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流式细胞术检测不同RhD血清型红细胞RhD抗原的表达
本研究旨在建立流式细胞术(FCM)检测红细胞表面RhD抗原的实验方法,并研究不同RhD血清型红细胞表面D抗原表达的差异.选取标准的RhD(+)和RhD(-)细胞按1:1比例混合,用间接标记法[-抗为IgG抗-D,二抗为FITC-抗-IgG F(ab')2]染色,应用FCM检测RhD(+)细胞的比例,并确立IgG抗-D的佳使用稀释度.采用FCM检测RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性红细胞表面D抗原数量.结果显示,IgG抗-D单克隆抗体的佳使用稀释度是1:4,1×106/50 μl.RhD阳性、弱D型、RhDel型、RhD阴性者RhD(+)红细胞百分率分别为(96.8±2.97)%、(79.5±9.88)%、(47.8±11.43)%、(3.7±2.96)%,红细胞表面D抗原平均荧光强度依次为33.3±6.21道、18.6±5.39道、7.10±1.17道、0.79±0.55道.结论:4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量多,弱D型次之,RhDel型少.
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非ABO RhD血型抗体引起新生儿溶血病临床观察
新生儿溶血病(HDN),以ABO系统为常见,其次为Rh系统,而Rh系HDN中约60%与抗-D有关[1],目前ABO血型和RhD检测已纳入产前保健常规检查.
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RhDel型与RhC抗原的相关性研究
目的 研究RhDel型与RhC抗原之间的相关性,为临床鉴别RhDel型提供一种更为简便的方法.方法 收集137份样本,血清学方法检测Rh抗原,吸收放散实验鉴定RhDel型,PCR-SSP技术检测RHD1227多态性.结果 137例RhDel型样本中,RhC抗原阳性比例为84.67％ (116/137),RhDel型与RhC抗原具有显著的相关性(P＜0.05).RHD1227A等位基因在RhCcee和RhCCee表型所占的比例分别为65.52％ (76/116)和18.10％(21/116).结论 RhDel个体与RhC阳性表型具有相关性,将RhC表型检测和RHD1227A联合检测用于RhDel型的鉴定,是一种临床可行的方法.
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孕妇产前免疫性IgG 抗体效价检测意义探讨
目的:探讨夫妇ABO/RhD 血型不合妊娠期血型抗体效价与妊娠次数及年龄的关系.方法:采用试管凝集法常规检测夫妇ABO 及RhD 血型,对夫妇ABO 及RhD 血型不合的孕妇进行血清采用凝聚胺法微柱凝胶法不规则抗体筛选、鉴定和IgG-A 或IgG-B 及抗-D 效价测定;分析IgG-A 或IgG-B 效价与妊娠次数及年龄段的统计学关系.结果:380 例ABO 血型不合夫妇的孕妇血清中检出IgG-A 或IgG-B 效价≥1:64 者204 例(53.6%),在8 例RhD 阴性孕妇中检出抗-D 5 例(62.5%).多次妊娠孕妇的IgG-A 或IgG-B 效价≥1:64 明显多于1 次妊娠者(P＜0.01);31～40 岁的高龄孕妇的IgG-A 或IgG-B 效价≥1:64 高于21～30 岁的适龄孕妇(P＜0.01).结论:产前对夫妇进行ABO/RhD 血型、IgG-A 或IgG-B、抗-D 抗体效价检测,对妊娠次数较多、高龄孕妇在孕早期即应进行定期抗体效价检测,以便及时预防、诊断、治疗,减少母婴血型不合新生儿溶血病的发生.
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RhD血型的检测及其临床意义
RhD血型在临床输血中具有重要意义,和ABO血型一样,它也是输血前必须检测的血型.文章概要介绍了RhD血型系统及其检测方法和临床意义,以期为确保临床输血安全提供参考.
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RhD血型的自动化微板筛查法
随着全自动筛查仪器在血站的普及[1],我们尝试利用RSP全自动加样器在微板上进行大批量筛查RhD血型工作,通过调整加样参数,重新筛选红细胞、抗-D稀释倍数等参数,后在血型微板观察仪上观察结果,该法省工、省时,节约试剂,现报道如下.
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2002-2006年郑州市无偿献血者ABO及RhD血型分布调查
为了给郑州市建立佳ABO血液库存模型提供依据,进一步完善稀有血型者资料库,笔者对郑州市ABO及RhD血型在人群中的分布做了一次综合性调查,现将结果报告如下.
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新生儿溶血三项检测结果的研究分析
目的:分析研究新生儿溶血三项的检测结果.方法:将我院收录的300例新生高胆红素症患儿设为研究对象,对其实施ABO、RhD血型鉴定和新生儿溶血三项检验,将结果进行分析.结果:在所有患儿中,通过ABO血型导致的HDN有46例,占15.33%;而Rh-HDN例数为6例,占2%;可见ABO-HDN比较多见,Rh-HDN比较罕见.在患儿的血型分布中,ABO-HDN中常见A型血和B型血,Rh-HDN中常见的是O型血.结论:因Rh不匹配导致的新生儿溶血病(HDN)低于由ABO血型不匹配导致的HDN,ABO-HDN常出现在A和B型血患儿中,而Rh-HDN常出现在O型血患儿中.
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26 593例输用血患者RhD血型检测结果分析及临床意义
探讨输血前检测RhD临床意义.用盐水抗-D血清检测,阴性者用微柱凝胶血型卡复检.结果在26593例预输血患者中共检出RhD阴性80例.输血前RhD的检测可预防迟发性输血反应和新生儿溶血病.
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RhD基因外显子多态性观察
目的:观察中国人RhD基因.方法: 采用P CR-SSP技术,检测32例血清学试验RhD阳性,44例RhD阴性者的D基因外显子.结果:RhD阳性者D基因外显子无缺失,RhD阴性者D基因外显子有完全缺失(61.4%)、部分缺失(18.2%)与无缺失(20.4%)3种类型.结论:中国人RhD基因外显子具有多态性.
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RhD基因检测方法在Rh阴性血型基因鉴定中的应用
目的探讨RhD基因检测方法在中国汉族人Rh阴性血型鉴定中的应用价值.方法对于68例各种表型的Rh阴性中国汉族人样本,用扩增RhD基因外显子3,4,5,7,10的5种方法,检测RhD基因的存在与否.结果68例样本,总阴性率为52.9%,其中29例含有C抗原的Rh阴性样本,5种方法鉴定皆为阴性的仅有1例(3.4%),而表型为C阴性的38例样本,34例(89.5%)为阴性.结论以检测RhD基因存在与否为基础的Rh阴性血型基因鉴定方法,不适用于C抗原阳性的中国汉族Rh阴性血型基因鉴定,仅有扩增RhD外显子3,4,10的方法,适用于不含C抗原的Rh阴性血型的基因鉴定.
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新乡地区无偿献血者ABO、Rh血型分布调查
目的 了解新乡地区无偿献血者ABO、Rh血型分布特征.方法 对2011年至2012年新乡地区无偿献血者标本115 119份进行微板法ABO、RhD血型检测后的汇总分析.结果 ABO血型分布A型占35.81％,B型占29.41％,O型占25.90％,AB型占8.87％；RhD阴性者占献血人群的0.31％.结论 了解新乡地区ABO及RhD阴性血型分布特征,为合理制定库存量、建立RhD阴性献血者资料库、保障临床用血提供依据.
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等位基因特异性PCR技术在DEL表型基因分型中的应用
目的: 建立DEL表型的基因分型方法,用于快速鉴定DEL表型.方法: 用RH Box基因分型方法鉴定标本的基因型,用血清学方法确定标本的DEL表型.根据RHD 1227A等位基因序列设计等位基因特异性-聚合酶链反应(allele specific-polymerase chain reaction,AS-PCR),用于DEL表型基因分型,结果同血清学的方法作比较,探讨临床应用的可行性.结果: 28例RH Box基因分型为RHD-/RHD-的标本,血清学方法、基因分型方法DEL表型鉴定结果均为阴性;在25例RH Box基因分型为RHD+/RHD-或RHD+/RHD+的标本中,用血清学方法检出的11例DEL表型标本,基因分型方法均扩增到867 bp的1227A等位基因条带;1例血清学方法阴性,而基因分型方法检测为阳性,后经测序分析证实RHD 1227A为阳性,分析此例标本可能为血清学方法漏检.这说明在鉴定DEL表型的方法中基因分型方法比血清学有更高的灵敏度.结论: AS-PCR方法可用于临床筛选Rh阴性人群中的DEL表型.
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微柱凝胶法与经典抗球蛋白法鉴定RhD变异型的结果比较
RhD抗原在不同类型红细胞上表达的强度不均一,从很强的D到弱D,弱的是Del.RhD变异型包括D抗原增强和D抗原减弱,增强的D抗原可以直接在盐水中凝集IgG抗-D;减弱的D抗原包括弱D、不完全D(部分D),可以通过RhD阴性确认实验或吸收放散实验检出[1].无论是增强的D抗原还是减弱的D抗原都属于RhD变异型.本文所收集7例RhD变异型标本均是通过RhD确认实验检出,均属于RhD抗原表现减弱一类,因使用了不同方法,凝集强度不尽相同,现将结果报告如下.
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RhD阴性血库的建立与临床应用
人类Rh血型系统是红细胞血型中仅次于ABO血型的重要系统,RhD阴性者约占我国总人口的3‰～5‰[1].为满足RhD阴性患者的临床用血需要,铜陵市血站建立了一支61人组成的RhD阴性无偿献血者队伍,已为患者提供RhD阴性血液9 500 ml.
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RhD初筛阴性孕产妇RHD基因表型相关研究
目的 研究不同RhD基因型与抗-D产生的相关性,以发现与产生抗-D及能引起Rh血型新生儿溶血病(HDN)相关的D基因表型.方法 应用血清学方法结合分子生物学(PCR-SSP)技术.结果 RhD初筛阴性样本128例,再行RhD阴性确认试验,有3例样本阳性,为D变异型.根据分子生物学结果表明缺失RHD基因104例；DEL型21例；弱D15型2例；DⅥ型Ⅲ型1例.结论 应对RhD抗原初筛试验阴性的个体进一步鉴定RHD基因型,以预测与评估产生抗-D的可能性,从而对孕产妇进行孕期指导、监测及产后干预.
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RhD (IgM)血型定型试剂质量分析
目的 分析市售RhD(IgM)血型定型试剂(单克隆抗体)的质量情况.方法 采用已知基因型的阳性红细胞作标准细胞对收集到的市售4家IgM型抗-D试剂效价、亲和力、特异性进行测定,并分析其受不同温度及时间的影响.结果 市售的4家试剂,2℃～8℃保存条件下效价均达到了其试剂盒标识的效价.在25℃条件下,第3天的效价不变,到第6天,有1家的保持不变,另3家均降低1个滴度；在37℃条件下,有2家第3天效价不变,到第6天降低1个滴度,另2家第3天降低1个滴度,第6天不变.试剂盒标注亲和力试验结果均大于15s,4家试剂在不同温度下亲和力变化不明显.结论 在4家试剂中,第4家试剂稳定性好且效价高；第1家稳定性较好,但效价低,亲和力时间长；第2、3家效价高,稳定性较好.
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RhD(-)无偿献血者中RhD表型与基因型检测情况分析
目的 寻找一种有效针对无偿献血者的RhD血型基因定型方法.方法 对30例RhD(–)无偿献血者血液样本进行RhD基因定型、弱D 检测和RhCE基因定型.应用荧光定量PCR检测RHD启动子、第4内含子,以及第7、10外显子.结果 30例RhD(–)无偿献血者中,21例未检测到RHD基因,2例为杂交型,其余7例存在RHD启动子、第4内含子和第7、10外显子,其中5例为DEL型,1例为弱D,1例为部分D.30例无偿献血者的RhCE基因型为,20例C–E–c+e+,6例C+E–c+e–,2例C+E–c+e+,1例C–E+c+e–.结论 采用RHCE分型作为Rh(–)定性的筛选检查,能较好地区分D变异体.
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154例RhD阴性表型个体的D基因多态性分析
目的 研究RhD阴性个体基因多态性.方法 采用抗人球蛋白试验(IAT)确认RhD阴性个体;对RhD阴性个体再运用PCR-SSP方法分析其基因分布情况.结果 154例IAT确定为RhD阴性的个体中,86例所检测的外显子完全缺全(55.84％)、36例完整(23.38％)、32例部分缺失(20.78％);其检出DelRhD1227A、弱D15型、RHD-CE(2～9)-D、DVa(Has)、DVIⅢ等多种RhD阴性等位基因.结论 江西地区血清学RhD阴性人群中存在RHD基因且呈现多态性,提示可联合应用血清学和基因分型两种方法来检测D抗原.
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全自动微柱凝胶技术在ABO、RhD血型鉴定中的应用分析
血型鉴定工作是临床医疗工作的重要组成部分,是保障输血安全的基础.目前,血型鉴定的方法很多,例如玻片法、纸板法和试管法等[1].随着医疗科技的不断进步,全自动微柱凝胶技术开始广泛应用于ABO、RhD的血型鉴定中,具有较强的特异性,安全可靠,消除了人为因素对鉴定结果的影响[2].为了探讨全自动微柱凝胶技术在ABO、RhD血型鉴定中的临床应用价值,笔者所在医院选取了6820例ABO和RhD血型抗原标本进行了如下研究.
