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清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：探讨清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用及其机制。方法58只雄性SD大鼠，均喂养高脂饲料，予以12只作对应。将造模成功的大鼠再随机分为模型组、低剂量、中剂量和高剂量清脂护肝方组，分别给予0．9％NaCl 溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周；观察记录大鼠的行为表现及体质量变化。干预结束后次日处死所有大鼠并留取血清和肝脏，检测清脂护肝方对 NASH 大鼠肝生化指标的影响。免疫组织化学方法检测NASH 大鼠肝组织中 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达水平。体外实验：对库普弗细胞株采用不同浓度不同时间的 CCL4刺激，用优选方案的清脂护肝方药物血清培养后检测 SSeCKS、Hck、Lyn、Fgr 的表达。结果与正常对照组相比，模型组大鼠体重明显增加（P ＜0．05）；模型组 ALT、AST、TBIl 均较正常对照组升高（P ＜0．05）；模型组 TG、CH、LDL 均明显上升（P ＜0．01），HDL 亦有所降低（P ＜0．05）。与模型组相比，中大剂量清脂护肝方组体重均有减轻，其中大剂量组的体重减轻为明显（P ＜0．01）；清脂护肝方各剂量治疗组 ALT 与模型组比较明显降低（P ＜0．01），大剂量治疗组AST 与模型组比较明显降低（P ＜0．01）；清脂护肝方中、大剂量组的血清 TBIL 较模型组显著下降（P ＜0．01）；与模型组比较，清脂护肝方组的 TG、LDL 有所降低（P ＜0．05），尤其大剂量组降低相对更明显；清脂护肝方各剂量组 CH 有所降低，但仅有大剂量组有统计学差异（P ＜0．05）。ICC 结果表明：Lyn、Hck 在 kupffer 细胞中有表达，并与炎症程度呈正相关，清脂护肝方药物血清培养后表达减少，Fgr 和 SSeCKS 在 kupffer 细胞中无明显表达。ICC 结果表明：Hck、Lyn 在正常肝脏组织中低表达，模型组中高表达，用药组无论是大、中、小剂量组，在抑制 Hck、Lyn 两种 Src 相关激酶成员的阳性表达是有显著效果，特别是大剂量组，与模型组比较有显著意义（P ＜0．01）；模型组 SSeCKS 蛋白的表达显著低于正常组，在治疗组中的表达介于模型组和正常组，同时伴随 Lyn、Hck 表达的升高呈减少趋势，提示 SSeCKS 与 Src 家族相关激酶（Lyn、Hck ）存在某种上下游抑制关系；而清脂护肝方对 Fgr 的表达无明显影响，用药前后无统计学意义（P ＞0．05）。结论清脂护肝方能减轻肝脏的炎性反应，明显改善肝功能和血脂指标，其机制可能与 SSeCKS、Lyn、Hck 信号通路有关，且高剂量时疗效更优。
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Kaposi肉瘤组织中lyn基因的表达分析
目的 分析lyn基因在Kaposi肉瘤(KS)组织中的表达情况.方法 采集新疆地区KS标本及正常皮肤蜡块各17份,新鲜KS及瘤旁正常皮肤组织5份,采用免疫组化Envision二步法和实时PCR技术从蛋白水平及转录水平检测lyn的表达.结果 lyn蛋白呈胞质阳性,17例Kaposi肉瘤组织均呈阳性表达,阳性率为100%;17例正常皮肤组织中2例呈阳性表达,阳性率为11.8%,lyn蛋白在KS中的阳性表达率明显高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(x~2=27.57,P＜0.01).5份新鲜KS组织lyn mRNA的相对表达量高于瘤旁正常皮肤组织(t=2.82,P＜0.05).结论 lyn蛋白的异常表达在KS的发展过程中可能发挥了一定的作用.
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清脂护肝方对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的作用研究
目的：观察清脂护肝方对非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis, NASH)大鼠肝功能、血清炎症因子以及肝组织中 Src 家族相关激酶(Hck、Lyn)和 Src 抑制的蛋白激酶 C 底物(Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS)表达的影响并探讨其机制。方法：以高脂饲料制备NASH大鼠模型，将造模成功的大鼠再随机分为模型组、清脂护肝方组(低、中、高3个剂量组)，每组10只。模型组和正常组以0.9%NaCl溶液灌胃，清脂护肝方组予清脂护肝方药液灌胃6周。实验结束后检测大鼠肝功能、肝组织中 Hck、Lyn 和 SSeCKS 蛋白表达水平以及血清中白细胞介素-1( interleukin-1, IL-1)、白细胞介素6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)水平。结果：清脂护肝方能改善NASH大鼠的肝功能；清脂护肝方可下调Hck和Lyn的表达而上调SSeCKS表达,可降低血清IL-1、IL-6水平，但不影响TNF-α水平。结论：清脂护肝方能够改善NASH大鼠肝功能、降低炎症因子水平，其机制可能是通过调控Hck、Lyn、SSeCKS的表达从而减轻肝脏的炎症反应。
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Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达及意义
目的：探讨Src家族相关激酶（Hck、Lyn）和Src抑制的蛋白激酶C底物（Src-suppressed C kinase substrate， SSeCKS）在Kupffer细胞中的表达及意义。方法：应用 Real-time PCR的方法检测正常Kupffer细胞和炎症Kupffer细胞中Hck、Lyn和SSeCKS的表达水平；用Western Blot的方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达水平。构建非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）大鼠模型，采用免疫组织化学（immunohistochemistry, IHC）方法检测Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠肝脏组织Kupffer细胞中的表达水平。结果：RT-PCR显示Hck、Lyn和SSeCKS在小鼠Kupffer细胞中均有表达，用60%CCl4损伤液刺激后Hck、Lyn表达明显升高(P<0.01)，SSeCKS表达减少，但差异无统计学意义(P＞0.05)；Western Blot结果显示在Kupffer细胞中Hck、SSeCKS表达较为明显，Lyn未见明显表达；IHC结果显示Hck、Lyn和SSeCKS在大鼠正常肝组织Kupffer中均有表达；在炎症组织中Hck、Lyn的表达明显增加，而SSeCKS的表达却显著减少。在炎症刺激后Hck、Lyn的表达与Kupffer细胞数呈正相关，而SSeCKS的表达与Kupffer细胞数呈负相关。结论：Hck、Lyn和SSeCKS参与了NASH的发生发展，可作为NASH炎症反应的潜在调控靶点；检测其表达有助于NASH炎症程度的判断，为临床上治疗NASH提供一定的客观依据。
关键词： Hck Lyn src抑制的蛋白激酶C底物 Kupffer细胞 炎症 -
Lyn酶在非酒精性脂肪性肝炎组织Kupffer细胞中的表达及意义
目的 分析非酒精性脂肪性肝炎(NASH)组织Kupffer细胞中Lyn酶的表达及其临床意义.方法 收集37例手术切除的肝组织石蜡标本,其中12例原发性肝癌癌旁正常肝组织,25例炎症反应明显的NASH组织.利用免疫组化法检测肝组织Kupffer细胞中Lyn酶的表达情况,并分析其阳性率与肝组织炎症的相关性.结果 25例NASH患者Lyn酶阳性表达25例,其中染色强度卅以上的23例(92％),Lyn阳性率与NASH的炎症程度呈正相关(P＜0.05).结论 Lyn的异常表达与肝脏炎症程度显著相关,检测其表达有助于NASH炎症程度的评价.
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肥大细胞的酪氨酸激酶与抗过敏药物的分子靶向
肥大细胞脱颗粒为过敏反应中的重要环节，其中 Src家族激酶（Src family kinase，SFKs）参与激活肥大细胞脱颗粒的起始信号。SFKs 中的 Lyn、Fyn、Syk 等在肥大细胞脱颗粒过程中发挥重要调节作用。调节 SFKs 可抑制肥大细胞脱颗粒过程，并抑制过敏反应的发生。因此，SFKs 抑制剂可以作为过敏性疾病的潜在药物。针对于 SFKs 的靶向药物的研发将是抗过敏药物发展的新方向之一。
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Lyn抑制剂Bafetinib对恶性黑素瘤细胞株UACC62增殖和凋亡的影响
目的:明确Lyn抑制剂Bafetinib对恶性黑素瘤细胞株UACC62增殖和凋亡的影响.方法:体外培养UACC62细胞,用不同浓度的Bafetinib处理,应用CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖能力,观察Bafetinib的效应以及是否具有剂量依赖性,并选择出合适的浓度进一步实验.Western blot检测Lyn、凋亡相关蛋白(Bax、Beclin、Bcl-2)及信号转导通路蛋白的表达.结果:Bafetinib能够抑制黑素瘤细胞UACC62的活力,并呈一定的剂量依赖性;Bafetinib处理组细胞的OD值为1.05±0.08,低于对照组的2.04±0.07(P<0.05);Bafetinib处理组细胞克隆数为49±8.53,低于对照组的288±7.68(P<0.05).Bafetinib处理组细胞中P-ERK、Beclin1、Bax、Bcl-2、Lyn蛋白的表达量分别是对照组的0.30,3.25,2.23,0.53,0.29倍(P<0.05).结论:Lyn抑制剂Bafetinib能够抑制恶性黑素瘤细胞UACC62的增殖,并通过ERK信号通路诱导细胞凋亡.
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利托那韦对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒感染细胞LYN表达的影响
目的 探讨蛋白酶抑制剂利托那韦对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)感染细胞LYN表达的影响.方法 原代培养人脐静脉内皮细胞HUVECs,从BCBL-1中提取KSHV病毒感染HUVECs,PCR扩增K5330233证实感染成功.CCK8法测定半数抑制浓度,CCK8法检测细胞增殖能力,Western blot检测LYN表达及p-PI3K和p-AKT水平.结果 RTV作用于细胞的IC50为25 μmol/L.RTV与LYN抑制剂PP2能抑制KSHV感染的HUVECs的增殖和LYN、p-PI3K和p-AKT的表达(P＜0.05).结论 RTV可通过抑制LYN及其下游的PI3K/AKT信号通路抑制KSHV感染细胞HUVECs的增殖.
关键词： 卡波氏肉瘤相关疱疹病毒 利托那韦 Lyn 脐静脉内皮细胞 PI3K/AKT -
与接头蛋白Bam32相互作用的蛋白分子的鉴定
目的:研究接头蛋白(adaptor protein)Bam32在B细胞抗原受体(B cell antigen receptor, BCR)信号转导级联反应中的作用.方法: 以Bam32全序列为诱饵, 应用酵母双杂交技术筛选能与Bam32相互作用的蛋白分子, 并用293T细胞共转染和免疫共沉淀法加以证实.结果: 应用酵母双杂交技术筛选出能与Bam32相互作用的蛋白分子, 其中1个出现强阳性反应的克隆编码酪氨酸激酶Lyn.用293T细胞共转染和特异性免疫共沉淀法证实, Bam32可在哺乳动物细胞中与Lyn共沉淀.应用抗磷酸化酪氨酸抗体检测显示, Bam32与Lyn相互作用可导致Bam32磷酸化.结论: Bam32可同Lyn相互作用, 导致Bam32磷酸化, 这在激活下游产物的级联反应中可能起重要作用.
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Kaposi肉瘤相关疱疹病毒感染诱导LYN表达在其发病中的作用
目的 探讨Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(kaposi's sarcoma associated herpesvirus,KSHV)感染对v-yes-1 Yamaguchi肉瘤病毒相关同源癌基因(v-yes-1 Yamaguchi sarcoma viral related oncogene homolog,LYN)表达的影响,及其在卡波氏肉瘤(kaposi's sarcoma,KS)发病机制中的作用.方法 采用酶灌注法原代培养脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),运用免疫细胞化学检测CD34和CD31以验证HUVECs.从BCBL-1中提取KSHV病毒感染HUVECs,显微镜下观察细胞形态并拍照,PCR扩增KS330233证实感染成功.采用Western blot检测LYN表达及p-PI3K和p-AKT水平.结果 HUVECs中CD 31胞膜阳性和CD 34胞浆阳性,说明酶灌注法取得的细胞为HUVECs.KSHV感染HUVECs后细胞变为长梭形,LYN表达增高,同时p-PI3K和p-AKT水平也增高.结论 KSHV感染HUVECs促进LYN表达,且可能通过促进p-PI3K和p-AKT水平增高而活化PI3K/AKT信号通路.
