白转运和降解过程均存在缺陷.
关键词： 泛素化蛋白 心力衰竭 缺血性 GFPdgn转基因小鼠 -
串联杂种泛素结合结构域蛋白（ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性高效表达
目的：提高人工串联杂种泛素结合结构域蛋白（ tandem hybrid UBD， ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性表达量，为泛素化蛋白研究提供高效特异的富集方法。方法根据大肠杆菌同义密码子相对频率（ RFSC）表对大肠杆菌的密码子进行分类，计算ThUBD密码子的相对适应度，并根据分析结果对ThUBD的密码子进行优化；诱导表达和蛋白定量检测密码子的优化结果；亲和纯化及泛素化蛋白富集研究检测密码子优化后的ThUBD－S的UbC结合能力。结果根据分析结果优化ThUBD密码子，使得适于大肠杆菌基因表达的密码子从48％增加到75％，并消除了阻碍转录翻译的密码子，其密码子适应指数（CAI）从0．63升高到0．88。密码子优化后的ThUBD其可溶性蛋白ThUBD－S的表达量增加了4倍，达到总蛋白的13．06％。同时，优化后的ThUBD－S可能具有更高的UbC的结合能力。结论 ThUBD的基因序列经过优化后，其在大肠杆菌中的表达量升高4倍左右。同时，序列优化不影响融合蛋白ThUBD在大肠杆菌中的可溶性表达和结合UbC的能力。
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泛素样蛋白D调控乳腺癌干细胞对乳腺癌生物学行为的影响
目的：探讨泛素样蛋白D（ UBD)对乳腺癌生物学行为的影响。方法应用免疫组织化学染色法对乳腺癌组织行UBD染色并分析其表达情况；应用实时荧光定量法检测乳腺癌细胞中UBD在基因水平的表达变化；运用细胞划痕实验、Transwell实验探索UBD对乳腺癌细胞侵袭转移、化疗耐药等恶性生物学行为的影响；行Spheroid成球实验、实时荧光定量检测UBD分子过表达下对乳腺癌细胞干性表型的调控情况。结果组织学检测发现UBD在乳腺癌组织中高表达,细胞学检测发现UBD促进乳腺癌细胞侵袭转移和化疗耐药性,并促进乳腺癌细胞干性细胞群的富集及自我更新等恶性生物学过程；且UBD过表达促进了乳腺癌细胞干性相关基因CD133、CD90、Nanog、Bmi-1、ABCG2、KLF-4、Oct-4的表达（P<0．05)。结论首次发现乳腺癌组织高表达UBD分子,UBD参与乳腺癌细胞侵袭转移、化疗抵抗等恶性生物学行为,有望成为乳腺癌潜在的临床诊疗标志物。
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内质网相关性降解与呼吸系统疾病
内质网相关性降解(ERAD)通过清除内质网腔内的错误折叠蛋白质,从而预防和缓解内质网应激,是真核生物蛋白质质量控制和维持细胞正常功能状态的重要机制。ERAD 包含底物(即错误折叠蛋白)识别、底物泛素化与逆转运、底物降解三个基本环节,其中任何一个环节失调都会导致细胞功能障碍,并可能进一步导致疾病的发生与发展。近几年研究发现,ERAD 参与了 COPD、肺癌、肺囊性纤维化等疾病发生过程。本文就参与 ERAD 的相关因子的研究进展进行综述。
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高糖对大鼠肾系膜细胞泛素及泛素化蛋白表达的影响
目的 探讨高糖对大鼠肾系膜细胞泛素及泛素化蛋白表达的影响.方法 将大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养.高糖作为刺激因子,分别设止常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖1、高糖组(10、20、30 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组.刺激12、24、48 h后,分别用实时定量PCR法和Western印迹法检测各组系膜细胞泛素mRNA和泛素化蛋白的表达.结果 泛素化蛋白多以大分子蛋白为主.与正常对照组比较,30 mmol/L葡萄糖刺激24 h和48 h后泛素化蛋白的表达分别增加36%和52%(均P<0.01);20 mmol/L和30 mmol/L葡萄糖作用48 h泛素化蛋白的表达分别增加31%和52%(均P<0.01);高糖作用24、48 h,泛素mRNA的表达显著增加(均P<0.05).结论 高糖呈时间浓度依赖性地促进大鼠肾系膜细胞泛素mRNA及泛素化蛋白的表达,增加泛素蛋白酶体途径活性.
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高氧导致20S蛋白酶体活性降低诱导早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡
目的 建立早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)原代培养高氧细胞损伤模型,研究高氧对泛素化蛋白的降解及AECⅡ凋亡的影响.方法 早产大鼠原代AECⅡ体外培养,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型并随机分为空气组和高氧组.空气或高氧暴露24、48、72 h后,采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR检测泛素mRNA表达,Western blot法检测细胞内总泛素化蛋白及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达,利用特异性荧光底物检测20S蛋白酶体活性.结果 与同时间点空气组相比,各时间点高氧组AECⅡ凋亡增加,AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素mRNA和总泛素化蛋白表达增加,同时Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达明显上调.结论 高氧暴露引起AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素化蛋白降解减少,通过上调Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达诱导AECⅡ凋亡.
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蛋白质泛素化修饰调控创面愈合机制研究进展
Ubiquitin,a critical small molecular protein,plays an important role in regulating multiple signaling pathways.Ubiquitination is a post-translational modification induced by ubiquitin through an ATP-dependent enzyme catalyzed reaction.A large number of proteins in the complicated signaling network participate in wound healing.This paper reviews the research progress in regulation of ubiquitin and ubiquitination for wound healing processes regarding the recent years.
