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高压力对体外培养动脉中膜平滑肌细胞凋亡及其相关蛋白的影响
目的观察血管平滑肌细胞在单纯高压力作用下凋亡及其相关蛋白Bcl-2和Bax的变化,探讨力学因素在血管重建中的作用.方法应用血管体外应力培养系统,分别在压力100mmHg和160mmHg条件下培养猪颈总动脉1、4和7 d,新鲜血管为对照.应用TUNEL法、透射电镜等观察血管平滑肌细胞的凋亡;用免疫组织化学方法检测血管平滑肌细胞内Bcl-2和Bax的表达.结果高压力作用下,血管平滑肌细胞凋亡第1 d较多,而后逐渐减少;Bcl-2蛋白表达持续增强;Bax蛋白第1 d较多,而后逐渐减少.结论高压力可以影响血管平滑肌细胞的凋亡,凋亡相关蛋白Bcl-2持续增加,Bax先增加后减少,揭示高压力可能通过调节Bcl-2和Bax来调控血管平滑肌细胞的凋亡.
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成骨细胞中 Caspase 蛋白和 Bcl－2蛋白在绝经后骨质疏松症发病机理中的作用
目的：探讨半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase）－3、Caspase－9、B细胞淋巴瘤－2（Bcl－2）蛋白对绝经后骨质疏松症发病机理的影响。方法2012年1月至2012年12月期间收集广州医科大学附属第一医院老年病科住院的需行髋关节置换手术的女性绝经期患者20例，分为骨质疏松症组与对照组，每组各10例。术中取下股骨头或股骨颈中松质骨，分别进行成骨细胞的体外培养，通过酶联免疫吸附试验（ ELISA）方法检测两组患者成骨细胞中Caspase－3、Caspase－9、Bcl－2蛋白表达情况。两独立样本均数比较采用t检验，方差不齐的采用秩和检验。结果与正常对照组比较，骨质疏松症组患者的成骨细胞中Caspase－3（11．0±1．5 pmol／L）、Caspase－9（10．9±1．7 pmol／L）的表达水平均较高，差异均有统计学意义（Caspase－3：t＝5．76，P＜0．05；Caspase－9：t＝4．47，P＜0．05）；而骨质疏松症组患者的成骨细胞中Bcl－2（1．3±0．5 ng／ml）低于正常对照组，差异有统计学意义（ t＝2．43，P＜0．05）。结论在骨质疏松症的成骨细胞凋亡过程中，Caspase依赖性凋亡途径激活，而Bcl－2途径受到抑制，二者可能参与了绝境后骨质疏松症的发病机理。
关键词： 骨质疏松症 成骨细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 Bcl-2 蛋白 人 -
蝙蝠葛酚性碱对小鼠脑缺血-再灌注脑组织 Bax和Bcl-2 蛋白表达的影响
目的研究蝙蝠葛酚性碱对小鼠脑缺血-再灌注后脑组织凋亡相关蛋白表达的影响.方法采用免疫组织化学方法观察凋亡促进蛋白 Bax、凋亡抑制蛋白 Bcl-2 的表达.结果皮质于缺血复灌 12 h、海马 CA1 区于缺血复灌 24 h Bax 表达明显增多,Bcl-2 表达明显减少,蝙蝠葛酚性碱预防给药能抑制脑组织 Bax 的表达,并促进 Bcl-2 表达,减少脑细胞凋亡.结论蝙蝠葛酚性碱能抑制缺血-再灌后脑组织损伤,使凋亡细胞减少,对脑缺血有一定的保护作用.
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凋亡调节蛋白在蛋白磷酸酶抑制剂所诱导的大鼠脑神经细胞退化中的表达分析
目的:在体内水平探讨凋亡调节蛋白Bcl-2/Bax在蛋白磷酸酶抑制剂冈田酸所致的神经细胞退化中的表达情况及其影响.方法:采用大鼠脑皮质定位注射冈田酸的模型,应用免疫组化染色法检测冈田酸所诱导的Bcl-2和Bax蛋白表达情况,用图像分析技术和光学显微镜测微网格分别计数Bcl-2和Bax免疫阳性细胞.结果:Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑额叶皮质有广泛性的基础表达,冈田酸能特异性诱导Bcl-2和Bax蛋白高表达,相邻平面脑片的Bcl-2免疫阳性细胞的分布范围和细胞数目大于和多于Bax免疫阳性细胞.结论:冈田酸诱导凋亡相关调节蛋白Bcl-2和Bax高表达,提示Bcl-2/Bax相关凋亡调节机制参与冈田酸所致神经细胞退化过程;Bcl-2阳性细胞的分布范围和细胞数目大于和多于Bax阳性细胞,提示神经细胞可能存在内在抗损伤机制增加对冈田酸所致损伤的耐受性.
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阿托伐他汀对同型半胱氨酸作用下人脐静脉内皮细胞Bcl-2启动子区甲基化水平的影响及其抗动脉粥样硬化机制
目的：探讨阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）作用下人脐静脉内皮细胞（HUVECs）Bcl-2基因启动子区甲基化水平及其表达的影响，阐明阿托伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）的可能机制。方法：HUVECs分别采用含有0、2、4、8、16和32 mmol·L-1 Hcy的 RPMI 1640培养液作用48 h，采用 MTT实验检测细胞增殖抑制率及半数抑制浓度（IC50），根据 IC50结果将本实验分为对照组（0 mmol · L-1 Hcy ）、Hcy 组（9.00 mmol·L-1 Hcy）、阿托伐他汀组（9.00 mmol·L-1 Hcy＋1×10-3 mmol·L-1阿托伐他汀）。各组细胞培养48 h后，流式细胞术检测细胞凋亡率，荧光定量 PCR法检测 Bcl-2基因的 mRNA表达，Western blotting 法检测Bcl-2蛋白表达水平，甲基化特异性 PCR（MSP）联合巢式降落式 PCR法检测 Bcl-2启动子区甲基化水平。结果：与对照组比较，Hcy组细胞凋亡率上升（P＜0.01），Bcl-2基因 mRNA及蛋白表达水平下降（P＜0.01）， Bcl-2基因启动子区甲基化水平降低（P＜0.01）；与 Hcy组比较，阿托伐他汀组内皮细胞凋亡率下降（P＜0.01）， Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平增加（P＜0.05），Bcl-2基因启动子区甲基化水平升高（P＜0.05）。结论：阿托伐他汀可通过调节 Hcy作用下的 HUVECs Bcl-2基因甲基化水平抑制细胞凋亡。
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尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑神经元的保护作用及其机制
目的：探讨尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑神经元的保护作用及其对 Bax和 Bcl-2蛋白表达的影响并阐明其作用机制。方法：30只雄性 Wistar 大鼠随机分为假手术组、模型组和尼莫地平组，每组10只。采用线栓法堵塞大鼠大脑中动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。缺血2 h再灌注2 h后进行神经功能学评分。之后断头取脑，应用TUNEL染色及 SP免疫组织化学方法观察脑组织梗死情况并检测 Bax和 Bcl-2蛋白的表达水平。结果：与模型组比较，尼莫地平组大鼠脑组织凋亡细胞数明显减少（P＜0.05）， Bax蛋白表达水平减少（P＜0.05），Bcl-2蛋白表达水平增加（P＜0.05）。形态学观察，模型组大鼠脑细胞坏死严重，水肿明显；尼莫地平组大鼠脑组织坏死细胞数减少，水肿情况有所改善。结论：尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织具有保护作用，其作用可能是通过下调Bax和上调Bcl-2相关蛋白表达从而抑制脑神经元凋亡实现的。
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乌司他丁对体外循环下心脏瓣膜置换术患者心功能及心肌细胞凋亡的影响
目的：评价乌司他丁对体外循环（CPB）下心脏瓣膜置换术患者心功能及心肌细胞凋亡的影响。方法选择择期全身麻醉 CPB 下行心脏瓣膜置换术患者80例，NYHA 心功能和 ASA 分级为Ⅱ—Ⅲ级。采用随机数字表法将80例患者分为乌司他丁组（U 组，n＝40）和生理盐水对照组（C 组，n＝40）。U 组于主动脉开放前5 min 自主动脉根部灌注乌司他丁4000～5000 U·kg－1·min－1（剂量10000 U·kg－1）；C 组给予等容量生理盐水。观察2组患者的心功能，记录多巴胺及肾上腺素用量，另于升主动脉开放后45 min 时取右心耳心肌组织，并检测 Bax、Bcl-2蛋白的表达和心肌细胞凋亡情况，计算 Bcl-2与 Bax 比值（Bcl-2／Bax）及凋亡指数（AI）。结果与 C 组比较，U 组主动脉开放3～5 min 的心脏自动复跳率升高，心律失常评分、多巴胺及肾上腺素用量减少，Bax 蛋白表达下调， Bcl-2蛋白表达上调，Bcl-2／Bax 升高，AI 降低（均 P ＜0．05）。结论乌司他丁通过促进 Bcl-2／Bax 通路减轻 CPB下心脏瓣膜置换术患者心肌细胞的凋亡，同时患者心功能也得到改善。
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封闭式引流对艾滋病患者创面组织 Bax和Bcl－2蛋白表达的影响
目的：研究封闭式负压引流术（VAC）治疗艾滋病病人感染创面的 Bax 和 Bcl-2蛋白变化。方法40例艾滋病人分为VAC 治疗组和对照组，对照组感染创面采用常规换药治疗方法，VAC 治疗组感染创面采用VAC 治疗方法。观察两组病人创面治疗效果，免疫组化检测感染创面细胞的Bax 和Bcl-2蛋白表达。结果 VAC 治疗的病人创面愈合效果优于普通换药的病人，其中显效17例，有效2例，1例无效；对照组显效3例，有效14例，3例无效，两组有效病例差异具有统计学意义。两组患者治疗前Bcl-2蛋白阳性的细胞数接近（P＞0．05），其干预治疗后第3、7、14天为6±1．5／HP、10±2．3／HP、14±2．7／HP、15±3．2／HP，高于对照组的5±1．2／HP，6±2．1／HP，6±1．8／HP，7±0．9／HP。同样，两组患者治疗前的 Bax 蛋白阳性细胞数比较无统计学差异，但第3、7、14天，VAC 治疗组感染创面 Bax 蛋白阳性的细胞数分别14±3．2／HP，13±3．5／HP，10±3．1／HP，5±1．2／HP，均显著低于对照组病人的13±2．8／HP、12±3．2／HP、11±3．1／HP、10±2．5／HP（P＜0．05）。结论 VAC 能够促进艾滋病感染创面的愈合，其机制可能与下调 Bax 和 Bcl-2蛋白表达抑制细胞凋亡有关。
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WWOX蛋白及Bcl-2蛋白在支气管肺癌中的表达及临床意义
目的：探讨 WWOX蛋白及Bcl-2蛋白在支气管肺癌（primary lung cancer）组织的表达及临床意义。方法选取陕西省人民医院2010～2015年手术切除并经病理证实的原发性支气管肺癌标本76例，其中肺鳞癌29例，肺腺癌27例，肺小细胞癌20例。正常对照组为7例癌旁正常肺组织和8例肺结核球。采用免疫组化 SP（streptavidin-perosidase）法检测 WWOX蛋白和Bcl-2蛋白在支气管肺癌组织和癌旁5 cm以上正常肺组织中的表达情况，分析患者与正常对照组间水平差异及性别、年龄、肺癌组织病理类型、分化程度、临床分期、有无淋巴结转移、吸烟指数对 WWOX蛋白和 Bcl-2蛋白表达的影响。结果①肺癌组的 WWOX蛋白阳性表达率（35.52％）明显低于癌旁正常肺组织组（73.33％，P＜0．05），肺癌组的Bcl-2蛋白阳性表达率（78.06％）明显高于癌旁正常对照组（23.75％，P＜0.05）。②男性患者中 WWOX蛋白阳性表达率（21.43％）明显低于女性患者（52.94％），差异有统计学意义（χ2＝8.146，P＝0.04）。男性患者中 Bcl-2蛋白阳性表达率（71.43％）明显高于女性患者（35.29％），差异有统计学意义（χ2＝9.923，P＝0.002）。③有淋巴结转移的肺癌组织中， WWOX蛋白阳性率（17.07％）明显低于无淋巴结转移组织（48.57％），差异有统计学意义（χ2＝8.67，P＝0.003）。有淋巴结转移的肺癌组织中，Bcl-2蛋白表达阳性率（68.29％）明显高于无淋巴结转移者（34.28％），差异有统计学意义（χ2＝8.758，P＝0.003）。④WWOX蛋白表达阳性率在吸烟指数≥400的患者中为15.63％，明显低于吸烟指数＜400的患者（47.73％），差异有统计学意义（χ2＝8.48，P＝0.003）。在吸烟指数≥400的患者中，Bcl-2蛋白表达阳性率为56.25％，明显高于吸烟指数＜400的患者（22.73％），差异有统计学意义（χ2＝8.947，P＝0.003）。⑤肺癌患者的年龄及肺癌组织病理类型、分化程度、临床分期对 WWOX蛋白和Bcl-2蛋白的阳性表达率的影响差异均无统计学意义（P＞0．05）。⑥WWOX蛋白与Bcl-2蛋白的表达呈负相关。结论在原发性支气管肺癌组织中 WWOX蛋白低表达，Bcl-2蛋白高表达，两者表达呈负相关。
