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艰难梭菌A毒素对人甲状腺乳头癌细胞系的毒性作用研究
艰难梭菌(Clostridium difficile)A毒素是艰难梭菌引起疾病的主要致病因子,具有肠道毒性、细胞毒性、小鼠致死活性、促血球凝集活性、致血管通透性亢进等生物学活性[1,2].艰难梭菌A毒素对组织和细胞有毒性作用,但其作用机制未完全阐明.目前国内对艰难梭菌A毒素的细胞毒性的研究刚刚起步,我们曾研究过艰难梭菌A毒素对HEP2等6种细胞的毒性作用,其中人甲状腺乳头癌细胞(TPC-1)对A毒素的敏感性较高[3].我们进一步观察A毒素对TPC-1细胞生长、细胞膜损伤、细胞形态和生化特征等方面的影响.
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基于凝集活性检测的板蓝根颗粒质量生物测定方法研究
建立可用于板蓝根颗粒质量生物测定的新方法.采用血红细胞凝集活性检测法,对20批板蓝根颗粒抗病毒活性进行生物测定,并以流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制试验进行药效学验证.结果显示,所建立方法简便易行,重复性良好(RSD=2.0%);所有测试样品均为阳性反应(效价值U介于2～11之间),具有较好的适用性;血红细胞凝集活性测定结果与流感病毒NA抑制活性测定结果之间相关性良好(r~2=0.878 3).结果表明,血红细胞凝集活性测定法具有与药效相关、重复性好、经济安全、专属灵敏等特点.可用于表征板蓝根颗粒质量生物活性信息,以补充和完善板蓝根颗粒现行质量控制标准.
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板蓝根中红细胞凝集效应组分的谱效关系研究
目的 研究板蓝根的红细胞凝集活性成分.方法 对板蓝根药材进行系统化学部位分离,采用红细胞凝集活性检测法探讨各化学部位的抗病毒活性；针对活性强的部位建立10批不同产地样品的HPLC指纹图谱并进行生物测定,运用数理统计方法研究谱效相关性.结果 板蓝根正丁醇萃取部位对家兔红细胞的凝集作用强；谱效相关性研究发现2号、11号共有峰(保留时间分别为7.23、43.00 min)的相对峰面积所占比例越大,样品的凝集作用也越强.结论 2号、11号峰可能为板蓝根抗病毒作用的特征峰,所建立的板蓝根HPLC特征图谱与药效作用的关系,可为建立“指纹图谱与药效关联”的中药质量控制模式提供理论依据和数据支持.
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湖北钉螺凝集素的提取及其活性研究红细胞凝集活性
目的 探讨湖北钉螺(Oncomelania hupensis)体内凝集素的提取方法 及其凝集活性.方法 用20%～100% 硫酸铵对钉螺蛋白进行梯度分级沉淀,检测不同沉淀对兔红细胞的凝集活性.分别用2.5 mg/ml D-半乳糖、D-果糖、D-葡萄糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖等6种糖溶液对有凝集活性的沉淀进行倍比稀释,测定其红细胞凝集活性的变化.并测定不同温度(25～90 ℃)和pH值(3.0～10.0)对钉螺凝集素凝集活性的影响.结果 硫酸铵分级沉淀法提取钉螺凝集素时,20%～40%饱和梯度所得的沉淀具有较高的凝集活性.其凝集活性能被半乳糖和乳糖抑制.当pH值为7.0时钉螺凝集素活性高.30～70 ℃水浴时,随温度的增加其凝集活性降低,高于80 ℃时无凝集活性.结论 钉螺体内存在半乳糖和乳糖凝集素,其凝集活性受温度和酸碱度的影响.
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禹白附凝集素的凝集活性及加热对刺激性作用的影响
目的 研究禹白附凝集素(Typhonium giganteum agglutinin,TGA)的凝集活性以及加热对家兔眼刺激性作用的影响.方法 考察不同来源红细胞、温度、pH及糖对TGA凝集活性的影响;通过Western Blotting方法分析禹白附毒针晶与TGA;采用家兔眼刺激性试验,考察加热禹白附毒针晶及TGA对家兔眼刺激性作用的影响.结果 TGA能凝集兔、鼠、狗的红细胞,不能凝集人及鸡的红细胞,在50℃内凝集活性稳定,pH 6.0～9.0范围内凝集活性高,TGA凝集活性不被D-木糖、D-核糖、D-阿拉伯糖、无水葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、甲基-α-D-甘露糖苷所抑制,仅被去唾液酸胎球蛋白所抑制;禹白附毒针晶与TGA均能与兔抗禹白附血清结合,在相同的位置显示相同的条带;家兔眼刺激试验结果显示单用TGA无刺激性,禹白附毒针晶中加入TGA刺激性显著增强,而禹白附毒针晶加上加热处理的TGA,其刺激性毒性与单独使用禹白附毒针晶的作用无差异,禹白附毒针晶加热处理后与禹白附毒针晶比较刺激性明显降低.结论 TGA具有较好的凝集活性,禹白附毒针晶中含有TGA,加热可破坏禹白附凝集素的刺激性作用.
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产凝集素乳杆菌的筛选及PCR—16S rDNA鉴定
目的 从泡菜汁中分离产凝集素乳杆菌并鉴定.方法 通过凝集实验筛选产凝集素的乳杆菌,用聚合酶链式反应(PCR)扩增16S rDNA可变区基因鉴定产凝集素乳杆菌.结果 此菌株呈革兰阳性,短杆状,产乳酸.通过同源性比较,此菌株与Lactobacillus plantarum strain p215的同源性为99%.结论 分离得到了产凝集素的菌株,鉴定表明此菌株为植物乳杆菌.
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珠蛋白水解液生物活性的初步研究
目的探讨珠蛋白胃蛋白酶水解液的生物活性.方法利用优化的Cushman的方法、Guzman-Partida报道的方法、Ayers报道的大豆子叶法和方中达报道的抗烟草花叶病毒方法分别测定了对血管紧张素Ⅰ转换酶(ACE)的抑制活性、对血红细胞的凝集活性和对植物的诱抗活性.结果富含小分子肽的珠蛋白水解液在水解度为12.6%时,对ACE的抑制率高;在显微镜下观察水解液对血红细胞有一定的凝集作用;在500 mg/L的浓度下对植物的诱抗活性与50 mg/L的壳寡糖相当.结论珠蛋白的胃蛋白酶水解液具有很好的生物活性,为猪血在制药、食品以及绿色农药方面的利用提供了必要的理论支持.
