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脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点
目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.
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急性早幼粒细胞白血病患者中TCR Vβ T细胞体内外克隆性增殖的比较
为了解急性早幼粒细胞白血病(APL)患者T细胞在体内或体外经诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点,利用T淋巴细胞液体培养法,在rhIL-2和抗CD3单抗条件下诱导扩增APL患者单个核细胞,并应用RT-PCR分别扩增培养前后患者T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的互补决定区3(CDR3)片段,了解各Vβ亚家族的表达情况;对阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性.结果发现,APL患者T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后可检测到部分新增TCR Vβ亚家族T细胞.全部患者存在某些TCR Vβ亚家族的克隆性增殖T细胞.2例患者均出现相似的Vβ1,Vβ3,Vβ7,Vβ16和Vβ20 T细胞的克隆性增殖情况.结论:T细胞的体外培养可诱导某些Vβ亚家族的表达.在T细胞培养不同时间中,呈持续克隆性增殖的TCR Vβ亚家族T细胞可能是患者T细胞对APL白血病细胞相关抗原的特异性免疫应答.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞培养 克隆性增殖 -
急性单核细胞白血病患者外周血和骨髓TCR Vβ亚家族 T细胞的倾斜性分布特点
采用RT-PCR扩增急性单核细胞白血病(AML-M5)患者外周血和骨髓单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的利用情况.结果发现,不同标本中可检测到1-19 Vβ亚家族的T细胞,不同患者外周血和骨髓中TCR Vβ亚家族T细胞分布不尽相同.研究结果提供了AML-M5患者外周血和骨髓中TCR Vβ T细胞倾斜性分布的细胞免疫功能改变特点.
关键词： 急性单核细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞 逆转录-聚合酶链反应 -
中老年男性非小细胞肺癌患者TCR Vβ基因表达谱分析
目的 分析非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)T细胞受体(TCR)Vβ基因在中老年男性患者外周血的表达情况.方法 分离健康人及患者外周血的T细胞,用流式细胞术分析TCR Vβ各亚家族表达谱,统计分析其特点.结果 患NSCLC的中老年男性外周血中TCR Vβ部分亚家族高表达,其中CD8+TCR Vβ3、4、9表达有统计学意义(P均＜0.05),同时CD8+TCR Vβ3与Vβ4两基因表达有相关性；r=0.541,P=0.008.结论患NSCLC的中老年男性CD8+TCR Vβ在外周血呈倾斜性分布,推测与肿瘤表位特异性表达有关.
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大鼠T细胞受体Vβ5.2-HSP70和Vβ8.2-HSP70基因真核表达质粒的构建及表达
目的:构建含大鼠TCR Vβ 5.2-HSP70和TCR Vβ 8.2-HSP70基因的重组真核表达质粒,并检测其在体内外的表达.方法:实验于2005-10/2006-09在首都医科大学免疫学系实验室完成.①以自主构建的重组表达载体pTARGET-TCRVβ5 2和pTARGET-TCR Vβ 8.2为模板,将结核杆菌HSP70的一段保守序列P111-125设计到引物中,通过PCR的方法得到TCR Vβ 5.2-HSP70和TCR Vβ 8.2-HSP70基因片段,将其插入到真核表达载体pTARGET中,构建重组表达载体pTARGET-TCR Vβ 5.2/8.2-HSP70.②将BALB/c小鼠48只随机分为4组,pTARGET-TCR Vβ 5.2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ 8.2-HSP70组和空质粒组肌注相应的质粒DNA 100 μg/次,PBS组注射PBS缓冲液100 μL/次.共注射3次,每次间隔2周.于末次免疫后3 d取注射部位的肌肉,用RT-PCR及免疫组化染色法检测TCR Vβ 5.2/8.2-HSP70基因在注射部位的转录和表达.③将COS-7细胞分为pTARGET-TCR Vβ5 2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ 8.2-HSP70组、空质粒组和未转染细胞组,进行相应质粒转染,24 h后收集细胞,用免疫细胞化学染色法检测靶基因在真核细胞内的表达.结果:①TCR Vβ 5.2/8.2-HSP70基因已被正确插入到pTARGET载体中.②pTARGET-TCR Vβ 5.2-HSP70组、pTARGET-TCR Vβ 8.2-HSP70组小鼠免疫处的肌肉组织RT-PCR检测显示,在500～600 bp和400～500 bp处出现特异的扩增带,分别与TCR Vβ 5.2-HSP70和TCR Vβ 8.2-HSP70基因片段的大小相符,而注射空质粒组和PBS组均未见此条带.③免疫组化结果显示转染重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70的COS-7细胞的胞质及胞膜都有明显的着染.结论:成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2/8.2-HSP70,并在体内外检测到其转录和表达,为进一步进行TCR DNA疫苗治疗胶原诱导性关节炎的实验研究奠定了基础.
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弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞分布和克隆性增生特点
目的:了解弥漫大B淋巴瘤(DLBL)患者外周血T细胞的TCR Vβ基因谱系及克隆性增殖情况.方法:利用RT-PCR 方法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果:6例DLBL患者分别表达9～20个TCR Vβ亚家族.患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆、寡克隆增殖趋势及双克隆.Vβ13和Vβ15 亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高(66.7%).结论:DLBL患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的分布具有特点,表现为TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性选用和克隆性增殖,这可能是淋巴瘤患者机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应.
关键词： 弥漫大B细胞性淋巴瘤 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 基因扫描 -
B-ALL病人TCR Vβ基因谱系和克隆性分析
目的了解B-ALL病人外周血T细胞的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况.方法利用RT-PCR方法扩增13例初发未治B-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性.结果 13例B-ALL病人分别表达2～18个Vβ亚家族.13例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆及寡克隆增殖趋势、双克隆和单克隆.Vβ21和 Vβ23亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高.结论 B-ALL病人外周血T细胞的TCR Vβ谱系呈现优势利用的特点,并存在克隆性增殖的T细胞,这可能是机体对白血病相关抗原产生的特异性免疫反应;Vβ21和 Vβ23亚家族T细胞发生克隆增殖改变的趋向性比较明显,可能与B-ALL相关抗原刺激有关.
关键词： B细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 -
AML-M6患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞限制性增殖情况
0 引言多数肿瘤和白血病患者存在细胞免疫缺陷情况,通过T细胞受体基因分析各家族基因的表达情况,可以进一步明确患者外周血中所缺失的T细胞亚家族的情况,而通过T细胞克隆性分析,可以了解患者体内是否存在白血病抗原相关的克隆性增殖T细胞,从而为白血病特异性免疫治疗提供依据.
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淋巴瘤白血病患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性
目的:了解B细胞淋巴瘤白血病(LL)患者TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性.方法:利用RT-PCR分别扩增3例LL患者外周血单个核细胞的 TC R Vβ 24个亚家族基因的CDR3,以了解患者各Vβ亚家族的利用情况,然后将阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性.结果:患者中仅存在2～6个Vβ亚家族T细胞.基因扫描分析显示,2例患者外周血中的Vβ1 、Vβ 3或Vβ4亚家族出现克隆性增殖T细胞. 结论:LL患者外周血存在倾斜性分布和克隆性增殖的Vβ亚家族T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性抗白血病的免疫反应.
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RNA干扰下调PPP2R5C对T-ALL TCR Vβ亚家族分布和克隆增殖的影响
目的：基于前期利用靶向PPP2R5C基因的小干扰RNA（PPP2R5C-siRNA）抑制白血病T细胞增殖的结果，进一步了解 PPP2R5C-siRNA 对 T-ALL 样本中 TCR Vβ亚家族基因谱系及其克隆性增殖情况．方法：利用PPP2R5C-siRNA 转染2例初发未治疗T-ALL病人外周血单个核细胞（PBMC），设无关序列对照组（SC）和空白对照组（NC）；利用实时定量PCR检测PPP2R5C基因表达水平．利用RT-PCR扩增各组样本中24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区3（CDR3）；阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度，了解其Vβ亚家族T细胞克隆性．结果：PPP2R5C-siRNA 处理后明显下调PBMC中PPP2R5C基因表达水平．2例初发T-ALL外周血中分别可检测到10和17个Vβ亚家族，多数Vβ亚家族T细胞为多克隆性，病例1中Vβ9和Vβ17为寡克隆性，而病例2中，Vβ14和Vβ16呈寡克隆性；经过RNA干扰处理后，TCR Vβ亚家族表达率降低，仅检测到3和4个Vβ亚家族，分别为Vβ2， Vβ3，Vβ16和Vβ17．其中2个Vβ家族的寡克隆性模式发生改变，病例1中，Vβ17转为多克隆，而病例2中，Vβ16也转变为多克隆．结论：RNA 干扰下调白血病T细胞PPP2R5C基因表达抑制细胞增殖时，在一定程度上影响TCR Vβ亚家族T细胞增殖和克隆模式变化，对正常T细胞功能可能存在一定影响．
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甲氰咪呱对K562细胞诱导脐血T细胞TCR Vβ亚家族克隆性的影响
2细胞诱导组的T细胞对K562细胞的特异性杀伤作用显著增强(P<0.01).3组均呈现不同程度的T细胞TCR Vβ亚家族选择性利用,均有TCR Vβ21亚家族呈克隆性增殖.结论 甲氰咪呱可协助增强bcr-abl抗原刺激的特异性抗CML T细胞作用.
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NOD/SCID小鼠人源化TCR Vβ亚家族T细胞分布与克隆性分析
目的 应用脐血CD34+细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型,分析人源化TCR Vβ亚家族T淋巴细胞分布与克隆性.方法 磁珠分选法分离脐血中CD34+细胞,分别经尾静脉输入亚致死剂量照射的NOD/SCID小鼠.第6周处死小鼠提取外周血、骨髓、胸腺的RNA,RT-PCR扩增人TCR Vβ亚家族基因,并用基因扫描进行T细胞克隆性分析.结果 采用RT-PCR技术在模型小鼠骨髓中检测到部分人TCR Vβ亚家族基因Vβ1、2、9、13、19.经进一步基因扫描分析,发现部分TCR Vβ亚家族基因Vβ9、13、19呈寡克隆表达.结论 在NOD/SCID模型可重建分化成熟的TCR Vβ亚家族T细胞.未能检测到全部人TCR VβT细胞的原因可能与免疫重建不完全或存在移植物抗宿主的反应有关.人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟.
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T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析
目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况.方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3),PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性,部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析.结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同,6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族.6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞,另外,还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变,呈现寡克隆性增殖的趋势.T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞,不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同.结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变,均可检测到克隆性增殖T细胞,尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖),对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义.
关键词： T细胞-急性淋巴细胞白血病 T细胞株 T细胞受体Vβ基因 T细胞克隆性 -
CML病人TCR Vβ21寡克隆T细胞及其CDR3序列特点
目的分析慢性粒细胞白血病(CML)病人的克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法利用RT-PCR扩增3例CML外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3,了解TCR VβT细胞的分布.阳性产物进一步经基因扫描分析,了解其克隆性.寡克隆的PCR产物再进行序列分析.结果3例病人仅存在3～9个TCR Vβ亚家族T细胞,部分Vβ亚家族T细胞呈寡克隆性增殖,Vβ21的寡克隆T细胞见于全部的3例病人中.结论CML病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖,这可能是CML中机体对恶性细胞所引起的特异性免疫反应,但对不同病人的Vβ21寡克隆T细胞序列分析并未能发现完全同源的CDR3序列.
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CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析
目的了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况,及其对CML细胞的杀伤活性.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点.并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性.结果脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族,经MLTC后,2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖,CML细胞诱导的自体T细胞的TCRVβ亚家族也类似.经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性.结论CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖,诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用.
