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恶性疟原虫海南株翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因在M15中的表达
获得翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因后与表达载体pQE-30重组,然后转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导后表达TCTP融合蛋白,薄层扫描结果显示目的蛋白占菌体总蛋白的23.4%,目的蛋白中可溶性蛋白所占比例高于非溶性蛋白.Ni-NTA纯化后C端测序,结果C端13个氨基酸序列与由GenBank国际基因库中恶性疟原虫TCTP基因推导出的C端13个氨基酸序列及组成完全一致.结果表明成功地在M15中表达了恶性疟原虫海南株TCTP基因,为进一步研究提供了实验材料.
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曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)的原核表达、纯化及其免疫原性分析
目的 原核表达、纯化曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白(Sm TCTP),并分析其免疫原性. 方法 构建曼氏迭宫绦虫翻译控制肿瘤蛋白重组表达质粒pGEX-4T-1-Sm TCTP,转化大肠埃希菌BL21菌株后用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达TCTP蛋白,用GST树脂纯化表达产物,并进行SDS-PAGE电泳分析,通过Western blot鉴定重组蛋白的免疫原性. 结果 PCR、双酶切、测序结果均表明pGEX-4T-1-Sm TCTP重组质粒构建成功,并在大肠埃希菌中表达可溶性目的蛋白,经GST树脂纯化后获得高纯度的重组目的蛋白.SDS-PAGE分析表达产物为GST融合蛋白,分子质量单位为45 ku,与Sm TCTP和GST融合蛋白理论分子质量相符.Western blot显示重组融合蛋白能被相应大鼠抗血清识别. 结论 成功进行了Sm TCTP的原核表达并获得纯化的重组蛋白,重组蛋白具有良好的免疫原性,为研究Sm TCTP的功能奠定了基础.
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舍曲林诱导Kasumi-1细胞凋亡及其作用机制的实验研究
目的:探讨精神类药物舍曲林对人急性髓系白血病细胞株Kasumi-1的生物学效应.方法:将不同浓度舍曲林作用于Kasumi-1细胞不同时间,通过细胞计数、细胞形态学检查、流式细胞术和Western blot分别检测舍曲林处理前后Kasumi-1细胞增殖和凋亡情况、细胞周期分布以及相关蛋白的改变.结果:舍曲林能够抑制Kasumi-1细胞增殖、诱导细胞凋亡;15和20 μmol/L舍曲林处理Kasumi-1细胞24h后,生长抑制率分别达到(19.00±7.37)％和(47.90±11.19)％;流式细胞术检测结果显示,与空白对照组相比,15和20 μmol/L舍曲林处理Kasumi-1细胞24 h后,Annexin V阳性细胞百分比从(9.71±2.12)％分别上升至(20.54±2.52)％和(45.37±7.88)％(P＜0.01),且细胞被明显阻滞在G0/G1期和G2/M期;此外,舍曲林还可以下调细胞内翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP).结论:舍曲林能够显著诱导Kasumi-1细胞发生凋亡,其作用机制可能与细胞内TCTP蛋白的下调相关.
关键词： 舍曲林 Kasumi-1细胞株 翻译控制肿瘤蛋白 细胞凋亡 -
翻译控制肿瘤蛋白与肿瘤关系研究进展
翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是一种具有高度保守性和同源性的蛋白,广泛表达于所有真核有机体,其表达在转录和翻译水平受调节.在肿瘤中,TCTP参与调控细胞周期和增殖、抗凋亡以及肿瘤逆转,并与化疗耐药相关,有望成为抗肿瘤治疗靶标和肿瘤逆转靶标,为肿瘤治疗提供新思路.
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翻译控制肿瘤蛋白功能的研究进展
翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)是一种在物种间高度保守、广泛表达和有多种功能的蛋白质,具有调节炎症反应、抗细胞凋亡、参与应激反应、调节细胞增殖和分化、肿瘤逆转等功能,并参与寄生虫、真菌感染和糖尿病的发展过程.本文主要就TCTP的生物学功能做一综述,以期临床借鉴.
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白血病细胞中翻译控制肿瘤蛋白的检测及其方法学比较
目的:比较蛋白印迹法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)在检测细胞内翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)中的优势,并分析两者在临床检测中的应用价值.方法:用1μmol/L全反式维A酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)处理NB4和NB4-R1细胞0～96 h,分别采用蛋白印迹法和FCM检测细胞内TCTP蛋白的变化情况,用Bland-Altman分析法分析检测结果的一致性.用FCM检测部分急性白血病患者骨髓原代标本中TCTP蛋白水平.结果:蛋白印迹法检测结果显示,经ATRA处理后NB4细胞内TCTP下降,各时间点(0、24、48、72、96 h)TCTP与β-actin灰度比的相对值分别为1.00、0.97±0.05、0.91±0.03、0.85±0.05和0.72±0.02,而NB4-R1细胞中则保持不变.FCM检测结果显示,经ATRA处理后NB4细胞内各时间点TCTP的阳性率分别为(98.93±0.49)％、(98.83±0.65)％、(96.77±1.45)％、(90.93±1.35)％和(72.17±5.57)％,NB4-R1细胞中保持不变.根据Bland-Altman法,计算可得2种方法测量值95％的一致性区间界限为(-0.081,0.111),本研究所测得的30组数据中有29组落在区间内.对11例急性白血病患者和9例非白血病患者骨髓细胞内TCTP水平的检测结果显示.非白血病患者骨髓细胞内TCTP的表达较低,而白血病患者则相对较高,两者间差异有统计学意义(P＜0.01).结论:蛋白印迹法与FCM检测细胞内TCTP蛋白水平的结果间有良好的一致性,而FCM更加适用于患者的原代标本检测.细胞内TCTP水平的高低可能与白血病的发生、发展有关,今后有可能作为临床白血病检测的分子标志物.
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日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因真核表达质粒的构建及其序列分析
目的研究日本血吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的生物学功能.方法根据已公布的日本血吸虫TCTP(SjTCTP)基因序列设计引物,从日本血吸虫成虫cDNA文库中扩增出TCTP基因ORF序列,并克隆到真核表达载体pcDNA3.O中.结果通过PCR扩增、双酶切及测序鉴定证实重组质粒pcDNA3.O-TCTP已正确插入SjTCTP基因ORF序列,该序列具有TCTP特征性TCTP1和TCTP2结构.结论 SjTCTP基因真核表达质粒构建成功,为研究SjTCTP基因的生物学功能打下基础.
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血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞翻译控制肿瘤蛋白表达的影响
目的:探讨血必净注射液对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠42只,随机分为对照组(n=6)、脓毒症组(n=18)和血必净组(n=18).腹腔注射鲍曼不动杆菌悬液造模成功后,根据取血提取中性粒细胞的时间,脓毒症组和血必净组又随机各分为6、12和24h3个亚组,每亚组6只.Western-blotting方法检测中性粒细胞TCTP的表达,比较脓毒症和血必净各亚组TCTP的表达.结果:脓毒症各亚组中性粒细胞TCTP表达量较对照组均增高(P＜0.05);血必净组各亚组中性粒细胞TCTP表达量分别较脓毒症各对应亚组均降低(P＜0.05).结论:血必净注射液治疗脓毒症可能与抑制中性粒细胞TCTP的表达有关.
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鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞中抗氧化蛋白6、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1和翻译控制肿瘤蛋白表达变化
目的：：通过蛋白印迹技术验证鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠中性粒细胞中抗氧化蛋白6(PRDX6)、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1(SERPIN B1)和翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)在不同时间点的表达情况。方法：将18只清洁级雄性成年Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组)、脓毒症6 h组(6 h组)和12 h组,每组6只。利用鲍曼不动杆菌腹腔注射制作鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠模型,提取N组、6 h组和12 h组大鼠的中性粒细胞总蛋白,用免疫印迹实验检测PRDX6、SERPIN B1和TCTP的表达变化,并与前期双向凝胶电泳结果做对比分析。结果：6 h组和12 h组中性粒细胞中PRDX6表达量均明显低于N组(P<0.01),12 h组较6 h组下降更明显(P<0.01)；6 h组和12 h组SERPIN B1的表达量均高于N组(P<0.01),6 h组和12 h组差异无统计学意义(P>0.05)；6 h组和12 h组TCTP的表达量均显著高于N组(P<0.01),而6 h组和12 h组差异无统计学意义(P>0.05),3种蛋白的表达与前期蛋白质组学实验结果基本一致。结论：鲍曼不动杆菌脓毒症组大鼠中性粒细胞中 PRDX6、SERPIN B1和TCTP表达与正常组之间存在明显差异,PRDX6、SERPIN B1和TCTP可能会成为鲍曼不动杆菌脓毒症早期诊断和治疗的分子靶点。
关键词： 脓毒血症 鲍曼不动杆菌 氧化蛋白6 丝氨酸蛋白酶抑制剂B1 翻译控制肿瘤蛋白 -
华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)基因的鉴定及其编码区序列克隆
目的通过cDNA文库筛选识别华支睾吸虫新基因,并将所发现的华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白(csTCTP)编码区克隆到原核表达质粒PGEX-4T-1和真核表达质粒pcDNA3上,为进一步研究其功能奠定基础.方法将插入于pBluescript质粒上的cDNA进行随机测序,在NCBI和ExPasy网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用Motifsan、Scanprosite等程序对其进行结构域分析.根据PGEX-4T-1和pcDNA3上的克隆位点及所发现的csTCTPcDNA编码序列设计引物,进行PCR扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体PGEX4T-1和真核表达载体pcDNA3上.构建的PGEX4T-1-csTCTP、pcDNA3-csTCTP重组表达质粒经PCR、双酶切及测序证实.结果发现华支睾吸虫新基因--csTCTP,完整阅读框含510个碱基,编码169个氨基酸,理论分子量为19.4596 Kd.序列分析表明,csTCTP编码氨基酸序列与其它物种有较高的同源性,Motifscan及Scanprosite程序发现推导的氨基酸序列具有TCTP保守的完整功能域以及两个典型的TCTP完整标签.所构建的重组原核和真核表达质粒经PCR、双酶切及测序证实与目标基因相符.结论发现华支睾吸虫翻译控制肿瘤蛋白基因,并成功构建原核和真核重组表达质粒.
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翻译控制肿瘤蛋白在肿瘤靶向治疗中的分子作用机制及应用
翻译控制肿瘤蛋白（TCTP）是一种在多种生物中高度保守的小分子蛋白。TCTP 在多种肿瘤细胞中高表达，已被证明参与调控细胞凋亡、DNA 损伤与修复和耐药性形成等多种复杂功能。近年来，随着 TCTP 相关的分子作用机制不断被揭示，TCTP 已成为肿瘤靶向治疗中的新型重要药物靶点。
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TCTP mRNA在肝再生中的表达及其生物学意义
目的:探讨翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)mRNA在肝再生中的表达情况和生物学意义.方法:对健康成年雄性SD大鼠进行2/3部分肝切除以建立肝再生模型,分别于肝切除术后不同时间点收集再生肝组织,在显微镜下进行有丝分裂指数评价,利用流式细胞术分析细胞周期分布变化;半定量RT-PCR法检测TCTP mRNA的表达.结果:肝细胞有丝分裂指数在术后3～12 h明显升高.细胞周期分析显示,肝切除术后1 h呈现G0/G1向s期迁移,G2/M期细胞比例在3 h呈现升高,6 h升高为显著.TCTP mRNA的表达在肝切除术后1 h时轻微上调,在3～12 h呈显著升高,之后下降至初始水平.结论:在肝再生组织中TcTP mRNA表达呈动态变化,可能与有丝分裂和细胞增殖密切相关.
