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微小RNA-26 a靶向调控高迁移率族蛋白A1抑制宫颈癌细胞迁移、侵袭的研究
目的 探讨宫颈癌细胞中微小RNA-26a(miR-26a)靶向调控高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)对细胞迁移和侵袭的影响.方法 将宫颈癌细胞系HeLa细胞和SiHa细胞各分为4组(miR-26a模拟物组、模拟物对照组、miR-26a抑制物组、抑制物对照组),利用生物信息学靶基因网站预测 miR-26a 与 HMGA1的关系,采用荧光素酶报告基因活性检测法验证miR-26a对HMGA1基因表达的调控作用;采用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测各组细胞中miR-26a和HMGA1的表达,采用体外迁移试验和体外侵袭试验检测各组细胞的迁移和侵袭能力.结果 (1)荧光素酶报告基因活性检测法显示,含miR-26a的质粒和含HMGA1基因的重组质粒共同转染宫颈癌细胞系 HeLa 细胞和 SiHa 细胞后,与模拟物对照组比较,其荧光素酶活性分别下降至60.57%,69.95%(P<0.05).(2)实时荧光定量PCR技术显示,HeLa细胞和SiHa细胞的miR-26a模拟物组中miR-26a和HMGA1 mRNA的表达水平与模拟物对照组相比分别明显增加和降低,抑制组中miR-26a和HMGA1 mRNA的表达水平与抑制物对照组相比分别明显降低和增加,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)蛋白印迹法显示,HeLa细胞和SiHa细胞的miR-26a模拟物组中HMGA1的表达水平与模拟物对照组相比分别明显降低,抑制组中HMGA1的表达水平与抑制物对照组相比分别明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)体外迁移试验显示,HeLa细胞和SiHa细胞的miR-26a模拟物组中穿透基底膜细胞数与模拟物对照组相比分别明显降低,抑制组中穿透基底膜细胞数与抑制物对照组相比分别明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).(5)体外侵袭试验显示,HeLa细胞和SiHa细胞的miR-26a模拟物组中穿透基底膜细胞数与模拟物对照组相比分别明显降低,抑制组中穿透基底膜细胞数与抑制物对照组相比分别明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-26a能够通过靶向调控HMGA1的表达抑制HeLa细胞和SiHa细胞的迁移和侵袭能力,提示miR-26a与宫颈癌发病密切相关,可能通过调控细胞的迁移和侵袭能力参与宫颈癌的发生发展,同时可能与宫颈癌的化疗耐药的发生有一定的关系,为宫颈癌的防治提供了新的思路.
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HMGA1在肺癌中的表达及临床病理学研究
目的：探讨高迁移率族蛋白组A1（HMGA1）在肺癌中的表达，以及通过对患者的临床病理学研究，探讨对肺癌患者预后的影响。方法选择2004年到2014年在莱阳卫校医院和烟台市莱阳中心医院经手术治疗的60例肺癌患者，将他们的临床病理资料进行研究，并对患者进行随访，了解患者的生存状况，通过免疫组化的方法检测患者肺癌组织中的HMGA的表达，并分析与患者病理指标与预后的关系。结果高迁移率族蛋白组A1（HMGA1）在60例肺癌患者中有57例患者的肺癌组织呈阳性表达（95%）。HMGA1在肺癌组织中的表达与患者的生存状况有着很大的关系。本研究发现：高迁移率族蛋白组A1（HMGA1）的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肺癌的组织学类型等无明显的关系。结论 HMGA1在肺癌组织中呈高表达，研究HMGA1的表达有助于肺癌的诊断，也有助于对患者的预后判断。
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高迁移率族蛋白A1翻译后修饰及意义
CDC2和HIPK2都能诱导HMGA1a Thr-52、Thr-77和Ser-35位点的磷酸化,催化HMGA1b Thr-41、Thr-66位点的磷酸化,可大大降低HMGA1a与DNA结合的亲和力,CK2能磷酸化HMGA1酸性羧基末端区域.HMGA1乙酰化可调节干扰素β基因的功能,且可能与乳腺癌细胞不同的转移能力有关.PRMTs 中,PRMT2的活性尚未阐明,在体内PRMT1比PRMT3更能使Ary-25甲基化,PRMT6能诱导HMGA1甲基化,甲基化的主要位点为位于第2个AT钩上的Ary-57和Ary-59.
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HMGA1基因转染诱导NIH3T3细胞恶性转化实验研究
目的:通过建立稳定转染外源HMGA1基因的NIH3T3细胞,探讨HMGA1基因表达与肿瘤发生、发展的相关性.方法:脂质体转染法将真核表达载体pcDNA3.0-HMGA1稳定转染NIH3T3细胞,G418筛选获得阳性细胞克隆;RT-PCR法及基因测序技术,确定外源HMGA1基因在阳性细胞克隆转录水平的表达;MTT法绘制细胞生长曲线以及流式细胞术测定细胞周期观察细胞增殖能力的变化;软琼脂集落形成实验判断转染细胞的非锚定依赖性生长能力;RT-PCR法检测转染细胞免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA表达.结果:筛选获得稳定转染HMGA1基因的NIH3T3细胞克隆,与对照细胞相比稳定转染HMGA1基因,细胞生长增殖速度加快,在软琼脂中形成细胞集落,并表达免疫抑制因子VEGF和FasL mRNA.结论:HMGA1基因转染可诱导正常NIH3T3细胞恶性转化,并参与调控免疫抑制因子 mRNA表达,揭示HMGA1是肿瘤发生发展、转移以及免疫逃逸的关键分子.
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RNAi沉默HMGA1基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的影响
目的:筛选HMGA1基因沉默稳定转染肝癌细胞株,检测沉默后肿瘤细胞凋亡、周期和增殖的变化.方法:靶向HMGA1的RNAi载体转染肝癌细胞,G418筛选得到稳定转染细胞株并鉴定; MTT法和FACS检测细胞增殖、凋亡及细胞周期.结果:成功建立基因沉默HMGA1稳定细胞株;HMGA1基因沉默后,细胞凋亡百分率(29.46±3.04%)明显高于质粒对照组和空白对照组 (1.96±0.76%和2.04±0.70%,P＜0.01);G0-G1期细胞百分率(75.21±2.35%)明显高于质粒对照组和空白对照组(37.98±3.02% 和39.23±3.63% ,P＜0.01),G2-S期(24.79±2.35%)显著低于质粒对照组和空白对照组(62.03±3.01% 和60.77±3.63% ,P＜0.01);MTT检测显示,HMGA1沉默细胞增殖与质粒对照组和空白对照组相比显著降低(P＜0.01或0.05).结论:基因沉默HMGA1可促进肿瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖.
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高迁移率族蛋白A1(HMGAl)在肝细胞癌中的表达及临床意义
目的:研究肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma,HCC)中高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)的表达情况,探讨HMGA1基因在HCC中的表达与肝内转移以及临床病理参数之间的关系.方法:采用实时定量荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测52例肝细胞癌组织和配对的癌旁组织、10例正常肝脏组织中HMGA 1 mRNA的表达,用免疫组化法(immunohistochemistry,IHC)检测HMGA1蛋白在肝细胞癌中的表达,评价HMGAI的表达与HCC临床病理学因素的相关性.结果:肝癌组织中HMGA1 mRNA的表达较正常肝脏中升高6.82倍.其中有、无肝内转移组较正常肝组织分别升高13.36倍和4.63倍(P＜0.05).HMGA1 mRNA的表达与TNM分期、Edmonson分级、肝内转移有关(P＜0.05).肝细胞癌中有肝内转移组较无肝内转移组HMGA1蛋白表达明显增强.结论:HMGA1基因在肝细胞癌中的表达较正常肝脏组织中明显升高,并与肿瘤的肝内转移相关,有望成为肝细胞癌诊断和治疗的新靶点.
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HMGA1在肺癌中的表达及临床病理学意义
目的 探讨肺癌组织中高迁移率蛋白A1(high-mobility group A1,HMGA1)的表达及其对肺癌患者预后的影响.方法 收集2002年至2010年284例在浙江医院肺癌手术治疗患者的临床病理资料和术后生存随访资料,通过免疫组化的方法 检测HMGA1的表达,分析其与患者临床病理指标及预后之间的关系.结果 HMGA1在284例肺癌组织中有252例(88.7%)呈阳性表达,并且与患者生存期短密切相关(P<0.001).而与年龄、性别、肿瘤组织学类型、分化程度、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、临床TNM分期等没有明显关系.结论 肺癌组织HMGA1表达阳性预示预后较差,而不同的表达强度与预后无明显相关.
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吉西他滨诱导人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡及对HMGA1基因表达的影响
[目的]探讨吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖、凋亡及HMGA1基因表达的影响.[方法]采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖的抑制效应;利用DNA琼脂糖凝胶电泳法、细胞AO/EB荧光染色法及流式细胞术检测吉西他滨诱导肿瘤细胞凋亡的作用;采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)观察吉西他滨对人肺癌细胞株SPC-A-1凋亡相关基因HMGA 1mRNA的影响.[结果]吉西他滨对人肺癌SPC-A-1细胞株增殖有抑制作用,其抑制效应具有时间和剂量依赖性;0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L浓度吉西他滨处理细胞72h后,AO/EB荧光染色法计算细胞凋亡百分比分别是18.56%±1.04%、39.45%±0.83%、48.48%±0.85%(P1＜0.05);细胞经1μmol/L的吉西他滨处理72h后,DNA琼脂糖凝胶电泳法显示有特异性的DNA梯状条带;0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L吉西他滨处理细胞72h后,凋亡率分别为20.65%±0.83%、38.53%±0.97%、51.48%±1.04%,对照组为5.19%±0.89%(P＜0.05);随着吉西他滨浓度的增加,HM-GA1基因表达下调,符组与β-actin条带灰度比值分别为0.856±0.030、0.696±0.007、0.543±0.037,对照组为0.907±0.007(P＜0.05).[结论]吉西他滨可抑制人肺癌SPC-A-1细胞株的生长,促进凋亡,可能的机制和下调HMCA1基因表达有关.
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乳腺浸润性导管癌中HMGA1和CXCR4的表达及临床意义
目的 探讨高迁移率族蛋白A1 ( high mobility group Al,HMGA1)和趋化因子受体4 (C-X-C chemokine receptor 4, CXCR4)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化法检测105例乳腺浸润性导管癌和80例乳腺腺病组织中HMGA1和CXCR4的表达,并分析两者表达与临床病理特征的相关性.结果 HMGA1和CXCR4在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率明显高于乳腺腺病14％ υs 26.25％,73.33％ υs 23.75％ ),差异有统计学意义(P＜0.001).HM-GA1和CXCR4在乳腺癌组织中的表达差异无统计学意义(r=0.104,P = 0.289),提示两者的表达相互独立,且两者联合检测能够提高诊断的敏感性(两者任一阳性)和特异性(两者均为阳性).CXCR4在PR阳性的乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率(87.5％)高于PR阴性浸润性导管癌(60.0％),差异有统计学意义(P=0.008).结论 HMGA1在乳腺浸润性导管癌组织中高表达,CXCR4在乳腺浸润性导管癌组织中以低表达为主,两者均具有较高的敏感性,联合检测能够明显提高乳腺癌诊断的敏感性和特异性.HMGA1、CXCR4在乳腺组织中的高表达,对于乳腺癌的诊断和预后评估具有一定的临床意义,有望为乳腺癌的诊断和治疗提供一种新的理论基础.
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横纹肌肉瘤中HMGA1和HMGA2的表达及其临床意义
目的 探讨高迁移率蛋白A1(HMGA1)和高迁移率蛋白A2(HMGA2)在横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma,RMS)中的表达特点及其与临床病理参数、细胞增殖的关系.方法 应用免疫组化法分别检测39例RMS和10例正常横纹肌组织中HMGA1、HMGA2和Ki-67蛋白表达水平;原位杂交法分别检测39例RMS中HMGA1和HMGA2基因mRNA的表达.结果 HMGA1和HMGA2在RMS中的蛋白阳性表达率分别为76.9%(30/39)和64.1%(25/39),表达水平分别高于正常横纹肌组织(P<0.05);mRNA阳性表达率分别为69.2%(27/39)和66.7%(26/39),表达水平分别高于正常横纹肌组织(P<0.05).HMGA1、HMGA2在蛋白水平的表达与其各自的mRNA水平表达之间具有较好一致性.两者分别在胚胎型(ERMS)和腺泡型(ARMS)中的表达差异无统计学意义(P>0.05),而在不同分化程度之间的表达差异有统计学意义(P<0.05);在有复发或转移的病例与无复发或转移的病例中表达差异有统计学意义(P<0.05);在Ki-67阳性的高增殖组与Ki-67阴性的低增殖组之间的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 HMGA1和HMGA2过表达可能与RMS的发生、发展密切相关,有望成为判断该肿瘤预后的指标之一,并为靶向治疗提供依据.
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HMGA1与肿瘤的研究进展
高迁移率族蛋白(high mobility group protein,HMG)由Goodwin等[1]于1973年首次在牛胸腺细胞中发现,它是细胞核内一类水溶性强、在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈现高迁移率的小分子蛋白质.
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人类大鼠肉瘤蛋白同源蛋白和高迁移率族蛋白A1在垂体腺瘤中的表达与侵袭性的关系
目的 研究人类大鼠肉瘤蛋白同源蛋白(V-Ha-Ras harvey rat sarcoma viral oncogene homolog,HRAS)和高迁移率族蛋白A1(High-mobility group A1,HMGA1)在侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织中的表达情况及二者与垂体腺瘤侵袭性的关系.方法 60例垂体腺瘤手术标本按侵袭性垂体腺瘤综合判定方法分为侵袭组和非侵袭组,采用RT-PCR法检测HRAS和HMGA1的mRNA表达水平,采用免疫组织化学法及western blot法检测HRAS和HMGA1的蛋白表达水平,分析侵袭组和非侵袭组HRAS和HMGA1表达水平的差异.结果 60例垂体瘤患者中,28例为侵袭性垂体腺瘤,32例为非侵袭性垂体腺瘤.侵袭性垂体腺瘤组HRAS阳性表达率(22/28)、免疫印迹灰度值(1.25±0.16)、mRNA表达量(0.96±0.16)均高于非侵袭性腺瘤组(15/32、0.76±0.10、0.54±0.15)(P＜ 0.05),侵袭性垂体腺瘤组HMGA1阳性表达率(20/28)、免疫印迹灰度值(0.98±0.12)、mRNA表达量(1.12±0.20)均高于非侵袭性腺瘤组(14/32、0.66±0.09、0.52±0.19)(P＜ 0.05),差别具有统计学意义.结论 HRAS和HMGA1在侵袭性垂体腺瘤中表达上调,提示二者与垂体腺瘤侵袭性行为的发生有关.
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RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HMGA1的表达
目的:以人类高迁移率蛋白A1(HMGA1)为靶基因, 采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HMGA1的表达.方法: 针对HMGA1基因设计、合成一段小干扰RNA ( siRNA ),用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞, 采用RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HMGA1表达的影响.结果: 针对HMGA1的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HMGA1的表达水平, 并具有良好的特异性.结论: 在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HMGA1基因的表达, 为研究HMGA1基因在肿瘤细胞中的作用奠定实验基础,也为进一步研究HMGA1在治疗人类绒毛膜细胞癌的临床应用提供了有益帮助.
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siRNA对卵巢上皮癌细胞HMGA1基因表达抑制的实验研究
目的:探讨小分子干扰RNA对卵巢上皮癌细胞中高迁移率蛋白家族A1 (Hish mobility group A1, HMGA1)基因表达的影响,了解HMGA1基因在卵巢上皮癌发生、发展中的作用.方法:设计并合成HMGA1 siRNA,分为两组,实验组以不同浓度[(1.0,2.5,5.0)μg/L,下同]的HMGA1 siRNA转染HMGA1基因高表达的卵巢上皮癌细胞系OVCAR细胞,对照组以等量阴性对照siRNA转染OVCAR细胞,实时荧光定量RTPCR技术检测转染后OVCAR细胞中HMGA1 mRNA的表达, HMGA1 mRNA的表达以PCR循环数阈值(Ct值)表示;蛋白印迹法测定OVCAR细胞中HMGA1蛋白的表达;显微镜观察并计数转染后存活的OVCAR细胞数.结果: HMGA1 siRNA转染OVCAR细胞后,明显下调OVCAR细胞中HMGA1 mRNA及蛋白的表达水平,实验组不同浓度HMGA1 siRNA转染后, OVCAR细胞的Ct值分别为(19.62±0.02),(20.46±0.02),(20.57±0.03)个循环数,与对照组[分别为(19.30±0.02),(19.45±0.01),(19.58±0.03)个循环数]比较,差异有统计学意义(P<0.05).上述浓度转染后,实验组OVCAR细胞的HMGA1蛋白表达水平(分别为0.75±0.02,0.56±0.02,0.19±0.03)分别与对照组(分别为1.92±0.25,1.80±0.29,1.15±0.18)比较,差异有统计学意义(P<0.01).实验组OCAR细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05).结论: HMGA1 siRNA可以下调HMGA1 mRNA及其蛋白的表达水平,抑制细胞生长,提示HMGA1基因在卵巢上皮癌的发生、发展中具有重要作用.
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卵巢上皮癌组织中HMGA1的表达及其意义
目的:探索卵巢上皮癌组织中HMGA1的表达及其对卵巢癌诊断与预后的意义.方法:通过半定量RT-PCR法分析36例卵巢癌和36例正常卵巢上皮组织中HMGA1的表达情况.结果:36例正常卵巢上皮组织中均未检测到HMGA1的转录产物;36例卵巢上皮癌组织中,有26(72.0%)例HMGA1呈阳性表达;HMGA1在原发性卵巢上皮浸润癌中的表达与病理分级相关,21例G3的卵巢癌组织中有18例(86.0%)呈阳性表达,而10例G1和G2的卵巢癌组织中仅有4(40.0%)例呈阳性表达(P＜0.001),与临床分期及病理分型无关(P＞0.05).结论:HMGA1在卵巢癌组织中呈过度表达状态,与卵巢上皮浸润癌病理分级相关,可作为卵巢癌诊断与良恶性鉴别诊断指标.
