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三肽四氮唑类20S蛋白酶体抑制剂的设计、合成与活性研究
泛素-蛋白酶体途径是细胞内降解蛋白质的一种主要方式,由20S蛋白酶体来完成蛋白质的降解.本文在已经报道的肽类抑制剂的基础上,设计合成了一类三肽四氮唑化合物,通过1H NMR、MS以及元素分析对化合物结构进行了表征.活性评价结果表明,有3个目标化合物(6b、6d和6h)具有较好的抑制20S蛋白酶体类胰凝乳蛋白酶的活性.分子对接研究显示,这类新型C端基肽类化合物能通过与活性位点非共价相互作用而与蛋白酶体结合.
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20S蛋白酶体抑制剂吡咯啉酮类似物的设计、合成及活性测试
本文设计并合成了一系列吡咯啉酮类似物,这些化合物可能作为Michael受体与蛋白酶体活性位点ThrlO不可逆结合,从而抑制蛋白酶体的活性.虽然活性测试结果显示这些化合物对蛋白酶体的抑制活性很弱,但是可以通过吡咯啉酮类化合物进一步的结构优化来提高对蛋白酶体的抑制活性.
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20S蛋白酶体与动脉粥样硬化关系的试验研究
目的 探讨20S蛋白酶体及蛋白酶体α亚单位在人动脉粥样硬化斑块中的表达变化,以及与动脉粥样硬化病变之间的关联.方法 搜集病例组(颈动脉粥样硬化狭窄并行颈动脉内膜切除术患者)及对照组(主动脉夹层并行主动脉置换术患者)的相关临床资料.选择病例组中7例术中所切除的颈动脉粥样硬化斑块组织,以及对照组中7例术中所切除的相对正常的锁骨下动脉及无名动脉组织,采用Western印迹方法,检测并比较其中的20S蛋白酶体及蛋白酶体α亚单位的蛋白质水平.结果 ①病例组和对照组各7例,病例组的高脂血症、糖尿病及吸烟比率与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);②蛋白酶体所有α亚基(1-7)在正常动脉内膜、动脉粥样斑块组织中的表达差异无统计学意义(P均＞0.05);③20S蛋白酶体在动脉粥样斑块组织中的表达水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 20S蛋白酶体可能在动脉粥样硬化斑块的病理变化过程中起着重要的作用,而蛋白酶体α亚单位在其中的作用有待进一步探讨.
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针对20S蛋白酶体的抗肿瘤药物研究进展
20S蛋白酶体在生物体内的功能主要是水解蛋白,其与许多疾病如阿尔斯海默症、癌症等有密切的相关性,已经成为抗肿瘤药物研发的新靶点.本文对已经上市的硼替佐米、卡非佐米及正在临床研究阶段的Marizomib的结构及应用特点进行综述.
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慢性阻塞性肺疾病患者血清泛素、20S蛋白酶体的变化及意义
目的:检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清泛素(Ub)、20S 蛋白酶体(20S PSM)的变化,并探讨其与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的相关性.方法:采用酶联免疫吸附测定法检测30 例COPD 急性加重期患者(COPDⅠ组)、30 例COPD 缓解期患者(COPDⅡ组)及30 例健康体检者(正常对照组)血清Ub、20S PSM、TNF-α水平,并进行分析.结果:与正常对照组及COPDⅡ组比较,COPDⅠ组血清Ub、20S PSM、TNF-α均显著增加(P ＜ 0.01).与正常对照组比较,COPDⅡ组血清Ub、TNF-α显著增加(P ＜ 0.01),20S PSM 增加不显著(P ＞ 0.05).COPD 患者血清Ub、20S PSM 水平分别与TNF-α具有相关性(r ＝ 0.559,r ＝ 0.859,均P ＜ 0.01).结论:Ub、20SPSM 在COPD 患者血清中含量增加,可能与COPD 患者体内蛋白质高分解代谢相关,并且其水平增加与COPD全身炎症反应因子TNF-α激活相关.
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人肝癌细胞氧化应激模型中热休克蛋白90α对20S蛋白酶体功能的影响
目的 观察人肝癌细胞氧化应激模型中细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达的变化以及Hsp90α表达下调后对20S蛋白酶体功能的影响；明确热休克蛋白90α对20s蛋白酶体功能的影响.方法 以500μM H2O2建立氧化应激HepG2细胞模型；通过ROS探针法观察细胞在不同氧化应激条件下ROS的分布和含量,通过MTT比色法观察氧化应激对细胞存活的影响；以免疫印迹方法检测氧化应激对细胞内Hsp90α及20S蛋白酶体的合成的影响；以pSilencer 2.1-U6 neo载体,用电穿孔法建立稳定的Hsp90α抑制表达细胞株,通过检测糜蛋白酶活性观察氧化应激和降低Hsp90α表达对蛋白酶体活性的影响.结果 氧化应激后细胞内ROS的含量增多,且分布从胞浆向胞核转移；随着作用时间延长,H2O2对HepG2细胞增殖的抑制程度增强；氧化应激导致胞内Hsp90α表达量先增加后降低,20S蛋白酶体表达量明显降低；siRNA干扰组蛋白酶体活性显著下降.结论 氧化应激可影响细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达并改变其细胞内分布；氧化应激及降低Hsp90α的表达均可影响蛋白酶体的活性；Hsp90α对蛋白酶体功能维持起保护性的作用.
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左旋多巴联合丹参注射液对鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡的影响
目的:研究左旋多巴联合丹参注射液对鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡的影响.方法:实验分为正常对照(正常细胞,等容培养液)组、联合用药对照(正常细胞,左旋多巴2 μmol/L+丹参注射液3.125 μg/ml)组、模型(模型细胞,等容培养液)组、神经生长因子(模型细胞,NGF,300μg/L)组、左旋多巴(模型细胞,2μmol/L)组、丹参注射液(模型细胞,3.125 μg/ml)组、联合用药(模型细胞,左旋多巴2 μmol/L+丹参注射液3.125 μg/ml)组.以鱼藤酮诱导分化PC12细胞凋亡作为帕金森病体外模型,通过水溶性四氮唑(WST-1)法测细胞相对增殖率,Hoechst 33342标记染色法观察细胞荧光强度改变,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)蛋白含量与20S蛋白酶体(PSM)活性.结果:与模型组比较,联合用药组细胞增殖率升高,细胞凋亡减小,GAPDH蛋白含量减少,20S PSM活性增强,且效果均优于左旋多巴组.结论:左旋多巴联合丹参注射液可拮抗鱼藤酮致分化PC12细胞凋亡,其机制与降低细胞内GAPDH含量及增强20S PSM活性有关,其效果优于左旋多巴单用.
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大鼠脾脏20S蛋白酶体的分离纯化及电镜观察
目的分离纯化正常大鼠脾脏20S蛋白酶体,并观察其形态特征.方法采用分级盐析、离子交换层析及凝胶过滤方法,分离纯化了正常大鼠脾脏20S蛋白酶体,并进行透射电镜观察.结果所制备的20S蛋白酶体纯度较高,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示1条带,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示8条带,分子量为(19.8～31.7)×103;电镜观察显示,脾脏20S蛋白酶体呈现典型的圆筒状,具有同其它细胞20S蛋白酶体一样的形态特征.结论这为进一研究20S蛋白酶体结构与功能的关系奠定了基础.
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高氧导致20S蛋白酶体活性降低诱导早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡
目的 建立早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)原代培养高氧细胞损伤模型,研究高氧对泛素化蛋白的降解及AECⅡ凋亡的影响.方法 早产大鼠原代AECⅡ体外培养,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型并随机分为空气组和高氧组.空气或高氧暴露24、48、72 h后,采用异硫氰酸荧光素标记的膜联素V/碘化丙啶(annexinV-FITC/PI)双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR检测泛素mRNA表达,Western blot法检测细胞内总泛素化蛋白及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达,利用特异性荧光底物检测20S蛋白酶体活性.结果 与同时间点空气组相比,各时间点高氧组AECⅡ凋亡增加,AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素mRNA和总泛素化蛋白表达增加,同时Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达明显上调.结论 高氧暴露引起AECⅡ中20S蛋白酶体活性降低,泛素化蛋白降解减少,通过上调Bax/Bcl-2比值和caspase-3表达诱导AECⅡ凋亡.
