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miR-373在老年多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床意义
目的:探讨miR-373在多发性骨髓瘤中的作用机制及其临床价值.方法:RT-PCR检测多发性骨髓瘤细胞和正常浆细胞中miR-373的表达水平,同时采用细胞增殖实验、细胞周期与凋亡实验、荧光素酶实验和小鼠成瘤实验分析miR-373的生物学功能.结果:RT-PCR检测发现,MM患者血液样品和多发性骨髓瘤细胞系(H929、MM1S和U266)中miR-373的表达水平比正常浆细胞(对照组)明显降低(P＜0.05).与对照组相比,转染miR-373的U266和H929细胞增殖受到显著抑制(P＜0.05);同时转染miR-373的H929细胞周期阻滞在Go/G1期并诱导其凋亡(P＜0.05).荧光素酶实验发现,miR-373可显著抑制叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达(P＜0.05).小鼠成瘤实验发现,miR-373的过表达通过降低FOXM1水平明显抑制肿瘤生长(P＜0.05).结论:miR-373通过直接靶向FOXM1抑制MM中的肿瘤生长,对治疗MM有重要的临床意义.
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腺病毒携带shFOXM1对ACC-2细胞作用机制的研究
目的:研究携带特异性抑制叉头框蛋白M1 (Forkhead box protein M1,FOXM1)表达的腺病毒(Ad5.shFOXM1)对人涎腺腺样囊性癌(Adenoidcystic carcinoma,ACC)细胞周期的调控、细胞凋亡的影响及其作用机理.方法:根据人FOXM1 mRNA的序列,设计合成针对FOXM1基因的三对shRNA,转染ACC-2细胞系,利用实时荧光定量PCR、Western blot筛选获得佳干扰片段,并构建入腺病毒载体,利用流式细胞术、MTT、Western blot等检测其对ACC-2细胞周期、细胞凋亡的调控及分子作用.结果:①成功筛选获得了抑制FOXM1表达的shRNA,并构建了特异性抑制ACC-2细胞中FOXM1表达的腺病毒Ad5-shFOXM1;②Ad5-shFOXM1能明显抑制ACC细胞的增殖,并引起ACC-2细胞S期的阻滞(P＜0.05);②Ad5-shFOXM1通过下调c-Myc蛋白的表达抑制了细胞的增殖,通过下调P21Cip1,P27Kip1蛋白的表达抑制了ACC-2细胞周期(P＜0.05).结论:下调FOXM1的表达能够明显抑制ACC-2细胞周期和ACC-2细胞的增殖.
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盐屋霉素A下调叉头框蛋白M1表达可抑制喉癌细胞恶性生物学行为
目的 探讨盐屋霉素A下调叉头框蛋白M1 (forkhead box protein M1,FoxM1)对喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力等恶性生物学行为的影响.方法 取处于对数生长期的Hep-2细胞,使用不同浓度盐屋霉素A进行处理,对照组不加盐屋霉素A.分别在培养24、48、72 h后通过CCK-8法检测细胞活力;24、48 h后通过CFSE染色法检测细胞增殖能力;48 h后Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.蛋白质印迹法检测FoxM1、Kb67、cleaved caspase-3蛋白的表达变化,ELISA法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的表达变化.结果 (1)盐屋霉素A作用后FoxM1蛋白的表达量降低(P＜0.05).CCK-8检测结果显示不同浓度盐屋霉素A对Hep-2细胞活力均有抑制作用,并随着盐屋霉素A浓度的增加和作用时间的延长,Hep-2的细胞活力逐渐下降,呈现浓度和时间依赖性.(2)1.3、1.5 μmol/L盐屋霉素A处理后Hep-2细胞的增殖能力均降低(P＜0.05),并呈现浓度依赖性;同时Ki 67蛋白的表达下调.(3)1.3、1.5μmol/L盐屋霉素A作用后,Hep-2细胞的凋亡率(10.60％,27.90％)均高于对照组(4.91％,P＜0.05),并呈药物浓度依赖性;同时cleaved caspase-3蛋白的表达上调.(4)1.3、1.5 μmol/L盐屋霉素A作用后Hep-2细胞的侵袭能力较对照组均下降(P＜0.05),并呈药物浓度依赖性;同时MMP-2、MMP-9蛋白的表达下调.结论 盐屋霉素A下调FoxM1可抑制喉癌细胞的增殖、侵袭等生物学行为.
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乳腺癌组织中FoxM1和HIF-1α蛋白的表达及其与临床病理学指标的关系
目的 探讨乳腺癌组织中人叉头框蛋白M1 (FoxM1)和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达与乳腺癌临床病理参数的关系.方法 采用免疫组化方法检测100例乳腺浸润性导管癌中FoxM1和HIF-1α的表达,分析其与乳腺癌患者生存期和临床病理参数的相关性.结果 100例浸润性导管癌组织中的FoxM1和HIF-1α阳性表达率分别为59.0％和53.0％;两者表达呈正相关(rs=0.518,P＜0.01),均与肿瘤直径、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05).FoxM1和/或HIF-1α阳性的乳腺癌患者无病生存期短于FoxM1和/或HIF-1α阴性患者(P＜0.05).结论 乳腺癌组织中FoxM1和HIF-1α均呈高表达,两者与患者的预后密切相关.乳腺癌组织中HIF-1α可能参与FoxM1调节.
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FOXM1与Ki67共表达对三阴性乳腺癌患者预后的影响
目的 探讨癌基因叉头框蛋白M1 (FOXM1)与增殖细胞Ki67抗原表达对三阴性乳腺癌(TNBC)患者预后的影响.方法 免疫组化分析FOXM1和Ki67在60例TNBC组织中的表达,分析其表达量的相关性及其对TNBC患者预后的影响.结果 TNBC组织中FOXM1和Ki67共表达与肿瘤的大小、分化程度、TNM分期、腋窝淋巴结转移和血管神经侵犯密切相关(P＜0.05或P＜0.01).FOXM1与Ki67表达呈正相关(r=0.4635,P＜0.01).FOXM1和Ki67高表达以及腋窝淋巴结转移情况可以作为判断TNBC预后的独立因素.结论 TNBC组织高表达FOXM1和Ki67,有望成为TNBC患者预后判断的新指标,也为探索TNBC治疗新靶点提供思路.
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叉头框蛋白 M1、环氧合酶2在结肠癌组织中的表达及相关性分析
目的：探讨叉头框蛋白M1（fork head box M1，FoxM1）和环氧合酶2（cyclooxygenase2，COX-2）在结肠癌（colorec-tal carcinoma，CRC）中的表达及两者的相关性。方法采用免疫组织化学法检测FoxM1和COX-2在95例CRC组织和40例正常结肠组织中的表达，分析FoxM1和COX-2与结肠癌临床病理参数间的关系及两者表达的相关性。结果 FoxM1和COX-2在CRC组织中表达阳性率分别为85．3％（81／95）和87．4％（83／95），显著高于正常结肠组织的7．5％（3／40）和12.5％（5／40）（P＜0.05）。 FoxM1和COX-2的高表达与较多的淋巴结转移及较晚的临床分期密切相关（P＜0．05），且两者在CRC中的表达强度呈正相关（ r＝0．638，P＜0.05）。结论 FoxM1和COX-2的表达与CRC临床分期和淋巴结转移密切相关，提示其可能与CRC患者较差的预后相关。
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叉头框蛋白 M1在肿瘤信号转导中的作用
叉头框蛋白M1（forkhead box M1， FoxM1）属于Fox转录因子家族，在多种恶性肿瘤中异常高表达，与多个癌基因信号通路相关，在肿瘤的发生、进展和转移等方面发挥重要作用。 FoxM1已成为肿瘤治疗研究的一个新靶点。
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叉头框转录因子 M1对人结肠癌细胞恶性表型的影响
目的：结肠癌的侵袭和转移是结肠癌患者死亡的主要原因。文中拟探讨叉头框蛋白M1（ Forkhead box M1， FoxM1）对人结肠癌细胞恶性表型的影响。方法应用实时荧光定量PCR（real time-PCR， RT-PCR）和Western blot方法筛选出高表达细胞株HT-29及低表达细胞株HCT-116，应用RNA干扰技术有效下调FoxM1在HT-29细胞中的表达，同时采用过表达质粒调高FoxM1在HCT-116中的表达，2种细胞株根据不转染、转染空载质粒及转染干扰或过表达 FoxM1质粒各分为3组：空白对照组、实验对照组、实验组。分别采用划痕实验和 Transwell小室法检测上述转染细胞的细胞增殖、迁移与侵袭能力的变化。结果 RT-PCR及Westen blot结果提示，FoxM1在HT-29细胞中高表达，而在HCT-116细胞中呈低表达。应用PEX-2-FoxM1上调HCT-116细胞中FoxM1表达后，细胞的划痕愈合能力HCT-116实验组[（70．92±1．48）％]较HCT-116实验对照组[（18．43±3．01）％]及HCT-116空白对照组[（16．66±2．63）％]显著增强（P ＜0．05）。 HCT-116实验组 Transwell 小室穿膜细胞数[（186．0±6．8）个]较HCT-116实验对照组[（42．0±2．0）个]及HCT-116空白对照组[（37．0±2．2）个]均增加（P＜0．05）。应用pGPH-sh FoxM1下调HT-29细胞中FoxM1表达后，HT-29实验组细胞的划痕愈合能力[（10．37±3．86）％]较HT-29实验对照组[（39．79±2．17）％]及HT-29空白对照组[（67．36±2．61）％]显著下降（P＜0．05）。 HT-29实验组Transwell 小室穿膜细胞数[（53．0±1．8）个]较较HT-29实验对照组[（95．0±2．2）个]及HT-29空白对照组[（118．0±4．0）个]均减少（P＜0．05）。结论FoxM1表达与结肠癌的侵袭、转移等关系密切；FoxM1的siRNA干扰可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭，人为调高结肠癌细胞株中FoxM1表达则促进细胞的增殖、迁移和侵袭。提示FoxM1可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。
关键词： 叉头框蛋白M1 RNA干扰 划痕愈合 Transwell侵袭实验 -
叉头框蛋白M1和中心体相关激酶2在肾癌组织中的表达及意义
目的 探讨叉头框蛋白M1(FoxMl)与中心体相关激酶2(Nek2)在肾癌组织中的表达及意义.方法 随机选取通过手术切除的肾细胞癌组织及癌旁组织标本56例,标本均经病理检查确诊,应用Western blot法检测肾癌组织和癌旁组织中FoxM1蛋白和Nek2的表达.结果 FoxM1蛋白在肾癌组中的表达(1.16±0.25)较癌旁组(0.26±0.08)高(t=39.083,P=0.000),Nek2在肾癌组中的表达(1.04±0.18)较癌旁组(0.17±0.05)高(t=34.161,P=0.000),肾癌组织中FoxM1和Nek2的表达呈正相关(r=0.869,P=0.000).结论 FoxM1和Nek2在肾癌中呈高表达,且两者表达呈正相关,联合检测FoxM1和Nek2可能有利于肾癌的临床诊断和预后判断.
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FOXM1在结直肠腺瘤和结直肠癌组织中的异常表达及意义
0引言细胞周期紊乱是肿瘤主要的发生机制[1].叉头框M1 (Forkhead box M1,FOXMl)基因在细胞周期调控中起着重要作用,其表达水平的细微变化都能导致细胞增殖能力的改变,因此其表达水平的精确调控对有丝分裂和细胞增殖的正常进行至关重要[2].正常情况下,FOXM1在所有的增殖细胞中均有表达,而在终末期细胞中不表达,具有促进细胞增殖的功能[3]且与多种肿瘤的发生发展密切相关,其异常高表达见于肝内胆管细胞癌[4]、胰腺癌[5]、乳腺癌[6]、非小细胞肺癌[7]和基底细胞癌[8].
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miR-370-3p对胶质母细胞瘤U87-MG细胞株增殖能力的影响
目的 探讨微小RNA-370-3p(miR-370-3p)对人脑胶质瘤细胞系U87-MG增殖能力的影响及其机制.方法 将常规培养的U87-MG细胞分为空白组、无义序列转染组和模拟物转染组,后两组分别转染miRNA无义序列及miR-370-3p模拟物,qRT-PCR法检测其转染效率,免疫印迹法检测转染细胞叉头框蛋白M1(FoxM1)的表达;采用EdU法评估细胞的增殖能力,采用平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力.结果 与空白组和无义序列转染组比较,模拟物转染组细胞miR-370-3p表达显著增加(P＜0.05),而FoxM1的蛋白表达显著减少(P＜0.05);而且模拟物转染组U87-MG细胞增殖能力及克隆形成率均明显减少(P＜0.05).结论 miR-370-3p能够抑制U87-MG细胞的增殖能力,可能与减少FoxM1的表达有关.
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MicroRNA-134通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2表达抑制乳腺癌细胞迁移及侵袭
目的 探讨microRNA-134(miR-134)在乳腺癌中的表达及其影响乳腺癌迁移、侵袭能力的分子机制.方法 选取2013年1月-2015年2月于本院乳腺病科行手术切除并经病理检查证实的乳腺导管内原位癌组织30例、乳腺浸润性导管癌组织35例及正常乳腺组织15例.通过实时定量聚合酶链式反应法分别检测miR-134在肿瘤和正常乳腺组织中的表达,统计分析miR-134表达与患者临床特征间的相关性;通过miR-134模拟物转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用细胞划痕愈合试验评价过表达miR-134对细胞迁移能力的影响,采用Transwell侵袭小室试验评价过表达miR-134后MDA-MB-231细胞侵袭能力的变化.通过免疫组织化学染色检测miR-134与下游潜在靶点叉头框蛋白M1蛋白表达关系,实时定量聚合酶链式反应、蛋白免疫印迹检测转染miR-134模拟物后其下游潜在靶点叉头框蛋白M1及下游效应分子人基质金属蛋白酶2的表达变化.结果 miR-134在正常乳腺组织、乳腺导管内原位癌组织及乳腺浸润性导管癌组织中的表达量依次降低(P＜0.05).乳腺癌组织中低水平的miR-134与肿瘤淋巴结转移及高TNM分期显著相关(P＜0.05);在体外试验中,过表达miR-134能够显著降低MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力(P＜0.05);免疫组织化学染色结果证实miR-134与叉头框蛋白M1蛋白的表达呈负相关关系(P＜0.05);实时定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印记结果显示,过表达miR-134后可显著抑制乳腺癌细胞中叉头框蛋白M1及人基质金属蛋白酶2的表达水平(P＜0.05).结论 miR-134在乳腺癌组织中表达下调,miR-134可能通过下调叉头框蛋白M1/人基质金属蛋白酶2的表达来抑制乳腺癌细胞的迁移及侵袭.
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FOXM1在SAP/ALI小鼠肺组织修复过程中的变化及其意义
目的 探讨重症急性胰腺炎(SAP)急性肺损伤(ALI)修复过程中叉头框蛋白M1(FOXM1)的表达变化及其意义.方法 将BALB/c小鼠随机分为假手术组(10只)和模型组(50只),模型组小鼠又随机分为模型组1、3、7、10和14 d 5个亚组,每组10只.采用雨蛙肽腹腔注射诱导SAP/ALI模型,观察肺组织病理变化、肺微血管通透性、肺组织含水量及血清淀粉酶浓度.采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测肺损伤修复过程中不同时间点FOXM1 mRNA和蛋白的表达水平,分析FOXM1蛋白表达与肺微血管通透性的相关性.结果 与假手术组比较,模型复制后各时间点肺组织形态发生改变,但随着时间的推移而不断减轻(P<0.05).血清淀粉酶、肺微血管通透性及肺组织含水量变化规律与肺组织损伤后病理学评分改变相似.同时,肺组织FOXM1 mRNA表达水平有明显的动态演变规律,复制后第1天表达下调,第3天开始逐渐上调,第7天达高峰,第10天逐渐恢复,第14天时基本回到基础水平,且FOXM1蛋白也有相似的表达规律.FoxM1蛋白表达水平与肺微血管通透性呈负相关(P<0.05).结论 FOXM1可能在促进肺气血屏障的修复过程中发挥重要作用.
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沉默FoxM1通过促进线粒体释放细胞色素C诱导口腔鳞癌细胞凋亡
目的:研究沉默叉头框蛋白M1(FoxM1)基因对口腔鳞癌细胞凋亡影响及机制.方法:口腔鳞癌SCC9细胞感染FoxM1-shRNA慢病毒或阴性对照慢病毒,用RT-qPCR和Western blot测定沉默效果.MTT法测定细胞活力变化,平板克隆实验测定细胞克隆形成能力变化,流式细胞术测定细胞凋亡变化,Western blot测定细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平变化,JC-1法测定细胞线粒体膜电位变化,Western blot测定细胞线粒体和胞浆中细胞色素C(cytochrome C)蛋白水平的变化.结果:FoxM1-shRNA慢病毒感染成功下调口腔鳞癌细胞中FoxM1的表达(P<0.05),阴性对照慢病毒对细胞中FoxM1表达水平没有影响.沉默FoxM1的口腔鳞癌细胞活力降低(P<0.05),细胞克隆形成能力也降低(P<0.05),细胞凋亡率及cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白水平均升高(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),胞浆中cytochrome C蛋白水平升高(P<0.05),线粒体中cytochrome C蛋白水平降低(P<0.05).结论:沉默FoxM1可以通过降低口腔鳞癌细胞线粒体膜电位、促进线粒体释放cytochrome C而诱导细胞凋亡.
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抑制白血病 K562细胞 FoxM1表达可增强细胞对高三尖杉酯碱的敏感性
目的：探讨抑制白血病K562细胞叉头框蛋白M1（FoxM1）是否增强细胞对高三尖杉酯碱（HHT）的敏感性。方法：HHT以不同浓度（0、0．015、0．030和0．045μmol／L）和低起效浓度不同时间（0．015μmol／L，0、24、48和72 h）作用于K562细胞，real－time PCR和Western blot检测FoxM1 mRNA和蛋白表达；以0．015μmol／L HHT作用K562细胞后转染FoxM1 siRNA，观察沉默K562细胞FoxM1后细胞对HHT的敏感性、细胞增殖和凋亡效应以及FoxM1相关靶分子c－Myc和Sp1表达状况。结果：随着HHT浓度增加和时间延长FoxM1表达逐渐降低，说明HHT抑制K562细胞FoxM1表达；HHT处理K562细胞后转染FoxM1 siRNA，细胞生长和克隆形成显著下降，细胞凋亡增加，因此抑制FoxM1可增加K562细胞对HHT的敏感性；FoxM1 siRNA组c－Myc和Sp1表达显著降低，表明FoxM1可正性调控c－Myc和Sp1表达。结论：HHT可以抑制白血病K562细胞FoxM1表达，干扰FoxM1可增强细胞对HHT的敏感性。
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miR-134调控人肺腺癌细胞顺铂耐药
目的：探讨微小RNA-134（miR-134）在人肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用及机制。方法：采用miR-NA芯片筛选A549／CDDP和A549细胞差异表达miRNA，应用real-time PCR验证miR-134的表达。将miR-134模拟物和抑制物分别转染A549／CDDP和A549细胞，应用MTT法检测肺癌细胞对顺铂的敏感性。 Western blot技术检测miR-134对叉头框蛋白M1（FOXM1）和多药耐药相关蛋白1（MRP1）表达的影响。结果：miRNA芯片显示，13种miRNAs在A549／CDDP和A549细胞中呈显著表达；其中，miR-134下调显著。 miR-134模拟物转染组A549／CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高（P＜0.01），而miR-134抑制物转染组A549细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著降低（ P＜0.01）。 FOXM1 siRNA能够有效抑制FOXM1蛋白表达，si-FOXM1转染组A549／CD-DP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高（P＜0.01）。此外，Western blot结果显示miR-134能够抑制MRP1蛋白表达。结论：miR-134能够增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性，其机制可能与调控FOXM1和MRP1表达有关。
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肝细胞癌中Kruppel样因子4与叉头框蛋白M1基因表达相关性及临床意义
目的 探讨人肝细胞癌中核转录因子Kruppel样因子4(KLF4)与叉头框蛋白M1 (FOXM1)基因表达相关性,以及两种转录因子表达对肝细胞癌生长和增殖的影响.方法 采用实时荧光定量PCR技术检测50例肝细胞癌患者肝癌组织及8株肝癌细胞中KLF4mRNA和FOXM1 mRNA表达水平并分析其相关性;KLF4过表达质粒和KLF4 siRNA分别转染人肝癌细胞Hep3B和BEL-7402,采用实时荧光定量PCR、蛋白印迹实验检测KLF4 mRNA、FOXM1 mRNA及KLF4蛋白、FOXM1蛋白表达水平;通过CCK8实验检测KLF4和FOXM1基因对细胞增殖的影响.结果 肝癌组织和细胞中KLF4低表达,而FOXM1高表达,两者呈负相关(r=-0.462,P=0.001);KLF4基因过表达抑制肝癌细胞增殖,而FOXM1基因过表达促进肝癌细胞增殖,FOXM1基因过表达能恢复KLF4对肝癌细胞抑制增殖作用.结论 在肝细胞癌中,KLF4和FOXM1基因表达呈负相关,两者不同的表达水平可影响肝癌细胞的增殖.
关键词： 肝细胞癌 Krüppel样因子4 叉头框蛋白M1 增殖
