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卡铂诱导的听神经病模型大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡因子的表达变化
目的 探讨卡铂(CBP)诱导的听神经病模型大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡倾向及地塞米松(DEX)的神经保护作用.方法 采用腹腔注射CBP制作听神经病模型.将SD大鼠随机分为3组,即生理盐水组(NS)、卡铂组(CBP)、地塞米松干预+卡铂组(DEX+ CBP),每组18只,并设3d及6d时间观察点.应用免疫组织化学方法观察各组大鼠脑干蜗神经核Caspase-3免疫反应性;RT-PCR技术检测凋亡酶激活因子1(Apaf-1) mRNA含量.结果 在3d及6d时间点,CBP组大鼠脑干蜗神经核腹侧核(VCN)及背侧核(DCN) Caspase-3免疫反应性及Apaf-1mRNA含量明显强于NS组及DEX+ CBP组(P＜0.05),DEX+ CBP组脑干蜗神经核VCN及DCN内Caspase-3免疫反应性及Apaf-1 mRNA含量与NS组差异无显著性(P＞0.05).而6d时间点CBP组蜗神经核Apaf-1 mRNA含量显示强于3d时间点.结论 卡铂诱导听神经损伤的同时,也可引起大鼠脑干蜗神经核细胞凋亡倾向,而地塞米松具有神经保护作用,减弱上述的凋亡效应.
关键词： 蜗神经核 听神经病 免疫组织化学 反转录-聚合酶链反应 大鼠 -
颅内感染巨细胞病毒小鼠听反应阈和蜗神经核细胞内游离钙及钙调素的变化
目的 观察新生小鼠颅内感染鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)后听性脑干反应(ABR)反应阈值的变化以及蜗神经核细胞内游离钙([Ca2+]i)和钙调素(calmodulin,CaM)的变化.方法 69只新生小鼠(出生24 h内)随机数字表法分为实验组和对照组,实验组(54只)经颅内注射MCMV悬液20μl,对照组(15只)颅内注射无菌生理盐水20μl.1个月后小鼠在麻醉状态下行ABR检测,并记录反应阈.测完反应阈后,麻醉处死小鼠,分离蜗神经核,流式细胞仪测定蜗神经核细胞内[Ca2+]i的荧光强度,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CaM mRNA的表达.比较实验组与对照组各检测指标的差异.结果 实验组小鼠ABR阈值[(84.5±2.7)dBSPL]高于对照组[(64.0±1.3)dBSPL],差异具有统计学意义(F=2.789,P =0.000).实验组小鼠蜗神经核[Ca2+]i浓度较对照组增高(F=1.290,P =0.000),CaM mRNA表达较对照组增多(F=4.252,P =0.023),差异均具有统计学意义.结论 颅内感染MCMV可以引起小鼠ABR阈值升高,蜗神经核细胞内[Ca2+]i及CaM mRNA表达的增高可能是MCMV感染导致感音神经性聋的机制之一.
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耳蜗毁损后小鼠听觉中枢的退行性改变
目的 观察双侧耳蜗损毁对小鼠听觉中枢蜗神经核群的影响.方法 40只健康成年BABL/c小鼠,随机数字表法分为对照组和实验组,每组20只.实验组小鼠在解剖显微镜下切除鼓室后壁,损毁双侧耳蜗.手术后第2天与4个月时进行听性脑干反应(ABB)测试.术后4个月处死小鼠,取脑组织进行脑干连续切片,通过尼氏染色和银染观察蜗神经核的腹侧前核、腹侧后核、背侧核、章鱼样细胞核群的形态变化.结果 术后第2天及4个月时实验组小鼠ABR测试未检测出反应波形.脑干切片实验组蜗神经核内各核群的体积均较对照组明显减少,其中腹侧前核下降22%,腹侧后核下降40%,背侧核下降24%.神经元数量也减少,其中腹侧前核下降25%,腹侧后核下降47%,背侧核下降39%.腹侧后核的章鱼样细胞群变化显著,细胞群体积下降达47%,神经元数量下降达60%,神经元面积下降19%.经Mann-Whimey U检验,P值均<0.05,差异具有统计学意义.结论经过4个月的听觉剥夺,成年小鼠蜗神经核出现以核群体积缩小、神经元数量减少为特征的退行性改变.
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声诱发短潜伏期负电位豚鼠模型的神经核团定位
目的 通过建立声诱发短潜伏期负电位(acoustically evoked short latency negative response,ASNR)豚鼠模型,直流电损毁前庭神经核或蜗神经核,验证ASNR的神经来源.方法 24只健康豚鼠采用随机数字表法分为两组,正常对照组8只(16耳),致聋组16只(32耳).致聋组应用卡那霉素和利尿酸联合致聋,根据ASNR引出与否又分为ASNR组和非ASNR组.对照组、ASNR组及非ASNR组按损毁核团不同又分为前庭神经核损毁组及蜗神经核损毁组.所有动物均分别进行前庭神经核及蜗神经核定位,直流电损毁神经核团,24 h后观察声诱发脑干电位的改变.处死动物后脑干标本经冰冻切片及染色,显微镜下验证损毁部位.结果 致聋组16只豚鼠(32耳)中10耳出现ASNR(31.3％).正常对照组豚鼠前庭神经核损毁后听性脑干反应(ABR)波形无明显改变,蜗神经核损毁后ABR仅余Ⅰ波.ASNR组中前庭神经核损毁组(7耳)ASNR均消失,而蜗神经核损毁组(3耳)ASNR均未消失;非ASNR组前庭神经核或蜗神经核损毁后ABR波形均无明显改变.脑干切片证实直流电破坏部位准确.结论 ASNR的责任神经核是前庭神经核,与蜗神经核无关.
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大鼠高胆固醇血症与听觉器官线粒体DNA4834缺失的关系
目的探讨大鼠高胆固醇血症对听觉器官线粒体DNA4834缺失以及听力下降的影响.方法 60只大鼠分为实验组(38只)和对照组(22只),实验组大鼠以高胆固醇饲料喂养,时间为6个月,建立高胆固醇血症大鼠模型;对照组则在相同条件下以普通饲料喂养.通过听性脑干电反应(auditory brainstem responses, ABR)检查实验前后ABR阈上升程度.取左侧耳蜗(实验组21个,对照组10个)和左侧蜗神经核(实验组27个,对照组13个),提取DNA,通过套式聚合酶链反应(nest polymerase chain reaction,nest PCR)扩增检测听觉器官线粒体DNA4834(mitochondrial DNA, mtDNA4834)缺失,比较两组动物的ABR阈上升程度和听觉器官的mtDNA4834缺失率并进行统计分析.结果①高胆固醇饲料喂养可造成实验组大鼠血清胆固醇水平明显升高(t检验,P<0.05);②两组大鼠随年龄增加ABR阈均上升,高胆固醇血症大鼠的ABR阈上升更加明显,和对照组的差异具有显著性(t检验,P<0.05);③所有标本都扩增到正常mtDNA编码tRNA和NADH基因,实验组听觉器官mtDNA4834缺失发生率较对照组明显增高,其差异具有显著性(χ2检验,P<0.05).结论长期高胆固醇血症可以加剧大鼠的听力下降,听觉器官mtDNA4834缺失可能是其作用机制之一.
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老年大鼠耳蜗核乙酰胆碱受体的表达
分别自青年和老年大鼠耳蜗核提取多聚腺嘌呤信使核糖核酸(mRNA),注入非洲爪蟾卵母细胞表达有功能的乙酰胆碱(ACh)受体,利用电压钳方法记录ACh受体电流.在注射老年大鼠耳蜗核mRNA的卵母细胞膜上记录到ACh受体电流大幅度＜青年组(P<0.05).推论移植的老年大鼠耳蜗核ACh受体功能的下降可能与老年性聋的发病有关.
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不同月龄小鼠蜗神经核中甲基化CpG结合蛋白2的表达及临床意义
目的 探讨年龄相关性听力减退小鼠蜗神经核中甲基化CpG结合蛋白2(MeCP2)的表达差异及临床意义.方法 分别取3、6、12、18月龄BALB/c小鼠测定其听性脑干反应阈值,应用半定量逆转录多聚酶链反应方法,检测3、6、12、18月龄鼠蜗神经核中MeCP2的表达.结果 3、6、12月龄鼠8 kHz听阈分别为(24.8±5.1)、(51.5±6.7)和(92.5±7.5)dB SPL,18月龄组120 dB SPL刺激声无诱发反应.MeCP2在各组小鼠蜗神经核中均有表达,随着月龄增加MeCP2呈下降趋势,各组间差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 MeCP2在年龄相关性听力减退小鼠蜗神经核中的表达水平呈增龄相关性降低,可能与蜗神经核的老化及老年性耳聋的发生有关.
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庆大霉素对豚鼠蜗核影响的实验研究
目的观察庆大霉素(gentamicin,GM)耳中毒豚鼠蜗核听神经元的变化.方法 60只豚鼠随机分为正常对照组,GM 1 d、3 d、1 w、2 w及3 w模型组,用免疫组化方法探讨GM对蜗核P物质(Substance P,SP)免疫反应神经元的胞体截面积及细胞数的影响.结果发现GM 100 mg@kg-1@d-1腹腔注射后24 h,豚鼠蜗核SP样神经元胞体截面积立即发生了变化,并持续到连续注药第21 d;SP样神经元细胞数量的变化发生在注药3 d以后.结论①GM中毒豚鼠蜗核神经元的变化和耳蜗的病变可能同时发生或早于耳蜗病变.②临床上治疗氨基甙类抗生素所致耳聋应兼治中枢病变并尽早实施.
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老龄大鼠听功能下降与线粒体DNA4834bp缺失突变的关系
目的 探讨大鼠老年性耳聋与听觉器官线粒体DNA4834bp缺失突变的关系.方法 取SD大鼠按年龄随机分为对照组(3个月龄)与观察组(24个月龄),各10只.分别对2组大鼠进行听性脑干反应(ABR)测试听阈,采用PCR技术检测大鼠内耳耳蜗及蜗神经核组织线粒体DNA4834bp缺失突变情况,应用凝胶酶切电泳技术证实线粒体DNA缺失突变的存在.结果 对照组大鼠ABR平均听阈为(19.50±3.69)dB peSPL,观察组大鼠ABR平均听阈(46.00±3.94)dB peSPL,两组差异有统计学意义(P<0.05).线粒体DNA大片段缺失检出情况:对照组大鼠内耳组织及蜗神经核未发现线粒体DNA4834bp缺失,观察组大鼠内耳组织线粒体DNA4834bp缺失突变检出率为90.0％,脑蜗神经核线粒体DNA4834bp缺失检出率为100％.结论 老龄大鼠听觉器官(内耳组织和蜗神经核)线粒体DNA4834bp缺失突变检出率高,这种大片段缺失与老龄大鼠听功能下降密切相关.
关键词： 缺失突变 线粒体DNA4834bp 老年性耳聋 内耳 蜗神经核 -
糖尿病大鼠蜗神经核和上橄榄核形态变化与BAEP的关系
目的研究糖尿病大鼠脑干听觉诱发电位(brainstem auditory evoked potential,BAEP)和蜗神经核、上橄榄核形态学的变化.方法采用腹腔注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,动态观测BAEP变化,并结合BAEP起源,应用光镜对脑干蜗神经核、上橄榄核进行形态学观察.结果成模后4周实验性糖尿病(ED)组BAEP的Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ波PL和Ⅰ-Ⅲ、Ⅲ-Ⅴ延长(P＜0.05),成模6周,ED组BAEP各波PL、IPL均出现明显延长(P＜0.01).成模8周糖尿病大鼠出现脑干蜗神经核、上橄榄核神经元胞体萎缩、胞核内结构不清等表现,成模10周后糖尿病大鼠上述核团神经元变性明显,并伴有神经元减少.结论 BAEP在糖尿病早期出现变化且早于中枢形态学变化,是临床早期诊断糖尿病中枢神经病变的客观灵敏指标.
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庆大霉素中毒豚鼠蜗核SP免疫反应阳性神经元的变化
用免疫组化方法探讨庆大霉素耳中毒时蜗核SP免疫反应神经元的胞体截面积及细胞数的变化.结果发现庆大霉素100mg.kg-1.d-1腹腔注射后1d,豚鼠蜗核SP样神经元胞体截面积立即发生了变化,并持续到连续注药第21天;SP样神经元细胞数量的相对变化发生在注药3d以后.结果提示:①庆大霉素中毒豚鼠蜗核神经元的变化和耳蜗的病变可能同时发生或蜗核早于耳蜗病变.②临床上治疗氨基甙类抗生素所致耳聋应兼治中枢病变并尽早实施.
