首页 > 文献资料
-
src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α
目的 探讨src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响.方法 体外培养Wistar大鼠PMVEC,按随机数字表法分组(n=4),10 mg/L LPS刺激1h、3h、6h、12h、24 h或0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L LPS刺激24 h；蛋白激酶C抑制剂(BIM)预处理0.5h或50 nmol/L SSeCKS-siRNA转染PMVEC 48 h后再加入10 mg/L LPS孵育24 h,酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α量(ng/L).采用SPSS10.0软件进行分析,组间比较采用单因素方差分析,以P＜ 0.05为差异具有统计学意义.结果 0.1、1、10 mg/L LPS刺激PMVEC 24 h后的,TNF-α分泌量分别为(253.70±23.55)、(327.88±37.25)、(403.20±36.22) ng/L,均高于未刺激组(82.28±22.56) ng/L(均P =0.000)；10 mg/L LPS刺激PMVEC后,TNF-α分泌量于1h升高(170.11±49.22) ng/L,6h达峰值(404.82±13.78) ng/L,刺激24 h后仍维持高水平(395.67±36.23) ng/L,分别与未刺激组(84.60±23.61) ng,/L比较:P=0.001,0.000,0.000；BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激,TNF-α分泌量(200.44±27.39) ng/L较LPS单独刺激(402.28±31.07) ng/L显著较少(P=0.000)；与LPS单独刺激比较(407.28±32.64) ng/L,SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后,LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应(195.20±13.28)ng/L也显著下降(P=0.000).结论 下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应,从而减轻PMVEC的炎症反应.
-
肝星状细胞SSeCKS的表达及其在肝纤维化中的作用
目的 了解src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)在肝星状细胞(HSC)活化中的变化和作用.方法 (1)分离正常大鼠的HSC,以实时定量PCR检测其在体外培养过程中SSeCKS mRNA的表达变化,以蛋白质印迹法和细胞免疫荧光法检测HSC中SSeCKS蛋白的表达变化.(2)制作肝纤维化的大鼠模型,以免疫荧光法检测肝组织内SSeCKS和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化及定位.结果 初分离的HSC表达低水平的SSeCKS mRNA,经培养活化后SSeCKS的表达增强.在纤维化肝组织中,SSeCKS阳性细胞增多,阳性细胞多分布于肝窦周围,与α-SMA阳性细胞的分布一致.结论 在体外活化过程中HSC中SSeCKS表达增强.SSeCKS可能参与HSC在肝脏炎症和纤维化中的作用.
关键词： 肝纤维化 肝星状细胞 src抑制的蛋白激酶C底物 -
TNF-α对大鼠肺微血管内皮细胞SSeCKS表达的影响及甲强龙的干预作用
目的 研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)表达的影响及甲基强的松龙(甲强龙)对TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性损伤和SSeCKS表达的干预作用,探讨SSeCKS是否具有调控PMVEC单层通透性的作用.方法 根据TNF-α刺激时间与浓度的差异,将培养的大鼠PMVEC随机分为TNF-α时间刺激组与浓度刺激组,前组以5000 U/ml的TNF-α分别与PMVEC作用0.5、1.5、3、6、12 h;后组分别以200、1000、5000 U/ml的TNF-α与PMVEC作用3 h.药物干预:分别以5000 U/ml的TNF-α和0.2 mg/ml的甲强龙+5000 U/ml的TNF-α与PMVEC作用1.5 h.以正常PMVEC SSeCKS的表达作为对照,运用RT-PCR法及Western-blot法检测SSeCKS mRNA及蛋白的表达变化.用针头式滤器检测TNF-α(5000 U/ml)组及甲强龙(0.2 mg/ml)+TNF-α(5000 U/ml)组作用1.5 h后大鼠PMVEC单层通透系数(Kf),以正常PMVEC单层通透性作对照.结果 正常情况下大鼠PMVEC呈低表达SSeCKSc,5000 U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表达自0.5 h开始增高,3 h达到高峰,随后渐行性下降但维持较高表达水平至12 h,以上各时间点mRNA及蛋白的表达均明显高于正常对照组.200、1000、5000 U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表达依次递增,均明显高于正常对照组.甲强龙+TNF-α组SSeCKS的蛋白表达明显低于TNF-α组.而甲强龙+TNF-α组PMVEC单层通透系数(Kf)也明显低于TNF-α组.结论 TNF-α以时间及浓度依赖的方式上调大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表达.甲强龙在抑制TNF-α所致大鼠PMVEC单层通透性增加的同时,降低SSeCKS蛋白高表达水平.提示SSeCKS参与TNF-α诱导大鼠PMVEC单层通透性损伤,可能具有调控PMVEC单层通透性的作用.
-
血小板活化因子诱导大鼠肺微血管内皮细胞Src抑制的蛋白激酶C底物基因表达
目的 研究血小板活化因子(PAF)对大鼠肺微血管内皮细胞(RPMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响及其信号转导途径.方法 体外培养RPMVEC,采用细胞原位杂交技术检测不同刺激条件下RPMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化.结果 正常RPMVEC中有少量SSeCKSmRNA表达,为棕黄色细颗粒状杂交信号,分布于胞质;用10~(-10)、10~(-9)、10~(-8)、10~(-7) mol/L的PAF分别孵育RPMVEC 1.5 h,SSeCKS mRNA表达随其浓度增加而升高(分别为0.054 9±0.000 7、0.059 9±0.001 8、0.069 0±0.001 8、0.075 4±0.001 9),与正常对照组(0.036 8±0.003 7)比较差异均有统计学意义(均P<0.05);10~(-7) mol/L PAF刺激RPMVEC 0.5、1.5、3、6、12、24 h,SSeCKS mRNA表达水平于0.5 h即显著升高(0.071 0±0.001 5),1.5 h达峰值(0.075 6±0.001 7),之后逐渐下降,24 h时(0.043 9±0.001 0)仍高于正常对照组(0.038 2±0.004 1,均P<0.05);10 μmol/L核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二巯基氨甲酸(PDTC)预处理RPMVEC 1 h可显著下调Par对SSeCKS mRNA的诱导效应(0.049 7±0.003 2比0.071 9±0.001 9,P<0.05),而蛋白激酶C(PKC)抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺(BIM)预处理RPMVEC0.5 h则不影响此效应(0.069 7±0.002 1比0.071 9±0.001 9,P>0.05).结论 PAF呈浓度和时间依赖的方式上调RPMVEC中SSeCKS基因转录;NF-κB信号通路而非PKC参与了PAF的诱导效应.
-
脂多糖诱导肺微血管内皮细胞SSeCKS mRNA表达的研究
目的 研究脂多糖(LPS)对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)mRNA表达的影响,以及甲泼尼龙对其的干预作用.方法 体外培养大鼠PMVEC,根据与LPS孵育时间和LPS剂量不同随机分组,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PMVEC中SSeCKS mRNA的表达变化.结果 正常情况下,PMVEC中SSeCKS mRNA低表达.LPS在体外可诱导SSeCKS mRNA的表达明显增高,表达水平变化与LPS呈剂量和时间依赖关系:LPS孵育1 h后,PMVEC中SSeCKS mRNA的表达量随LPS剂量增加而逐渐增高(正常对照组为0.263±0.033;LPS 0.1 mg/L时为0.529±0.066,1 mg/L时为1.391±0.048,10 mg/L时为2.339±0.055,100 mg/L时为2.861±0.069),组间比较差异有统计学意义(F=639.096,P＜0.05);10 mg/L的LPS与PMVEC共用孵育,0.5 h SSeCKS mRNA表达开始增高,1 h时达峰值,之后逐渐降低,12 h表达仍高于正常水平(正常对照组为0.301±0.022;LPS 0.5 h为1.617±0.018,1 h为2.378±0.031,3 h为2.148±0.056,6 h为1.322±0.042,12 h为0.772±0.044),组间比较差异有统计学意义(F=726.346,P＜0.05).甲泼尼龙干预后可显著抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高(2.664±0.104比1.759±0.151,F=156.000,P＜0.05).结论 ①LPS可诱导大鼠PMVEC中SSeCKS mRNA表达上调,并呈剂量和时间的依赖关系,提示SSeCKS与LPS诱导的大鼠PMVEC损伤有关.②甲泼尼龙参与可抑制LPS诱导的SSeCKS mRNA表达增高.
关键词： 脂多糖 血管内皮细胞 炎症 src抑制的蛋白激酶C底物 大鼠 -
Src抑制的蛋白激酶C底物与炎性肺组织损伤
Src抑制的蛋白激酶C底物是一种新发现的细胞支架蛋白,亦是一种脂多糖反应蛋白,和炎症反应密切相关,可能参与了炎症所致的肺组织损伤.它和炎症所致肺血管损伤相关信号转导机制有着密切的关系,如蛋白激酶C、酪氨酸蛋白激酶、G蛋白耦联受体相关的信号通路,可能具有调节血管通透性的作用.通过对其的研究,能为急性肺损伤的防治提供新的理论依据.
关键词： 支架蛋白 src抑制的蛋白激酶C底物 炎症 信号转导 急性肺损伤 -
清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：观察清脂护肝方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)大鼠肝功能、血清炎症因子以及肝组织中 Src 家族相关激酶(Hck、Lyn)和 Src 抑制的蛋白激酶 C 底物(Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS)表达的影响并探讨其机制。方法：以高脂饲料制备NASH大鼠模型，将造模成功的大鼠再随机分为模型组、清脂护肝方组(低、中、高3个剂量组)，每组10只。模型组和正常组以0.9%NaCl溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周。实验结束后检测大鼠肝功能、肝组织中 Hck、Lyn 和 SSeCKS 蛋白表达水平以及血清中白细胞介素-1( interleukin-1, IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平。结果：清脂护肝方能改善NASH大鼠的肝功能；清脂护肝方可下调Hck和Lyn的表达而上调SSeCKS表达,可降低血清IL-1、IL-6水平，但不影响TNF-α水平。结论：清脂护肝方能够改善NASH大鼠肝功能、降低炎症因子水平，其机制可能是通过调控Hck、Lyn、SSeCKS的表达从而减轻肝脏的炎症反应。
-
Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达及意义
目的：探讨Src家族相关激酶（Hck、Lyn）和Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS）在Kupffer细胞中的表达及意义。方法：应用 Real-time PCR的方法检测正常Kupffer细胞和炎症Kupffer细胞中Hck、Lyn和SSeCKS的表达水平；用Western Blot的方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达水平。构建非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）大鼠模型，采用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠肝脏组织Kupffer细胞中的表达水平。结果：RT-PCR显示Hck、Lyn和SSeCKS在小鼠Kupffer细胞中均有表达，用60%CCl4损伤液刺激后Hck、Lyn表达明显升高(P<0.01)，SSeCKS表达减少，但差异无统计学意义(P＞0.05)；Western Blot结果显示在Kupffer细胞中Hck、SSeCKS表达较为明显，Lyn未见明显表达；IHC结果显示Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠正常肝组织Kupffer中均有表达；在炎症组织中Hck、Lyn的表达明显增加，而SSeCKS的表达却显著减少。在炎症刺激后Hck、Lyn的表达与Kupffer细胞数呈正相关，而SSeCKS的表达与Kupffer细胞数呈负相关。结论：Hck、Lyn和SSeCKS参与了NASH的发生发展，可作为NASH炎症反应的潜在调控靶点；检测其表达有助于NASH炎症程度的判断，为临床上治疗NASH提供一定的客观依据。
关键词： Hck Lyn src抑制的蛋白激酶C底物 Kupffer细胞 炎症
