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改良人原生殖细胞培养基培养日本血吸虫生殖类细胞的初步研究
目的 探讨改良人原生殖细胞(human primordial germ cells,HPGC)培养基培养日本血吸虫(Schistosoma japonicum, Sj)生殖类细胞的可行性.方法 用HPGC培养基和改良HPGC培养基,分别对日本血吸虫36d成虫全细胞进行选择性培养,比较观察培养细胞的生长特性和一般形态,对2种培养基培养4～6周的细胞进行超微结构和AKP染色鉴定,对改良HPGC培养基培养细胞用BrdU掺入法检测细胞增殖与染色体核型分析.结果 HPGC培养基培养2周后出现形态和大小较均匀的细胞,6周时多数细胞死亡或崩解;培养4周的细胞超微结构显示异常形态,APK染色呈阳性反应.改良HPGC培养基培养细胞呈半悬浮集落状态,4周内生长较快,形态差异悬殊,随着培养期延长,细胞呈相似的圆形,核和核仁清晰;培养6周后,细胞生长速度减慢,细胞核逐渐消失,至第10周左右死亡;培养8周内均可见细胞分裂相.BrdU掺入法检测培养4周细胞可见细胞核酸合成;培养5周的细胞超微结构显示正常形态,具生殖类细胞特征(胞质中可见大小不等的囊泡),细胞染色体核型表现血吸虫单倍体和双倍体特征;培养6周的细胞AKP染色呈强阳性反应.结论 用HPGC改良培养基能使日本血吸虫成虫的某些类别的细胞增殖,该类细胞具有生殖类细胞的部分特征.
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鸡胚PGC向造血系统细胞分化的原位观察
为探讨血发生与原生殖细胞的关系,用自制的胚胎固定圈对取自不同发育时期的早期鸡胚展平、定位,经戊二醛固定后分别进行PAS染色和HE染色,经系列脱水、透明、封固,对其进行整装原位和平切切片观察.结果表明:①用经典的识别原生殖细胞(PGCs)的PAS染色方法与HE染色所观察到的PGC在鸡胚的分布及细胞形态基本一致,而HE染色较PAS法能更有助于清晰、完整、准确地识别PGC的细胞内部结构特征;②在孵化26小时的鸡胚胚外胚盘的明暗交界处可见血岛的发生,血岛发生的时间比真正的卵黄囊产生时间(大约44-48小时)要早很多;③血岛周围的血管内皮细胞与管腔中游离细胞都来自PGC.结论:血岛早发生的解剖位置可能不是卵黄囊而是胚外胚盘中胚层,血管内皮细胞与血细胞平行发生,PGC是成血管一造血干细胞的共同祖先.
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原生殖细胞的研究进展
原生殖细胞是来源于胚胎原始生殖嵴的一种具有多向分化潜能的干细胞,原生殖细胞的形态、标志及体内外分化潜能都类似于胚胎干细胞,而且也具有其种系传递能力.研究表明,原生殖细胞在胚胎发生中有其相对固定的迁移途径,细胞的迁增殖和分化受许多细胞因子的调控,原生殖细胞可表达某些特异的抗原,据此可对其进行鉴定,目前许多种属的原生殖细胞已建系,这必将有助于原生殖细胞的深入研究.原生殖细胞作为一种多能干细胞,对于体外研究胚胎发育、基因研究、基因组学研究、药物筛选等有重要意义.
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干细胞在肝硬化的临床研究现状
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定条件下,它可以分化成多种功能细胞.根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞.由于胚胎干细胞的多功能性,能够分化成任何一种细胞类型(除原生殖细胞),它在再生治疗领域的吸引力引人注目.然而,进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎,而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式.目前,胚胎干细胞的研究仍然备受伦理、道德、法律的问题困扰.骨髓干细胞主要有两大类,包括造血干细胞HSC及间充质干细胞MSC.HSC移植治疗血液系统及其他系统等均取得令人瞩目的进展,同时也为其他类型成体干细胞的研究和应用奠定了坚实的基础.MSC能够分化为肝细胞,参与肝脏的损伤修复,改善肝功能.在20世纪50年代末,Farber、Wilson等[1,2]相继提出了肝卵圆细胞及肝干细胞的概念,在肝脏损伤修复中起到增殖修复作用.
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大鼠原生殖细胞的形态学及分化特性
目的研究大鼠胚胎原生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)的形态及其分化特性.方法取受精后10.5d的大鼠胚胎作HE染色,取受精后11.0～12.5 d的大鼠胚胎生殖嵴进行PGCs原代培养,光、电镜观察PGCs及其分化细胞的微细结构,碱性磷酸酶(ALP)染色检测细胞的分化程度.结果大鼠PGCs位于卵黄囊内胚层深部的间充质内,体积大,呈椭圆形或不规则形;核大,染色质细密,含l～2个核仁.体外培养可见PGCs大而圆,散在分布,或聚集成团,胞质中含有椭圆形的线粒体和丰富的核糖体,ALP反应呈阳性;培养4～5 d,PGCs形态不规则,有伪足,ALP反应减弱,进一步分化可形成神经元样细胞、表皮细胞、心肌细胞、分泌细胞以及类似血管、心脏的管腔样结构等.由PGCs分化来的细胞ALP反应均呈阴性.结论大鼠生殖嵴来源的PGCs是一种具有发育全能的、可分化形成3个胚层衍生物的胚胎多能于细胞.
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胚胎干细胞自我更新的信号转导途径和体外培养系统的研究进展
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)主要来自囊胚内细胞团及受精卵发育至桑堪胚之前的早期胚胎细胞,或者从胎儿生殖嵴分离得到的原生殖细胞以及体细胞核转移至去核卵母细胞后培育出来的全能细胞.
