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PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导CTL细胞杀伤活性分析
目的了解PML-RARα多肽和NB4细胞体外诱导体外诱导增殖的T细胞的特异性细胞毒作用.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,经丝裂霉素C处理的NB4细胞或PML-RARα 多肽(LSSCITQGKAIETQSSSSEE)作为刺激原体外诱导脐血单个核细胞增殖.利用LDH方法检测诱导后T细胞的细胞毒性.结果 PML-RARα多肽诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:49.65±6.7%(p<0.01)和73.13±8.42%(p<0.01),NB4细胞诱导组第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:53.33±8.82%(p<0.01)和74.46±9.57%(p<0.01),而无诱导组的第10d和第15d T细胞对NB4细胞的杀伤活性为:15.93±9.25%和38.19±10.54%,前两组T细胞对NB4细胞的杀伤作用均明显高于对照组.结论 PML-RARα多肽和NB4细胞体外可诱导出特异性T细胞,他们对表达PML-RARα的NB4细胞具有选择性杀伤作用.
关键词： PML-RARα多肽 MLTC NB4细胞 T细胞 细胞毒活性 -
AML-M2a诱导TCR Vβ T细胞的克隆性增殖和细胞毒作用
目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况.方法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况.结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79%和62.14±9.79%,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无杀伤作用.TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖.结论:AML-M2a细胞可诱导健康人T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主.
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CML细胞诱导自体和脐血T细胞TCR Vβ谱系和杀伤性分析
目的了解慢性粒细胞白血病(CML)细胞诱导T细胞的TCR Vβ亚家族限制性利用和克隆性增殖情况,及其对CML细胞的杀伤活性.方法采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养(MLTC)方法,利用CML细胞体外诱导脐血或患者的T细胞增殖,用RT-PCR和基因扫描分析MLTC前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的互补决定区(CDR3),了解各Vβ亚家族的利用和T细胞克隆性特点.并利用LDH方法检测MLTC后T细胞的细胞毒性.结果脐血T细胞表达8～11个TCR Vβ亚家族,经MLTC后,2～3个Vβ亚家族呈克隆性增殖,CML细胞诱导的自体T细胞的TCRVβ亚家族也类似.经MLTC后T细胞对原诱导细胞有较强的杀伤活性.结论CML细胞可诱导脐血T细胞和自体T细胞TCR Vβ优势利用和克隆性增殖,诱导后T细胞具有特异性杀伤CML细胞的作用.
