首页 > 文献资料
-
器官移植受者外周血中人巨细胞病毒pp67-mRNA的RT-PCR检测
目的 探讨使用权用RT-PCR的方法对人巨细胞病毒pp67-mRNA检测的可行性.方法 对38例肾移植受者的外周血样本共68份分别进行免疫荧光技术检测pp65抗原和RT-PCR技术检测人巨细胞病毒pp67-mRNA.结果 在7例受者个周血中的1份外周血样本中检出pp65抗原阳性，并有1例诊断为HCMV病;在3例受者外周血中的3份外周血样本中检出pp67-mRNA阳性,基中包括2例受者的2份样本pp65抗原同时检出为阳性并有1例诊断为CMV病.结论 pp65抗原细胞病毒pp67-mRNA结果不具有同一性，不能使用pp67-mRNA检测取代pp65抗原的检测.使用RT-PCR可以对人巨细胞病毒pp67-mRNA作出定性的判断.
-
乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC 7901表达bFGF的抑制作用
目的:探讨乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人胃癌细胞株SGC 7901细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影响.方法:用脂质体介导乙酰肝素酶反义寡核苷酸转染人胃癌细胞株SGC 7901细胞,采用免疫细胞化学观察细胞内bFGF的变化.结果:脂质体介导转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸前后,SGC 7901胃癌细胞内乙酰肝素酶mRNA积分光密度值(integra optical densit,IOD)分别为256.32±3.21、146.89±2.35、85.36±3.58和63.78±1.42.bFGF阳性表达率转染前72.23%,转染0.2、0.4和0.8μmol/L的AS-ODN后分别为57.15%、51.11%和42.36%.与转染前比较,转染后细胞bFGF表达明显减少,P值分别为0.007、0.003和0.001.结论:转染乙酰肝素酶反义寡核苷酸可以有效抑制胃癌细胞bFGF的表达.
-
针对CD44V3的短发夹RNA抑制肺癌A549细胞体外增殖
目的:研究针对CD44 V3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人肺腺癌A549细胞CD44 V3表达及增殖能力的影响.方法:设计和构建带有U6启动子的、能产生针对CD44V3的shRNA的RNA干扰表达质粒,转染至A549细胞,以RT-PCR和Western blot检测A549细胞转染前后CD44 V3表达,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验比较A549细胞转染前后增殖能力.结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的A549细胞CD44V3 mRNA和蛋白表达、以及增殖能力皆明显降低.结论:针对CD44V3的短发夹RNA能明显抑制人肺腺癌A549细胞体外增殖能力.
-
VEGF基因表达与肝细胞癌生物学特性的研究
目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)蛋白及mRNA与肝细胞癌生物学特性的关系.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及ABC免疫组化染色技术,检测60例肝细胞癌中VEGF mRNA及蛋白表达情况,并分析它们与肝细胞癌临床及病理的关系.结果:VEGFmRNA及蛋白的阳性表达率分别为78.3%和81.3%,明显高于正常肝组织(P＜0.05);并且VEGF表达与肿瘤的病理分级、有无包膜、瘤栓、直径大小均有相关性;另外,VEGF mRNA和蛋白表达呈正相关关系.结论:VEGF mRNA和蛋白表达水平越高,细胞恶性程度及侵袭、转移能力越强,VEGF在肿瘤发生发展过程中具有重要的作用.
-
BDNF AS对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响
目的 探讨脑源性神经营养因子反义长链非编码RNA(brain-derived neurotrophic factor antisense long noncoding RNA,BDNF AS)对人肝癌细胞增殖和迁移能力的影响.方法 采用BDNF AS过表达质粒及空载体瞬时转染肝癌细胞株HepG2和MHCC 97-H,采用实时PCR方法检测BDNF AS在肝癌细胞中的表达水平,采用3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS)方法检测细胞增殖情况,采用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术检测细胞周期变化,采用划痕实验和transwell小室评价细胞迁移能力的变化.结果 HepG2和MHCC 97-H细胞转染BDNF AS过表达质粒后BDNF AS和mRNA表达均上调(均P＜0.01).转染第4天,细胞增殖均受到抑制(均P＜0.05).转染48 h后,HepG2和MHCC 97-H细胞均出现S期阻滞(均P＜0.01),细胞的迁移能力均下降(均P＜0.01).结论 BDNF AS过表达抑制肝癌细胞的增殖和迁移,可能对肝癌细胞的生长运动具有重要的负性调控作用.
-
围生期甲低大鼠行为发育及其与海马AR mRNA表达的相关性研究
目的:探讨围生期甲状腺功能低下对青春期不同性别大鼠行为发育的影响及其与海马AR mRNA表达的相关性.方法:孕SD雌鼠复制围生期甲低仔鼠模型雌雄各24只,随机各选雌雄12只为治疗组,于出生当日起每天腹腔注射T4(2 μg/100 g)至断奶,其余为甲低组;另设正常对照组雌雄各12只.第60天进行旷场试验和避暗试验.行为评估结束后收集海马组织,用RT-PCR法测定AR mRNA水平.结果:在旷场试验中,甲低组大鼠跨格数较正常组增多,直立次数和排粪便数减少(P<0.05),治疗组雄性的跨格数未达正常(P<0.05);避暗试验:甲低组大鼠错误次数较正常组明显增多(P<0.01),雌性组少于雄性组(P<0.01),雄性组记忆潜伏期明显缩短(P0.05).海马AR mRNA表达在甲低组雄性大鼠较正常组减少,治疗组与正常组无显著性差异(P>0.05).雄性大鼠海马AR mRNA表达与跨格数呈负相关(r=-0.537,P=0.001),与避暗试验错误次数也呈负相关(r=-0.532,P=0.001),与潜伏期呈正相关(r=0.564,P=0.000).结论:围生期甲状腺功能低下使青春期大鼠的行为发育改变,在雄性尤为明显,这可能与雄性大鼠海马AR mRNA表达尚未恢复正常有关,生后及时治疗能减轻这种损害.
-
氯沙坦对高糖状态下内皮细胞的保护作用及其机制探讨
目的:探讨高糖环境下氯沙坦对内皮细胞的保护作用及其机制.方法:比色法测定内皮细胞条件培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR方法分析细胞VEGF mRNA的表达水平,ELISA方法检测细胞分泌的VEGF蛋白.结果:在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD和CAT活性降低,而MDA含量升高(P<0.05),同时细胞VEGF mRNA和蛋白质表达增加(P<0.05);而氯沙坦可削弱上述变化,降低内皮细胞MDA含量、增强SOD与CAT活性,以及下调VEGF mRNA和蛋白质表达(P<0.05).结论:高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多,抗氧化酶活性下降,导致细胞氧化平衡失调,使VEGF mRNA表达与蛋白分泌增加,促进高糖时内皮细胞病变的进展,提示氯沙坦对高糖状态下的内皮细胞的保护作用可能与调节内皮细胞氧化平衡和抑制内皮细胞的活化有关.
-
骨巨细胞瘤组织 S100 A8和 S100 A9表达及与肿瘤影像学表现的相关性分析
目的：检测骨巨细胞瘤患者肿瘤组织中S100A8、S100A9mRNA及蛋白的表达水平，探讨其与骨巨细胞瘤的影像学及生物学行为之间的关系。方法：收集2009年1月至2012年6月在上海交通大学医学院附属瑞金医院诊治的43例骨巨细胞瘤患者的临床资料，并采集骨巨细胞瘤新鲜组织和6例正常成人股骨的骨髓组织，运用半定量逆转录PCR及蛋白质印迹法检测肿瘤组织中S100 A8、S100 A9 mRNA及其蛋白表达水平，并分析与不同肿瘤影像学表现如CT检查显示的骨质破坏程度，MRI检查显示的实性成分比例及周边水肿程度等关系。结果：43份骨巨细胞瘤组织中有40份表达S100 A8、S100 A9 mRNA及其蛋白，与正常骨髓组织比较，骨巨细胞瘤组织S100 A8、S100 A9 mRNA及其蛋白表达增加，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。影像学不同实质成分比例的骨巨细胞瘤患者S100 A8蛋白表达差异具有统计学意义（ P ＜0．05）；不同骨质破坏程度的骨巨细胞瘤患者S100 A9蛋白表达差异也有统计学意义（ P ＜0．05）。结论：骨巨细胞瘤组织中S100 A8和S100 A9表达增加，并与骨巨细胞瘤骨质破坏程度及实性成分比例、水肿程度具有一定相关性，S100 A8、S100 A9可能参与骨巨细胞瘤的发生发展。
-
骨桥蛋白对骨关节炎软骨细胞缺氧诱导因子-2α mRNA表达的影响
[目的]本研究探讨在体外实验中,骨桥蛋白(OPN)对缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在软骨细胞表达的影响,揭示OPN在骨关节炎(OA)发病中的作用机制.[方法]从OA患者胫骨表面切取软骨,并在体外培养纯化软骨细胞.用重组人类骨桥蛋白(rh OPN组)和小干扰RNA(siRNA组)对软骨细胞进行干预(对照组不予激活及干预),检测HIF-2α mRNA表达的变化.用抗-CD44单克隆抗体检测可能的配体-受体的相互作用.通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)同时定量软骨细胞OPN mRNA和HIF-2α mRNA的表达.[结果]rh OPN组与对照组相比,HIF-2α mRNA的表达水平显著降低,相反,siRNA组HIF-2α mRNA表达增加.同时,CD44抗体可以抑制OPN对HIF-2α mRNA的表达的影响.[结论]OPN可能通过CD44的相互作用,抑制OA软骨细胞HIF-2α mRNA的表达,从而发挥对OA的保护性作用.
-
氟桂利嗪治疗小儿癫痫的疗效及其对MDR1mRNA表达的影响
[目的]探讨氟桂利嗪治疗小儿癫痫的疗效及其对多药耐药基因(MDR1) mRNA表达的影响.[方法]选取本院2013年1月至2015年12月收治的小儿癫痫100例作为研究对象,随机分为对照组与观察组,每组各50例.对照组采取常规抗癫痫药物治疗,观察组在对照组基础上联合氟桂利嗪干预,比较两组临床疗效、不同时间点癫痫发作频率、治疗前后脑电图评价情况及外周血MDR1 mRNA表达水平.[结果]观察组治疗总有效率82.00％显著高于对照组的62.00％ (P＜0.05);两组治疗前后脑电图改善情况比较差异均无统计学意义(P＞0.05);观察组治疗1个月、3个月癫痫发作频率,治疗3个月后外周血MDR1 mRNA水平较治疗前均明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05),且观察组上述指标均明显优于对照组同时间点对应指标(P＜0.05).[结论]氟桂利嗪辅助治疗小儿癫痫疗效较好,能显著减少癫痫发作频率,同时能有效逆转MDR1 mRNA表达.
-
5-LOXmRNA和COX-2mRNA在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的研究5脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌中的表达,探讨其与环氧合酶2(COX-2)的关系.方法用 RT-PCR检测5-LOXmRNA和COX-2mRNA基因在35例胰腺癌新鲜组织中的表达.结果 5-LOXmRNA和 COX-2mRNA在胰腺癌组织中的表达率分别为74.3%及80.0%.两者无协同作用(P>0.05).5-LOXmRNA与胰腺癌的TNM分期有关,III,IV期5-LOXmRNA表达明显高于I,II期(P<0.05).结论 5-LOXmRNA和COX-2mRNA在胰腺癌中表达增高,与临床分期有关.两基因的表达无相关性.
-
5-LOX mRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中的表达及其临床意义
目的研究5脂氧合酶(5-LOX)在胰腺癌中的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系.方法用RT-PCR检测5-LOXmRNA和VEGFmRNA在35例胰腺癌新鲜组织中的表达.结果5-LOX mRNA和VEGF mRNA在胰腺癌组织中的表达率分别为74.3%及60%,均与胰腺癌的临床分期有关;VEGF还与胰腺癌的分化程度有关.5-LOX mRNA和VEGF有协同作用(P＜0.05),呈密切正相关(r=0.5 35,P＜0.01).Ⅲ～Ⅳ期5-LOX mRNA表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期(P＜0.05).结论5-LOXmRNA和VEGFmRNA在胰腺癌中表达增高,与临床分期有关.5-LOXmRNA和VEGFmRNA表达呈正相关.
-
外周血hTERT mRNA表达与进展期结直肠癌术后复发及预后的关系
目的 探讨进展期结直肠癌(CRC)患者外周血人端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA表达量与术后复发及预后的关系.方法 以实时荧光定量RT-PCR定量检测85例进展期CRC患者根治术前、术后1个月及30例健康对照者外周血hTERT mRNA表达量;术后随访3年,CRC复发患者及未复发患者复查外周血hTERT mRNA表达量.结果进展期CRC组术前外周血hTERT mRNA表达量显著高于正常对照组[(6.22 ±5.85)2-△△Ct vs (0.45 ±0.27)2-△△Ct,P ＜0.01],术后1个月外周血hTERT mRNA表达量显著降低(P＜0.01).术后复发组外周血hTERT mRNA表达量显著高于术后1个月组和未复发组[(5.07 ±2.87)2-△△Ctvs(1.83±1.08)2-△△Ct,(2.15 ±1.49)2-△△Ct,(P＜0.01)].单因素分析显示肿瘤分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移率及有无肝转移是影响进展期CRC患者术前外周血hTERT mRNA表达水平升高的因素(P＜0.05或P＜ 0.01).Logistic多因素回归分析显示肿瘤分化程度、淋巴结转移及肝转移为影响进展期CRC术前外周血hTERT mRNA表达升高的独立危险因素;随着术前外周血hTERT mRNA表达量的升高,CRC患者术后3年复发率逐步升高,术后生存率逐步降低.结论术前外周血hTERTmRNA表达量与进展期CRC重要病理特征相关,是影响预后的重要因素,可作为预后评价指标;术后外周血hTERT mRNA表达量升高与术后复发相关.
