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IGF-1、HIF-1a在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义
目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其意义.方法:采用免疫组织化学SABC法检测54例HCC及14例正常肝组织中IGF-1和HIF-1α的表达情况,研究其与HCC生物学行为的关系.结果:54例HCC中IGF-1、HIF-la的表达均较正常肝组织高,差异具有显著性(x2=9.112,13.369;P＜0.05).HCC中IGF-1与HIF-1α的表达呈正相关(rs=0.539,P＜0.05).HIF-1a的表达与肿瘤的侵袭转移密切相关(P＜0.05),IGF-1在AFP≥400 μg/ml的HCC组织中表达明显高于AFP＜400μg/ml者,差异具有显著性(P＜0.05).结论:HCC中IGF-1和HIF-1α表达反映HCC的生物学行为,可作为预测肝癌浸润转移的一项重要指标.
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蛋白翻译起始因子C2在原发性肝细胞肝癌中表达的涡义
目的研究C2mRNA及其蛋白在原发性肝细胞肝癌(HCC)中的表达及意义方法用原位杂交检测C2mRNA在2l例HCC及其癌旁组织中的表达,ABC免疫组化法检测G2蛋白在60例HCC及其42例癌旁组织中的表达,Western blot法检测C2蛋白在HCC及其癌旁组织中的表达.结果21例HCC及其癌旁组织中,G2 mRNA阳性率分别占23.8%(5/21)和85.7%(18/21).60例HCC及42例癌旁组织中,G2蛋白阳性分别占27.3%(17/60)和83.3%(35/42)27例肝硬变中,C2蛋白阳性率为77.8%(21/27).x2检验:C2mRNA及其蛋白在HCC癌旁组织中表达明显高于癌组织(P＜0.001);C2蛋白在肝硬变中的表达明显高于HCC癌组织(P＜0.01);C2的表达与患者年龄、HBsAg及AFP有明显关系(P＜0.05);而与癌组织的分化程度、肿瘤大小、淋巴转移无关;Western blot与免疫组化结果一致结论 C2基因表达下凋可能与HCC的发生、发展及早期诊断有关
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肝细胞癌热休克蛋白27,70,90α的表达意义
目的探讨HSP27,HSP70和HSP90α在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法采用免疫组化技术对44例HCC和癌旁组织中HSP27,HSP70和HSP90α的表达进行检测.结果 HCC和癌旁组织中HSP27阳性率分别为18%和30%,HSP70阳性率分别为68%和27%,HSP90α阳性率分别为63%和23%.HCC中HSP70和HSP90α阳性率明显高于癌旁组织(X12=7.3,X22=7.8,P＜0.01).而HSP27阳性率变化不大(X2=1.6,P＞0.05).HSP70和HSP90α在分化较好和分化不良的HCC中的阳性率分别为54%,85%和50%,80%,两者相比差异显著(X12=4.5,X22=4.2,P＜0.05),但与癌周淋巴细胞浸润(X12=3.2,X22=1.4,P＞0.05)和转移(X12=2.3,X22=2.7,P＞0.05)无关.结论 HCC是HSP70和HSP90α高表达肿瘤.HSP70和HSP90α与HCC分化有关,在HCC发生和发展中起重要作用.蒋业贵,王宇明,李奇芬.肝细胞癌热休克蛋白27,70,90α的表达意义.世界华人消化杂志,2001;9(7):755-758
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HLA-DR抗原和HSP70在肝细胞癌中的表达意义
目的 探讨HLA-DR抗原和热休克蛋白70(HSP70)在肝细胞癌(HCC)中的表达及其意义.方法采用免疫组化技术对44例HCC和癌旁组织中HLA-DR抗原和HSP70的表达进行检测.结果癌旁正常肝组织中肝细胞未见HLA-DR抗原表达.HCC中肿瘤细胞HLA-DR抗原表达阳性率为43%.HCC中HSP70阳性率明显高于癌旁组织(阳性率分别为68%和27%,X2=7.3,P＜0.01).HLA-DR抗原和HSP70表达与癌周淋巴细胞浸润(X21=0.51,X22=3.2,P＞0.05)和转移(X21=2.9,X22=2.3,P＞0.05)无关,但与癌组织分化程度有关(X21=4.9,X22=4.5,P＜0.05).结论HLA-DR抗原和HSP70的异常表达在HCC发生、发展中起重要作用,对判断患者预后有一定的价值.
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VEGF-C在人原发性肝细胞肝癌中的表达及意义
目的:探讨人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growthfactor C, VEGF-C)的转录、表达及特点.方法:应用免疫组织化学染色和逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法,检测30例人肝细胞肝癌组织VEGF-C的表达和转录,并用电泳带灰度值相对系数法对VEGF-C mRNA的表达半定量.结果:VEGF-C阳性表达率为90%(27/30),呈高表达状态; VEGF-C在肝癌组织中表达于癌细胞的胞质内; VEGF-C mRNA在肝癌组织及正常肝组织中均有表达,差异有统计学意义, P<0.05,灰度值相对系数分别为(233.7±10)%和(78.1±2.5)%.结论: VGEF-C在原发性肝癌中呈高表达,其在肝细胞癌的发生发展过程中扮演重要角色,可能和肝癌的进程迅速有关; VEGF-C在原发性肝癌中的表达与肿瘤直径、分化程度密切相关,肿瘤直径越大,分化程度越低,其表达就越高.
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肝细胞癌组织上皮性钙黏蛋白表达及其临床意义的研究
目的:研究上皮性钙黏蛋白(E-Cadherin) 在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)组织中的表达情况,探讨其与肝癌侵袭转移的关系.方法:选择56例有完整随访资料的HCC及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-Cadherin mRNA 的表达.结果:E-Cadherin在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织,P分别为0.016和0.003,而在癌旁组织和正常组织中的表达差异无统计学意义,P分别为0.076和0.082;E-Cadherin 在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关,R2=0.887,P<0.05,与病理分级呈负相关,R2=0.823,P<0.05;癌组织中E-Cadherin 表达与肝外转移呈负相关,R2=0.839,P＜ 0.05.结论:E-Cadherin表达与肝癌的分化程度,侵袭转移能力,复发倾向相关,通过检测E-Cadherin表达将对肝癌临床转归的评估有一定指导意义.
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肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究
目的:研究原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中ER基因启动子甲基化修饰与临床病理特征间的关系,同时观察5-杂氮胞苷对ER mRNA表达的影响.方法:分别采用MSP和RT-PCR方法检测30例HCC及癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰状况及ER mRNA的表达状况,并用5-杂氮胞苷处理肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2.结果:30例HCC组织中ER启动子甲基化修饰阳性率为60.0%(18/30),而30例癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰阳性率为30.0%(9/30),两者差异有统计学意义,χ2=5.46,P=0.037.30例HCC组织中ER mRNA阳性表达12例(40.0%),其中甲基化组织和未甲基化组织中ER mRNA表达率分别为22.2%和66.7%.ER启动子甲基化修饰与mRNA表达呈负性相关,χ2=5.93,P=0.024.同时,ER启动子区甲基化修饰与肝癌患者血清AFP含量增高呈正相关,χ2=12.13,P=0.001.细胞培养结果提示低浓度的5-杂氮胞苷可诱导肝癌细胞系ER mRNA重新表达.结论:肝癌组织中ER启动子甲基化修饰是个频繁事件,因此沉默ER基因的表达有可能促进肝癌的发展.
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铜锌超氧化物歧化酶基因对HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用
目的:探讨超氧化物歧化酶(SOD)对肝癌细胞增殖的抑制作用.方法:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将人铜锌SOD基因导入人肝癌细胞系HepG2细胞内,获得高表达.检测其对HepG2细胞生物学特性的影响.结果:与对照相比SOD基因转染后的肝癌细胞生长受到抑制,细胞体积变大,分裂象减少,S期细胞比率减少,软琼脂集落形成率低,裸鼠成瘤瘤体小.结论:铜锌SOD基因具有抑制HepG2肝癌细胞增殖的作用.
关键词： 超氧化物歧化酶/药理学 基因转移 肝肿瘤/代谢 癌 肝细胞/代谢 -
延迟整流性K+通道在人肝癌细胞增殖中的作用
目的:研究延迟整流性K+通道在人肝癌细胞增殖中的作用.方法:采用膜片钳技术的全细胞记录方式记录人肝癌细胞在不同浓度EGF中延迟整流性K+通道的跨膜电流.利用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入技术观察EGF和K+通道阻断剂(TEA)对人肝癌细胞DNA合成的影响.结果:发现表皮生长因子(EGF)促进肝癌细胞增殖的同时使肝癌细胞膜离子通道的跨膜K+电流增加.K+通道阻断剂四乙胺(TEA)能显著抑制EGF促进DNA合成的作用,具有明显的量效关系和时间依赖性,但对细胞的活力无明显影响.结论:人肝癌细胞的增殖活动需要延迟整流性K+通道参与.
关键词： 延迟整流性K+通道 癌 肝细胞/代谢 钾通道 内皮生长因子/药理学 -
人肝癌细胞膜离子通道特性研究
目的:研究人肝癌细胞系BEL-7402细胞膜离子通道特性.方法:膜片钳技术的全细胞记录方式.结果:人肝癌细胞系BEL-7402细胞获得稳定高阻封接的佳培养时间是细胞传代培养72 h,细胞的静息膜电位为(-22.2±-2.8) mV,几乎每一次记录都发现相似的跨膜电流,该跨膜电流具有电压依赖及不失活特性,翻转电位在-80～-60 mV,能被已知的K+通道阻断剂阻断.结论:在人肝癌细胞系BEL-7402细胞膜上存在类似于神经元和肌肉细胞的延迟整流性K+通道.
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免疫磁珠分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-
目的:利用免疫磁性细胞分选系统分离纯化骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-.方法:实验于2006-07/08在南方医科大学实验动物中心完成.6～8周龄的SPF级纯系BALB/C雄性小鼠10只,体质量18～20 g.收集小鼠股骨骨髓细胞,利用免疫磁性细胞分选系统,通过两步法分选纯化c-Kit+lin-:将获取的lin-细胞悬液8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,接80 μL/107加入Buffer重悬细胞.按20 μL/107加生物素抗体磁珠,混匀,4 ℃冰箱孵育15 min,按1 mL/107加入Buffer洗细胞1次,8 ℃条件下1 500 r/min离心10 min,弃上清,按500 μL/108加入Buffer重悬细胞.Buffer 500 μL润MS柱,悬液过柱后,Buffer 500 μL/次洗柱3次,柱子脱离磁场,加1 mL Buffer,用配套柱塞推出柱中的c-Kit+lin-细胞,收集到c-Kit+lin-细胞,细胞计数.取2.0×106个细胞分成10等份,流式细胞仪分析c-Kit+lin-细胞纯度,计算回收率,评估纯化效率,苔盼兰染色检测纯化前后的细胞活力.计算活细胞的百分率.细胞纯度和细胞回收率的计算:细胞纯度=分离产物中的阳性细胞数/分离细胞的总细胞数×100%,细胞回收率=分离产物中的阳性细胞数/起始标本阳性细胞总数×100%.结果:10只小鼠均进入结果分析.利用免疫磁性细胞分选系统分选出的骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-细胞纯度和回收率分别为(77.98±2.34)%,75.40%,纯化前后细胞活力不受影响.结论:免疫磁性细胞分选系统能有效分选骨髓衍生肝干细胞亚群c-Kit+lin-,纯度和回放率高,且不影响细胞活力.
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Cx43基因修饰对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响
目的 探讨Cx43基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、细胞周期及细胞迁移等方面的作用.方法 采用LipofectamineTM2000转染的方法将重组表达质粒pBudCE4.1-Cx43转染人肝癌SMMC-7721细胞(实验组),对照组细胞仅转染空载质粒pBudCE4.1,空白组为未转染的SMMC-7721细胞.通过RT-PCR、Western blot检测转染后Cx43的mRNA和蛋白的表达情况,划痕荷载染料传输实验检测细胞间通讯功能,流式细胞仪检测细胞周期并通过CCK-8增殖实验、细胞划痕损伤实验、小室侵袭实验评价转染Cx43基因对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响.结果 实验组Cx43 mRNA和蛋白表达高于对照组和空白组,差异有统计学意义(均P＜0.05).实验组细胞传递的荧光强度高于对照组和空白组(P＜0.05),实验组细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少(P＜0.05).实验组与对照组和空白组比较,SMMC-7721细胞的增殖受到抑制(P＜0.05),尤以72小时为著.实验组迁移能力下降,细胞侵袭能力下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染Cx43基因能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移的能力,并可以抑制肿瘤细胞增殖.
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survivin与HIF-1α在肝细胞癌组织中的表达及意义
目的 探讨凋亡抑制蛋白生存素(survivin)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人肝细胞癌组织中的表达及相关性,分析其与肝细胞癌转移复发的关系.方法 应用免疫组化S-P法检测80例肝细胞癌组织和癌旁组织中survivivn和HIF-1α蛋白的表达情况.结果 80例肝细胞癌组织中survivivn和HIF-1α蛋白表达的阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05),两者的表达与门脉癌栓、术后复发、肝外转移、肿瘤大小、肿瘤分化程度表达密切相关,HIF-1α的表达还与临床分期有关(P<0.05).survivivn和HIF-1α的表达有显著相关性(r=0.349,P=0.001).结论 survivivn和HIF-1α与肝细胞癌侵袭转移的发生有密切关系.
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亚砷酸对人肝癌细胞凋亡及ERK-1蛋白表达的影响
目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞BEL-7402凋亡及ERK-1蛋白表达的影响.方法通过体外细胞培养,用流式细胞术观察BEL-7402细胞周期及凋亡率变化;HE染色法、荧光显微镜观察细胞的凋亡形态变化;并用免疫组化法检测细胞ERK-1蛋白的表达.结果亚砷酸(1.0～8.0 μmol/L)能诱导BEL-7402细胞凋亡并阻滞细胞周期于S、G2/M期,呈剂量依赖性;亚砷酸(8.0 μmol/L)作用BEL-7402细胞48 h后, HE染色、荧光显微镜观察可见BEL-7402细胞呈现明显的凋亡形态改变;免疫组化法检测发现8.0 μmol/L的亚砷酸作用48 h 后BEL-7402细胞的ERK-1蛋白表达明显减弱. 结论亚砷酸体外有诱导人肝癌细胞凋亡及降低ERK-1蛋白表达的作用.
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亚砷酸对人肝癌细胞生长增殖及分化的影响
目的探讨亚砷酸对人肝癌细胞BEL-7402增殖、分化的作用.方法通过体外细胞培养,用四氮唑盐(MTT)比色法观察细胞生长曲线的变化,台盼蓝拒染法观察细胞群体倍增时间(TD)的改变,并分别用自动化学发光法、生化法检测亚砷酸对细胞甲胎蛋白(AFP)合成及谷氨酰转肽酶(GGT)、乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响,用苏木精-伊红(HE)染色法及透射电镜观察细胞的分化形态特点.结果亚砷酸(1.0～8.0 μmol/L)能抑制BEL-7402细胞生长增殖,呈剂量、时间依赖性.亚砷酸(8.0 μmol/L)对BEL-7402细胞AFP合成及GGT、LDH活性有显著的抑制作用,HE染色及透射电镜观察可见部分细胞呈现分化的形态改变.结论亚砷酸体外能够抑制人肝癌细胞生长增殖,并具有一定的诱导分化作用.
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奥曲肽抑制人肝癌细胞血管内皮生长因子的表达与合成
目的探讨生长抑素类似物奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达及VEGF合成与分泌的影响.方法利用酶联免疫吸附法、流式细胞仪、逆转录-聚合酶链反应检测不同剂量的奥曲肽对人肝癌细胞株MHCC97-L的VEGF合成与分泌及VEGF mRNA表达的影响.结果奥曲肽(10-5～10-10 mol/L)可以抑制人肝癌细胞株 MHCC97-L中VEGF mRNA表达及VEGF合成与分泌,呈剂量依赖性,可见饱和现象.结论奥曲肽能够抑制人肝癌细胞株MHCC97-L中VEGF的表达、合成和分泌,可能是奥曲肽抗血管新生的作用机制之一.
关键词： 奥曲肽/药理学 癌 肝细胞/代谢 内皮生长因子/生物合成 逆转录聚合酶链反应 -
胰升血糖素样肽-1对肝切除后肝细胞胞浆游离钙影响的实验研究
目的 探讨胰升血糖素样肽-1(GLP-1)对肝切除后肝细胞胞浆游离钙的影响.方法 将大鼠随机分2组,A组不切肝,B组切肝65 %.于术后第1,3,5天收集血标本5mL测定血糖、GLP-1、胰岛素(In)和胰升血糖素(G1).同时用酶法分离制备肝细胞悬液.以Fura-2/AM荧光指示剂,用荧光分光光度仪检测肝切除后肝细胞的荧光强度及GLP-1对荧光强度的影响.结果 B组肝切除术后血糖明显增高(P<0.05),血浆GLP-1也明显高于A组(P<0.001),尤以术后第1天更显著; In则明显下降(P<0.001),而G1手术后升高,但差异无显著性(P>0.05),术后In/GL值明显下降(P<0.05).所测正常肝细胞[Ca2+]I为(707.46±122.59) nmol/L,肝切除术后第1,3,5天肝细胞[Ca2+]I较正常肝细胞略降低(P>0.05);加入GLP-1后肝细胞[Ca2+]I略有升高(P>0.05).结论 大鼠肝切除术后存在明显胰岛素抵抗,主要系因胰岛素水平明显下降,致In/G1值也明显降低的结果;GLP-1的拟胰岛素作用并非通过增加肝细胞[Ca2+]in而实现的.
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急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中TLR2/4mRNA的表达及氯喹的干预效应
目的研究急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肝损伤中Toll-样受体(TLR)2/4mRNA表达的变化及氯喹的干预效应. 方法采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠(TAC)注射造成大鼠AHNP肝损伤动物模型.动物分为假手术组(S组)、胰腺炎组和氯喹(CQ)治疗组.后2组于术后3,6,12 h分批剖杀,S组于术后6 h剖杀.观察血清淀粉酶、ALT和AST及肝组织NO和TNF-α的变化,RT-PCR方法检测各组不同时点肝组织TLR2和TLR4mRNA的表达. 结果相对于S组,胰腺炎组大鼠3 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达开始增高,术后6～12 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达迅速达到峰值(P<0.05),肝损伤加重,血清淀粉酶升高,肝组织TNF-α浓度升高,NO浓度逐渐降低(P<0.05);相对胰腺炎组,CQ治疗组TLR2/4mRNA表达降低(P<0.05),肝损伤程度减轻,血清淀粉酶降低,肝组织TNF-α浓度降低,NO浓度显著升高(P<0.05). 结论 AHNP大鼠肝组织内TLR2和TLR4的基因表达上调;其表达增高可能在AHNP肝损伤的发生、发展中起重要作用.氯喹对大鼠AHNP过程中肝损伤可能有保护作用.
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拉米夫定联合干扰素治疗对乙型肝炎患者肝细胞内HBVcccDNA、tDNA及血清HBsAg的影响
目的 探讨慢性乙型肝炎(乙肝)患者采用拉米夫定+干扰素治疗疗效,并观察其对患者肝细胞内HBVcccD-NA、tDNA及血清HBsAg的影响.方法 将本院2014年2月至2015年3月收治入院的136例乙肝患者按照随机抛硬币法分为对照组(重组人干扰素α-2b治疗)与观察组(于对照组治疗基础上加用拉米夫定),各68例.检测两组患者治疗前后肝细胞内HBVcccDNA、tDNA及血清HBsAg水平,并检测两组患者治疗前后肝功能各项指标变化,统计两组患者HBV DNA及HBeAg变化情况,观察两组患者治疗期间不良反应情况.结果 经治疗后,两组患者肝细胞内HBVcccDNA、tDNA及血清HB-sAg水平均下降,且观察组较对照组下降更为明显(P＜0.05);两组患者治疗后各项肝功能指标水平均较治疗前明显下降,且观察组较对照组下降更为明显(P＜0.05).观察组HBV DNA和HBeAg转阴率及HBeAg血清转阴率均明显高于对照组(P＜0.05).治疗期间两组均无明显不良反应.结论 应用拉米夫定+干扰素治疗慢性乙型肝炎患者疗效显著且安全.
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高糖、胰岛素对大鼠肝星状细胞TGF-β1、TIMP-1mRNA表达的影响
目的 观察高糖和胰岛素对大鼠肝星状细胞(HSC)转化生长因子β1(TGF-β1)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1) mRNA表达的影响,以探讨糖尿病性肝纤维化的发生机制.方法 将体外培养的大鼠HSC株分别以不同浓度葡萄糖以及不同浓度葡萄糖加胰岛素干预72 h,以甘露醇作为高渗透压对照.采用实时荧光定量PCR技术(RT-FQ-PCR)测定各组HSC TGF-β1、TIMP-1的mRNA表达.结果 各组细胞均有TGF-β1 mRNA、TIMP-1 mRNA表达,各组间TGF-β1 mRNA、TIMP-1 mRNA水平比较差异无统计学意义(P＞0.05).但在总体趋势上,加胰岛素糖组TGF-β1 mRNA值降低,TIMP-1 mRNA值升高.结论 单纯的高糖不诱导HSC TGF-β1、TIMP-1的mRNA表达量增加,高胰岛素可能诱导HSC TIMP-1分泌增多,TGF-β1分泌减少,糖尿病相关性肝纤维化发生的主要机制可能非TGF-β1途径,但与TIMP-1途径有很大关联.
