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中国6省2005年麻疹病毒分离株分子特征分析
研究2005年我国6省麻疹暴发、流行的野毒株基因型特征和分子流行病学,为进一步的麻疹防治策略提供科学依据.用RT-PCR方法,从2005年6省分离的48株麻疹病毒株中扩增出核蛋白(nucleoprotein, N)基因C末端676个核苷酸片段.再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.6省分离的48株麻疹病毒均为H1基因型,其中两株为H1b亚型, 其余为H1a亚型.48株野毒株的核苷酸同源性为95.1%～100%(核苷酸差异为0～22bp),氨基酸同源性为92.7%～100%;与我国疫苗株S191的核苷酸同源性为88.7%～92.5%,氨基酸同源性为88.0%～91.2%.其中Shaanxi05-1和Yunnan05-1,Anhui05-2和Ningxia05-9的N末端456个核苷酸的同源性为100%;Hebei05-19、Anhui00-2和Liaoning02-2,Hebei05-1和Chongqing04-3的核苷酸的同源性为100%.引起2005年我国6省麻疹暴发流行的野毒株为H1基因型,并以H1a为绝对优势亚型.各省之间存在相同毒株引起的传播链,不同年份之间存在相同麻疹野毒株的持续循环传播.同时提示,有必要进一步研究由核苷酸变异引起的氨基酸变异及中和抗原位点等生物学性状的改变,可能影响麻疹病毒的毒力和传播力.
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辽宁省2001～2006年麻疹野病毒分离株基因特征分析
目的 了解辽宁省2001～2006年流行的麻疹野病毒的基因特征,为消除麻疹提供依据.方法 用B95a和Vero/Slam细胞从麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹野病毒,用逆转录-聚合酶链反应扩增麻疹野病毒分离株的核蛋白(N)基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.并以N基因羧基末端450个核背酸片段构建基凶亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析.结果 辽宁省2001～2006年共分离到93株麻疹野病毒,38株经过测序后均为H1基因型的H1a基因亚型.38株麻疹野病毒450个核苷酸差异为0%～4.8%,与H1基因型代表株Chin 93-7的差异为1.5%～5%,与H1a基因亚型的代表株Chin 9322同源性为96%～99.5%.结论 辽宁省2001～2006年流行的麻疹野病毒以H1a为优势基因亚型.
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中国2003年流行的麻疹野病毒分子流行病学分析
目的为了解不同省(自治区、直辖市,下同)2003年流行的麻疹野病毒是否存在基因型或亚型的差异.方法对2003年15个省分离的107株麻疹病毒进行了分子流行病学研究,对同一年份不同省流行的麻疹野病毒的基因特征及分子差异做了进一步的分析.用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcript polymerase chain reaction,RT-PCR)从107株麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因羧基(COOH)末端450个核苷酸片段.通过对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,构建基因亲缘性关系树,进行遗传距离分析.结果106株为麻疹病毒H1基因型;1株属于A基因型,为沪191(S191)疫苗株.106株H1基因型毒株分成2个亚型,101株为H1a,5株为H1b基因亚型.2003年H1b亚型主要流行于海南、四川、上海、贵州省;而H1a在全国广泛分布;未发现H1c基因亚型,该亚型1993～1994年曾是北京、山东、河北、湖南省流行的优势毒株.对比2003年与1993～2002年流行的麻疹病毒基因亚型,H1a呈上升趋势,H1b亚型在所有H1基因型中的比例由1995～2002年的24.3%下降到2003年的4.7%,而H1c亚型逐渐消失.对2003年分离的病毒进行省内和不同省间遗传距离的比较证明,各省内的毒株变异范围在0%～6.1%(0～27个核苷酸差异);各省间的变异范围在0%～4.3%(0～20个核苷酸差异);省内差异大值大于省间差异.结论中国近11年来流行的麻疹病毒基因亚型趋势为:H1a呈上升趋势,逐渐成为优势亚型;H1b亚型逐年降低转为弱势;H1c亚型逐渐消失.2003年麻疹变异毒株呈散在分布,无明显地域性.同时表明,中国的麻疹流行是由H1a和H1b中的许多不同病毒株造成的多个传播链引起的.讨论了在中国继续开展麻疹病毒分子流行病学监测的必要性和紧迫性,并展望了分子流行病学监测对于中国控制和消除麻疹的应用前景.
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四川省2003～2005年麻疹野病毒分离株基因特征分析
目的 了解四川省2003～2005年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据.方法 用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从分离到的22株麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.结果 四川省2003～2005年从6个市(自治州,下同)分离的22株麻疹野病毒全部为H1基因型,除2株为H1b基因亚型外,其余均为H1a基因亚型.22株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%～100.0%,氨基酸同源性为95.3%～100.0%.四川省11株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为90.0%～92.5%,氨基酸同源性为86.7%～91.6%.结论 四川省2003～2005年流行的麻疹野病毒以H1a为绝对优势基因亚型,H1b为弱势基因亚型,未发现H1c基因亚型.其中以H1a基因亚型为主的病毒株引起的多个传播链造成四川省各市的麻疹流行.
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Vero/Slam细胞在麻疹病毒分离中的应用
目的 评价Vero/Slam细胞对麻疹病毒的敏感性,以及麻疹病毒在Vero/Slam细胞上的生长特点.方法 组织细胞培养法分离病毒,将标本接种到长满单层的Vero/Slam细胞上,盲传3代,观察细胞病变(CPE).将分离到的麻疹病毒通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增出核蛋白(N)基因碳末端450个核苷酸片段,对其产物测定基因序列以定型.结果 Vero/Slam细胞对麻疹病毒高度敏感,其CPE特点是典型的细胞融合性病变.此次分离到的麻疹病毒为H1基因型,和中国的本土优势流行株相符.结论 Vero/Slam细胞对麻疹病毒敏感,可在麻疹病毒分离中选用.
关键词： Vero/Slam细胞 细胞培养 麻疹病毒 H1基因型 -
山东省2005～2008年麻疹病毒流行特征分析
目的 了解山东省2005～2008年麻疹病毒(Measles Virus,MV)流行特点及麻疹发病关系.方法 用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对分离的155株MV进行扩增,并对PCR产物进行序列测定和分析.结果 山东省2005～2008年分离的155株MV有2个基因型:A(1株)、H1(154株).A基因型病毒株(2007年)为疫苗株;H1 基因型有H(1a)(151株)和H(1b)(3株)亚型,两个亚型病毒株的核苷酸、氨基酸差异分别为3.30%～5.90%、2.00%～7.30%.H(1a)是山东省本土流行病毒株的优势亚型,但与山东省1990-2004年毒株相比,病毒株传播分支较多、离散程度大.H(1b)业型为外来输入病毒株(与山东省2000年分离的H(1b)亚型核苷酸同源性为98.20%～98.60%),与本土H(1a)亚型毒株共同传播引起一起成人流动人群麻疹爆发.结论 山东省2005～2008年麻疹爆发、流行是由本土病毒株(H(1a)亚型)持续传播引起.H(1b)亚型处于相对弱势,在2005年输入部分设区的市后被阻断.近年来山东省流行的麻疹病毒无较大变异,优势病毒的持续传播与麻疹的发病有密切联系.
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麻疹野病毒H1基因型在中国流行的分析
为确定现阶段中国流行的麻疹野病毒本土基因型别,在1995～2002年用EB病毒转化的狨猴淋巴母细胞(B95a细胞)从河南、山东、安徽、上海等19个省(自治区、直辖市,下同)的麻疹爆发和散发病人的咽喉拭子或尿液标本中分离到麻疹病毒156株.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从156株麻疹病毒中扩增出核蛋白(N)基因碳末端450个核苷酸片段.通过对扩增产物的核苷酸序列测定和分析证明,154株为麻疹病毒H1基因型;2株属于A基因型,为沪191疫苗株.由此证实,H1基因型已在中国广泛流行,为中国麻疹病毒的优势基因型.H1是麻疹病毒型内变异大的基因型.这154株H1基因型麻疹病毒,除外Shanxi00-6和Hunan95-23株,可进一步划分为H1a和H1b两个亚组.H1a的450个核苷酸和H1b的差异在2.00%～4.00%.H1基因型的450个核苷酸和A基因型代表株Edmonston的基因差异在6.00%～7.33%;与H2基因型代表株China94-1的基因差异在5.11%～7.56%;与其它17个基因型代表株的大差异在11.56%.在中国开展麻疹病毒监测和建立麻疹病毒毒株库及基因数据库,对加速麻疹控制及未来消除麻疹都十分必要.
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山东省麻疹病毒流行株分子生物学特征分析
目的 了解山东省1999～2005年麻疹野病毒的分子生物学特征以及野病毒基因型别的分布和变异趋势.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对分离的麻疹野病毒(36株)的核蛋白N基因C末端456个核苷酸片段扩增后进行序列分析,与中国H1基因型代表株、疫苗株(S191株)及世界卫生组织其它基因型代表株构建基因亲缘性关系树,并进行核苷酸、氨基酸的同源性分析.测定野病毒的血凝及血吸附特性.用酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体捕获法检测IgM抗体.结果 36株麻疹野病毒均为H1基因型,其核苷酸、氨基酸同源性分别为96.6%～100.0%、96.0%～100.0%,在基因关系树上有两个大的分支,分为H1a、H1b两个基因亚型;与S191株核苷酸、氨基酸同源性分别为91.0%～91.4%、88.7%～89.4%.以H1a亚型为主,在基因关系树上有多个分支;H1b亚型相对弱势,但有两个大的分支(2000年、2005年).所有野病毒对敏感猴血球均无血凝及血吸附特性.结论 山东省1999～2005年流行的麻疹野病毒为H1基因型,有H1a、H1b两个基因亚型.H1a是1999～2005年麻疹流行的优势基因亚型.曾在山东省分离到的A基因型、H1c基因亚型已被阻断.在流行过程中病毒未发现有较大变异,但野病毒间存在一定的遗传距离,呈现多个传播链的流行.病毒的多个传播链被阻断,同一病毒持续流行的情况大为减少.
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中国流行的麻疹病毒基因型和亚型趋势分析
目的 分析中国(未包括香港、澳门特别行政区和台湾地区)1993～2006年本土麻疹病毒基因型和基因亚型的流行趋势.方法 依据全国麻疹实验室网络监测数据库、中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家麻疹实验室病毒学监测数据库,分析中国麻疹病毒分子流行病学资料.结果 1993～2006年,从29个省(自治区、直辖市,下同)分离到748株麻疹病毒,其中743株为H.基因型,1株为H2基因型,1株为A基因型,3株为疫苗相关A基因型.在H1基因型中,684株为H1a基因亚型,50株为H1b基因亚型,9株为H1c基因亚型.从29个省分离到H1a基因亚型(西藏、湖北省未开展),H1b基因亚型只从10个省分离到,H1c基因亚型在1993～1994年从4个省分离到.自2000年以来,H1a基因亚型逐年成为优势流行亚型,并呈上升趋势;H1b基因亚型逐年转为弱势,其传播于2006年被阻断;而H1c基因亚型的流行自1995年已经消失.结论 通过对1993～2006年中国29个省流行的麻疹病毒分子流行病学的系统研究,阐明了在麻疹控制和加速控制阶段中国流行的麻疹野病毒的基因变异规律,以及病毒基因型别在地域和年代上的分布,证实H1基因型是中国近14年麻疹病毒流行的绝对优势本土基因型,其中H1a逐渐成为中国近几年流行的绝对优势基因亚型.
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云南省麻疹野病毒不同基因型的流行分布状况
目的 了解云南省麻疹野病毒不同基因型的流行分布状况.方法 用B95a细胞[Epstein-Barr( EB) Virus-Transformed,Marmoset B Lymphoblastoid Cell Line；埃泼斯坦-巴尔病毒转化的绒猴淋巴母细胞]和Vero/SLAM细胞[ Vero Cell Transfected to Express the Human Signaling Lymphocyte Activation Molecule (SLAM),淋巴信号激活因子转染的非洲绿猴肾细胞]从麻疹爆发和散发患者的标本中分离麻疹野病毒,用逆转录-聚合酶链反应扩增核蛋白(Nucleoprotein,N)基因羧基末端的676个核苷酸片段,对扩增产物进行核苷酸序列测定.并以N基因羧基末端450个核苷酸序列构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析.结果 云南省2004～2011年共分离和检测到46株麻疹病毒及2株病毒核酸,43株为H1基因型,分布于14个县(区)及四川省普格县;4株为d11基因型,分布于边境孟连县及缅甸的班康市；1株为A基因型,来自龙陵县.结论 麻疹病毒H1基因型是云南省优势本土基因型,d11基因型是从缅甸输入后连续两年于缅甸接壤的地区发现的麻疹野病毒,A基因型为中国沪191疫苗株相似株.
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乌鲁木齐成人麻疹病毒基因特征分析
目的 分析新疆乌鲁木齐市2008年成人麻疹爆发流行的麻疹野病毒的基因特征.方法 用Vero/slam细胞从成人麻疹暴发患者的标本中分离出麻疹野病毒,应用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)对麻疹野病毒分离株扩增核蛋白N基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.并以N基因羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析.结果 首批共分离到5株麻疹野病毒,这些病毒N基因450个核苷酸之间的差异为0%～0.2%,均为H1基因型中的Hla基因亚型.结论 引起新疆乌鲁木齐市2008年成人麻疹流行的麻疹野病毒为Hla基因亚型.
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青海省2011年麻疹病毒基因型分析
目的 分析西宁市2011年麻疹病毒流行株的基因特征.方法 用Vero/slam细胞从发热伴出疹病例的咽拭子标本中分离出麻疹病毒,采用逆转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction- Restriction Fragment Length Polymorphism,RT - PCR - RFLP)方法 ,检测毒株.结果 应用H1基因型麻疹野病毒RT - PCR - RFLP方法 ,对麻疹毒株进行鉴定,其RT - PCR阳性产物经Sal I酶切后被切成2个片段,分别为408个和159个核苷酸,显示该病例由H1基因型麻疹病毒引起.结论 2011年分离到的5株麻疹毒株均为H1基因型麻疹病毒,与中国其它地区的流行情况一致,无新型及传人性的其它亚型出现.
关键词： 麻疹病毒 限制性片段长度多态性分析 H1基因型 -
北京市西城区2013年麻疹病毒H1基因型的流行情况分析
目的 为了加强麻疹病毒基因型的监测,2013年北京市开展了麻疹病毒的核酸检测.方法 采用荧光PCR方法进行病毒核酸鉴定,然后对于核酸阳性标本进行RT-PCR(Reverse Transcription PCR,RT-PCR)扩增,扩增产物进行测序及序列比对分析.结果 2013年北京市西城区共采集麻疹疑似病例为41例,获得RT-PCR产物21例,经过序列分析比对,有16例为H1基因型.本研究获得的16例H1基因型的麻疹病毒基因片段序列与世界卫生组织H基因型代表株MVi/Hunan.CHN/0.93/7/H1,在基因亲缘性关系树上同属一个分支,核苷酸同源性为97.1％～ 97.6％,氨基酸同源性为95.3％ ～ 98.0％.结论 2013年北京市麻疹病例明显增多,以本土基因型病例为主,进一步加强麻疹病例控制和预防,对于实现消除麻疹的计划具有重要意义.
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2014年北京市西城区40例麻疹患者分离的麻疹病毒基因型及同源性
目的：了解北京市某城区2014年分离的麻疹病毒基因型，及时发现输入性麻疹病例。方法采用荧光聚合酶链反应（PCR）方法，对北京市西城区2014年采集的标本进行病毒核酸鉴定、RT-PCR 扩增，扩增产物进行测序及序列比对分析。结果2014年北京市西城区共采集81例麻疹疑似患者的82份标本，其中咽拭子63份，尿19份。麻疹病毒核酸检测阳性70例，RT-PCR 扩增、测序获得基因序列40份，麻疹病毒培养阳性毒株37例。种系进化树分析显示，获得的40份麻疹病毒基因序列与 H 基因簇代表株 Chin9322／H1a，以及世界卫生组织推荐的代表株 MVi／Hunan．CHN／0．93／7／H1在同一分支上，核苷酸水平上同源性分别为98％～98．9％、96．9％～97．8％；氨基酸水平上同源性分别为97．3％～99．3％、95．3％～98％。结论2014年北京市西城区麻疹病例以本土基因型（H1）病例为主，进一步加强麻疹病例病原学监测对麻疹输入性病例的控制和预防具有重要意义。
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乌鲁木齐市11株麻疹野病毒基因特征分析
目的 分析新疆乌鲁木齐市2008年流行的11株成人麻疹野病毒的基因特征.方法 用Vero/slam细胞从成人麻疹暴发患者的标本中分离出麻疹野病毒,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对麻疹野病毒分离株扩增核蛋白N基因羧基末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.并以N基因羧基末端450个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸变异分析.结果 共分离到11株麻疹野病毒,这些病毒N基因450个核苷酸之间的差异为0%～0.2%,均为H1基因型中的Hla基因亚型.11株麻疹野病毒与H1基因型代表株(chin9372)的核苷酸和氨基酸差异分别为2.2%～2.4%之间和4.0%～4.6%之间.结论 2008年新疆乌鲁木齐流行的成人麻疹野病毒为Hla基因亚型.
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海南省麻疹野病毒的分离与血清学初步研究
目的为了解海南省麻疹暴发病例中,现行麻疹野病毒流行状况,以及本土麻疹病毒的基因型.方法采集麻疹疑似病例咽试子标本,应用B95a细胞进行病毒分离培养.结果在5例疑似病例中分离到2株麻疹病毒,阳性率为40%.经RT-PCR和其产物的基因序列分析,属H1基因型,为中国本土麻疹野毒株.同时采用麻疹疫苗初免儿童血清中和新分离麻疹病毒,结果中和抗体滴度为1:10、1:20,说明我国生产的麻疹疫苗对我省现流行的麻疹野病毒能起到保护作用.结论这是海南省首次用B95a细胞成功分离到麻疹野病毒,并通过基因分型证实为中国本土野病毒,填补了海南省麻疹病毒分离的空白.
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四川省2002～2004年麻疹实验室网络监测
目的:评价四川省麻疹实验室网络在加速控制麻疹阶段的作用.方法:按世界卫生组织颁发的麻疹病毒感染的实验室诊断基本操作手册.结果:省级实验室每年通过国家麻疹实验室的质控考核,考核成绩均为100分,复核标本的符合率100%.2003年21个市州麻疹实验室均通过省对市州的质控考核.省级麻疹实验室2002-2004年10月共检测346例疑似麻疹病例血清标本,确定24起麻疹暴发疫情,11起风疹暴发疯情,4起其他发热出疹性疾病暴发疫情,10例散发病例;4个年龄组健康人群血清共731份,麻疹IgG抗体平均阳性率为96.28%,抗体滴度≥1:800的占78.83%;从54份咽拭子和尿液标本中分离出20株麻疹病毒,8株经核酸序列分析鉴定为H1基因型.结论:为了提高麻疹的监测质量,必须进一步加强和完善麻疹实验室网络建设.
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四川省麻疹野病毒的分离和鉴定
目的了解四川省麻疹病毒分子生物学特征,确定现阶段四川省流行的麻疹野病毒的基因型别.方法用绒猴淋巴母细胞(B95a)从一疑似麻疹散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和其序列测定方法鉴定是否为麻疹病毒.结果四川省分离的这株毒株确定为麻疹野病毒H1基因型.结论分离出麻疹野病毒属于H1基因型,和中国的本土优势流行株相同.
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宁夏2004-2007年麻疹监测分析
为了客观评价宁夏麻疹监测系统现状,探讨控制和消除麻疹的策略.对宁夏2004- 2007年麻疹流行病学和实验室监测工作进行分析.结果显示,宁夏麻疹监测系统的灵敏性较高,疑似麻疹病例标本采集率和血清学诊断率等主要监测指标已达较高水平.同时,对监测到的36株麻疹野病毒基因型进行了探讨,全部为H1基因型H1a亚型,未发现其它基因亚型.因此,宁夏亟需加速控制麻疹,应继续做好麻疹监测和麻疹疫苗免疫接种.
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宁夏2004-2007年流行麻疹野病毒基因特征分析
目的 了解宁夏2004-2007年流行的麻疹野病毒分离株基因特征,为控制、消除麻疹提供科学依据.方法 用B95a、Vero/Slam细胞从疑似麻疹暴发和散发患者的标本中分离麻疹病毒,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),从分离到的麻疹病毒中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因C末端676个核苷酸片段,再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析.结果 分离的36株麻疹野病毒全部为H1基因型H1a亚型.36株麻疹野病毒的核苷酸同源性为96.2%-100.0%,氨基酸同源性为94.0%-100.0%.宁夏14株麻疹病毒代表株与中国S191疫苗株的核苷酸同源性为91.0%-92.5%,氨基酸同源性为85.4%-89.45%.结论 宁夏2004-2007年流行的麻疹野病毒为H1基因型H1a亚型,未发现其它基因亚型.H1a基因亚型病毒株引起了多个传播链造成宁夏各市的麻疹流行.
