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氯化血红素对心肺复苏后大鼠脑红蛋白表达影响
心搏骤停(cardiac arreast,CA)是急救医学较常见的危重症之一,而脑复苏成功与否,是心肺复苏后成功的关键.组织的严重缺血缺氧以及复苏后组织再灌注则是CA后脑组织损伤的主要原因.脑红蛋白(nueorglboin,Ngb)是德国学者Burmester等[1]在2000年发现的一种主要位于脑内神经元的携氧球白,能可逆地结合O2,在脑缺血缺氧时,Ngb在神经元中表达增加,作为一种内源性神经保护因子可保护神经元免受缺血性损害.本实验通过建立窒息型大鼠心肺复苏模型,研究复苏后不同时间点Ngb在mRNA水平表达变化规律,探讨Ngb在CA后脑缺血缺氧损伤病理变化中的作用机制,同时也为氯化血红素(Hemin)防治缺血缺氧性脑损伤提供可靠的实验依据.
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pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体的构建及在SH-SY5Y细胞中的表达
目的 克隆SD大鼠脑红蛋白(Ngb)基因至真核表达载体pAcGFP1-C1,构建表达质粒pAcGFP1-C1-Ngb,并转染至人SH-SY5Y细胞表达Ngb蛋白.方法 提取大鼠肝脏组织总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增大鼠Ngb基因,与双酶切的pAcGFP1-C1连接,从而构建pAcGFP1-C1-Ngb真核表达质粒.转染SH-SY5Y细胞,并用Western blot的方法鉴定Ngb蛋白在SH-SY5Y细胞中的表达.结果 获得SD大鼠Ngb基因全长序列和重组真核表达载体pAcGFP1-C1-Ngb.Western blot结果显示,转染pAcGFP1-C1-Ngb后的SH-SY5Y细胞Ngb基因有稳定的表达.结论 成功地克隆了SD大鼠Ngb基因、构建了pAcGFP1-C1-Ngb真核表达载体,并在人SH-SY5Y细胞中获得Ngb蛋白的稳定表达,为进一步研究Ngb基因在细胞中的功能奠定了基础.
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新生大鼠海马脑片OGD模型中HO-1对NGB的影响
目的 观察HO对脑红蛋白(HGB)的影响,探索NGB的调控机制.方法 体外培养新生SD大鼠海马脑片,用HO-1促进剂Hemin和抑制剂Znpp干预后建立OGD模型.用HE、尼氏染色和免疫组化法观察OGD模型中神经元和星形胶质细胞的状态及HO-1和NGB表达的变化.结果 ①加入Hemin后,HE及尼氏染色示,神经元和星形胶质细胞与正常培养的海马脑片比较变化不大,仅有轻微的水肿.免疫组化示,HO-1和NGB的表达均增加.②加入Znpp后,HE及尼氏染色示,神经元和星形胶质细胞结构模糊,存在广泛水肿、变性、坏死.免疫组化示,HO-1和NGB的表达下降.结论 HO-1和NGB呈同步变化,提示两者可能存在相关性.NGB对神经元和星形胶质细胞具有保护作用.
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HIF-1及NGB,VEGF在脑挫裂伤后促脑血管生成的作用机制
目的 探讨HIF-1调控Ngb、VEGF在脑挫裂伤后促血管生成的作用.方法 采用蛋白质组学技术比较脑挫裂伤患者和非颅脑创伤患者额叶组织的差异蛋白质,并应用生物信息学技术分析鉴定差异蛋白.然后运用免疫组化和酶联免疫方法分别检测差异蛋白HIF-1、Ngb及VEGF在脑组织以及血清中的表达.结果 建立了脑挫裂伤患者和非颅脑创伤患者组脑组织的2-DE图谱,鉴定了7种差异蛋白,其中有HIF-1、Ngb及VEGF.HIF-1、Ngb及VEGF在脑挫裂伤患者脑组织中的表达水平均高于非颅脑创伤患者.HIF-1、Ngb及VEGF在脑挫裂伤患者血清中的表达水平均显著高于非颅脑创伤患者.结论 脑挫裂伤后,HIF-1通过调控Ngb和VEGF两个靶基因的释放,在新的脑血管生成过程中发挥了重要作用.HIF-1,Ngb和VEGF在血清中的含量变化,可为临床评估和监测缺氧缺血脑病的严重程度提供参考;对脑挫裂伤的诊断、治疗以及疾病的转归具有重要意义.
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脑红蛋白对大鼠局灶性脑缺血Na+-K+/ATP酶和SOD、MDA含量的作用
目的 观察脑缺血后缺血半暗区脑红蛋白(neuroglobin,NGB)表达与SOD、MDA和Na+-K+/ATP酶含量的关系,阐明NGB在局灶性脑缺血大鼠中的表达规律及其保护机制.方法 大鼠随机分为假手术组(sham组)(n=6)、脑缺血组(cerebral infarc-tion group,CI组)(n=36)、干预组(intervention group,Ⅳ组)(n=30)、干预对照组(intervention control group,ⅣC组)(n=6).其中Cl组造模后按断头时程分为5 min、0.5 h、1 h,6 h、24 h、72 h 6个亚组(n=6);Ⅳ组将MoAb-NGB注入左侧尾壳核30 min后造模,分为0.5 h、1 h,6 h、24 h、72 h 5个亚组(n=6);sham和ⅣC组于24 h断头.取脑作HE和NGB免疫组化染色、测定SOD、MDA和Na+-K+/ATP酶含量.结果 缺血5 min NGB表达明显上升,0.5 h达高峰,随后下降,6 h接近正常;而Na+-K+/ATP酶和SOD逐步降低,与NGB正相关,干预后明显减少,MDA逐步增高呈负相关;干预后明显增加.结论 脑缺血后早期NGB在缺血半暗区升高,调节Na+-K+/ATP酶、SOD和MDA,发挥脑保护作用.
关键词： 脑缺血 Ngb Na+-K+/ATP酶 SOD 脑保护机制
