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人高致病性禽流感病毒H5N1安徽株HA、M2蛋白双顺反子表达载体的构建及表达研究
将我国分离的人H5N1亚型禽流感病毒A/Anhui/1/2005作为研究对象,扩增其HA和M2基因片段并克隆至DNA疫苗表达载体pVRC中,构建成真核表达质粒.为提高HA的表达量,按照人偏爱密码子将HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入真核表达载体pVRC,以β-actin蛋白为内参比证明了优化后的HA蛋白表达效果明显提高.将M2基因和优化后的HA基因共同克隆入双顺反子表达载体plRES中,获得同时表达HA或M2的双顺反子真核表达质粒;通过Western blot和间接免疫荧光检测方法,确认构建的重组质粒在真核细胞中成功地表达了目的蛋白HA和M2.通过上述结果为进一步开展人高致病性禽流感病毒安徽株HA和M2基因的功能与致病性研究及使用表达HA和M2蛋白进行新型人用禽流感双价疫苗研发奠定基础.
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反应停联合M2方案治疗难治性复发性骨髓瘤18例疗效分析
目的:探讨反应停联合M2方案治疗难治性复发性骨髓瘤疗效.方法:反应停联合M2方案治疗难治性复发性骨髓瘤18例,其中Ⅱ期5例,Ⅲ期13例.结果:总有效率为88.9%,CR率22.2%.结论:反应停联合M2方案为治疗难治性复发性骨髓瘤较好的选择.
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微生物转化合成羟基化青藤碱及其条件优化
目的 首次对青藤碱进行微生物羟基化转化合成研究,并对转化条件进行优化得到佳工艺.方法 选取10株具有羟基化能力的菌株对青藤碱进行转化,采用TLC、HPLC-MSn方法检测原药及其转化物,优选出能使青藤碱羟基化的高活性菌株和佳转化条件.结果 10株菌株经过筛选,有三株菌可使青藤碱羟基化,经过复筛Cunninghamella M2为佳活性菌株:在摇床转速180 r/min下,适培养时间为6 d,初始pH为6.5,培养温度为28℃,大底物投料浓度不大于200 mg/L时,可使青藤碱羟基化率大于95%.结论 Cunninghamella M2转化修饰青藤碱生成其羟基化物的专属性强、转化效率高.
关键词： 青藤碱 羟基化 微生物转化 Cunninghamella M2 -
VAD、改良M2和MP方案联合沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的疗效观察及对比研究
目的：评价VAD、改良M2和MP化疗方案联合沙利度胺治疗多发性骨髓瘤的疗效。方法39例MM患者根据患者病情、经济情况及意愿分为3组：VAD治疗组26例，初治者20例，使用改良M2或MP方案者（含马法兰化疗方案）21例，初治患13例；其中使用过改良M2治疗组有14例：初治者4例，复治者10例；使用过MP治疗组有15例，初治者10例，复治者5例。MP和M2方案重复使用者8例。先后VAD和改良M2或MP方案重复使用者8例。结果 VAD组和含马法兰（M）组初治患者总有效（OR）（≥PR）率分别为80.0％和76.9％（P＞0.05），≥VGPR率：分别为60.0％和46.2％（P＞0.05）。初治+复治者总有效（OR）（≥PR）率分别为76.9％（26例VAD组）和57.1％（21例含M组）（P＞0.05），≥VGPR率分别为53.8％和42.9％（P＞0.05）。其中10例MP方案初治者4例达VGCR以上疗效，4例改良M2初治患者3例达VGCR以上疗效，3例使用VAD方案初治者效果不佳，后改用M2方案达缓解（VGPR以上疗效）。VAD组和含M方案总生存（OS）时间：初治患者分别为39个月和25个月（P＞0.05）；初治和复治患者总体统计分别为39个月和50个月（P＞0.05）。VAD组和含M方案无进展生存（PFS）时间：初治患者分别为31个月和18个月（P＞0.05）；初治和复治患者总体统计分别为29个月和31个月（P＞0.05）。结论 VAD、改良M2和MP方案联合沙利度胺化疗方案仍为个体化治疗老年MM患者的经济、有效的方案。
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巨噬细胞极化分型与儿童支气管哮喘的相关性分析
目的 探讨巨噬细胞极化分型与儿童支气管哮喘(简称哮喘)演进的相关性并分析其可能相关机制.方法 分离2014年9月至2016年8月两年间西安市儿童医院哮喘患儿外周血中单核巨噬细胞,流式细胞术分析M1与M2的比例,并且分析其与患儿急性发作严重分级的相关性及常规全球哮喘防治创议方案控制疗效的相关性.结果 哮喘患儿急性发作严重分级及控制疗效与外周血中巨噬细胞无相关性(P＞0.05),与M1及M2呈现较强的相关性(P＜0.01),与M1呈正相关(r=0.938),与M2呈负相关(r=-0.835).结论 哮喘患儿外周血中巨噬细胞的不同亚群对该疾病的演进及预后发挥不同的作用,因此巨噬细胞极性的转变有可能成为儿童哮喘治疗的关键节点.
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微小RNA-155在小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中表达的差异
背景:目前对微小RNA-155 在巨噬细胞中的表达和功能的研究还集中在总体单核巨噬细胞水平.目的:了解小鼠骨髓来源M1 和M2 巨噬细胞中微小RNA-15 表达的差异.方法:用100 U/mL 干扰素γ和5 μg/L 脂多糖诱导骨髓细胞来源的巨噬细胞向M1 分化,用10 μg/L 白细胞介素4 诱导出M2 巨噬细胞.结果与结论:流式细胞检测显示实验诱导的M1 和M2 巨噬细胞纯度分别达91%和95%.RT-PCR 检测显示诱导型一氧化氮合酶mRNA 在M1 巨噬细胞中高表达,在M2 中则基本不表达;而Ⅰ型精氨酸酶、发现于炎症区域1 mRNA 在M2 中高表达,在M1 中则表达较低;炎症因子肿瘤坏死因子α mRNA 在M1 中的表达明显高于M2,相反白细胞介素10 mRNA 在M2 中的表达高于M1(P < 0.05).实时荧光定量PCR 检测显示M1 巨噬细胞中微小RNA-15 的表达量明显高于M2(P < 0.05).提示微小RNA-155 可作为鉴别M1,M2 巨噬细胞的标志.
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VAD、M2和MP化疗方案治疗多发性骨髓瘤的疗效评价
目的:评价VAD、M2和MP化疗方案治疗多发性骨髓瘤的疗效.方法:45例多发性骨髓瘤患者根据患者经济情况及意愿分为3组:VAD治疗组15例,M2治疗组19例,MP治疗组11例,经MP、M2方案治疗无效或治疗缓解后复发的难治/复发MM患者18例.结果:初治MM患者VAD方案组完全缓解例数2例、部分缓解9例,总有效例数11例(73.3%);M2治疗组完全缓解例数1例,部分缓解例数11例,总有效例数12例(68.2%);MP治疗组完全缓解例数0例、总有效例数5例(45.5%);VAD治疗组总有效率高于MP组和M2治疗组(P＜0.05).难治/复发MM的VAD方案组完全缓解率1例(5.6%),部分缓解8例(45.0%),总有效例数9例(50.0%).结论:在初治、难治/复发MM患者中,VAD方案缓解率高,起效快,骨髓抑制轻,不影响肾功能,可作为多发性骨髓瘤诱导治疗的一线首选方案.
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巨噬细胞极化在心血管疾病中的作用
心血管病,尤其是急性心肌梗死和收缩性心功能衰竭已成为西方国家患者死亡的主要原因,在发展中国家也呈明显上升趋势.缺血性的心脏病已经成为普遍现象,是引起病人死亡的主要原因.尽管早期血管再建和药物治疗能够明显提高心肌梗死后的生存率,但仍有大量病人发展成心力衰竭.巨噬细胞除了具有免疫防御和维持组织稳态功能,还在心肌梗死诱导的病理生理过程中发挥重要作用.巨噬细胞的亚群已被证实参与心血管疾病(动脉粥样硬化、心肌梗死、心肌缺血、心肌纤维化)的发生和发展,在心脏损伤和心肌重塑中有重要作用,研究基于巨噬细胞调控治疗心血管疾病的治疗策略很有价值.
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雌激素通过调节IRF4促进巨噬细胞向M2型极化
病毒性心肌炎、系统性红斑狼疮及肝癌等多种疾病其发病及严重情况呈现明显的性别差异,其中巨噬细胞不同极化是引起上述差异的重要原因.目前发现,雌激素(estrogen)可显著影响巨噬细胞极化,然而其涉及的分子免疫学机制尚不明了.本研究我们探讨了雌激素对骨髓来源巨噬细胞(BMM)极化的影响极其分子机制.雌激素虽不影响巨噬细胞的分化,但可显著促进巨噬细胞向M2型极化.进一步研究发现雌激素可上调M2型巨噬细胞重要转录因子IRF4的表达,且上调水平与M2极化程度呈正相关.提示,雌激素通过上调转录因子IRF4进而促进了M2型巨噬细胞极化.本研究为雌雄小鼠对疾病发病敏感差异性作出了一定理论解释,同时为通过调控巨噬细胞极化治疗疾病提供了新的线索.
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支气管肺泡灌洗液联检基因表达对肺癌的诊断价值
目的:明确支气管肺泡灌洗液(BALF)检测生存素基因(Survivin)核内不均一核糖核蛋白(HnRNP)和肿瘤M2型丙酮酸激酶(TU M2-PK)表达对肺癌的诊断价值.方法:应用RT-PCR及ELISA等检测50例肺癌患者BALF生存素基因、核内不均一核糖核蛋白和肿瘤M2型丙酮酸激酶,并与病理组织学、刷检细胞学和痰细胞学检查结果比较.结果:确诊肺癌患者BALF生存素基因、核内不均一核糖核蛋白和肿瘤M2型丙酮酸激酶表达与患者年龄、性别及肿瘤的病理分型、分级、部位及转移情况均无明显相关性(P均>0.05).肺癌患者BALF检测联合痰细胞学检查诊断肺癌的敏感性为90%(45/50),高于单独痰细胞学检测的敏感性(P均<0.05).结论:支气管肺泡灌洗液联检肿瘤标志物可提高肺癌无创诊断率.
关键词： 支气管肺泡灌洗液 生存素基因 核内不均一核糖核蛋白和肿瘤 M2 型丙酮酸激酶 -
基于M2与OK-432的肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞疫苗抗小鼠Lewis肺癌作用研究
目的：建立增强肺癌细胞裂解物（L）致敏的树突状细胞（D）疫苗（L-D）免疫临床治疗肺癌效果的方法。方法：以来源于热休克蛋白70第407~426的两段重复序列（M）和OK-432（O）为佐剂刺激Lewis肺癌细胞裂解物，制备了树突状细胞疫苗LMO-D。结果：与L-D相比， LMO-D显著增加CD11c、CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅰ和Ⅱ等细胞表面抗原的表达；LMO-D免疫荷瘤小鼠后，显著增强Th1类细胞因子肿瘤坏死因子α和干扰素γ，而不增强Th2类细胞因子白介素-5的表达；T淋巴细胞增殖诱导显著和淋巴细胞毒反应；此外LMO-D显著降低荷瘤小鼠瘤重与体积，延长了荷瘤小鼠的生存期。结论：LMO-D可通过诱导显著的T细胞免疫反应有效抑制肿瘤生长。
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江西省2009年至2012年甲型H3N2流感病毒耐药性分析
目的：分析江西省2009-2012年甲型H3N2流感病毒M2以及NA基因的特点，掌握其耐药情况，为临床治疗和疾病控制提供参考。方法从江西省流感监测网中随机选择19株甲型H3N2流感病毒，经核酸提取和one-step RT-PCR扩增M以及NA基因片段，双向序列测定，采用DNAStar5.0和 Mage4.0序列分析软件分析M2以及NA基因特征以及耐药性位点。结果19株毒株M2基因31位氨基酸均由丝氨酸(S)突变为天冬酰胺(N)；所有毒株NA蛋白催化活性位点和辅助位点均未发生氨基酸替换。结论19株毒株均对金刚烷胺类药物耐药，对流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物均敏感，但仍应加强对流感病毒的耐药性监测。
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急性髓系白血病M2型的临床特征及预后因素分析
目的 探讨急性髓系白血病M2型(AML-M2)的临床特点及预后影响因素.方法 收集本院2013年1月-2017年12月住院治疗128例AML-M2患者临床资料,分析其临床特征并用COX回归进行预后因素的单因素和多因素分析.结果128例患者中位年龄43(13-70)岁,男性63例,女性65.90％以上表达CDl3、CD33、CD34、CD117等表面抗原,CD19+(14.4％),CD56+(8.8％).核型正常患者71例,t(8;21)患者52例,其中单纯t(8;21)患者25例,伴附加染色体异常27例,主要为性染色体的缺失(-X/-Y).分子学检测提示,FLT3-ITD、c-Kit、NPM1、CEBPA基因突变分别占11.6％、10.4％、15.1％、20.9％.首次诱导治疗缓解率(CR),IA方案优于DA方案,差异有统计学意义(P<0.05).单因素分析示:女性、不伴附加染色体异常、中大剂量阿糖胞苷≥3次、行HSCT的患者在OS、PFS上均有优势(P<0.05).多因素分析示:中大剂量阿糖胞苷疗程数≥3次的患者在OS、PFS上明显优于中大剂量阿糖胞苷<3次的患者(P<0.05).结论 本中心患者的总体 CR 率为 92.2％,IA 组的总体完全缓解率优于 DA 组(P=0.036). 中大剂量阿糖胞苷疗程数≥3 次是预后良好因素,伴附加染色体异常的预后不良因素,造血干细胞移植可使患者获得更好的长期疗效.
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M2程序和自定义低视力黄斑视野检查在白内障视功能评估中的意义
目的探讨白内障术前黄斑视野检查对黄斑病变和进行视功能评估的价值.方法对41例白内障患眼手术前后行M2程序和自定义低视力黄斑程序(CLVC)视野检查.结果晶状体混浊所致平均视野缺损(MD)为10.95dB.黄斑病变眼术前视野多见严重的视敏度普遍下降,或中央深度缺损(CDD).以MD≥20dB或CDD为标准检出黄斑病变的敏感度为93%,特异性为65%.与网测相比,CLVC检查的平均阈值敏感度与术后矫正视力存在更好对应关系.结论白内障术前M2程序视野检查有助于发现黄斑病变,CLVC程序能更好地反映潜在的中心视功能.
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M2型丙酮酸激酶及癌胚抗原的联合检测在肺癌诊断中的价值
目的:探讨联合检测肿瘤M2型丙酮酸激酶(Tumor M2-Pyruvate Kinase,Tu M2-PK)、癌胚抗原(carcinoembbryonic antigen,CEA)对肺癌的诊断价值.方法:检测48例肺癌患者、31例肺良性病变和30例健康人血浆Tu M2-PK及血清CEA值,并进行对比分析.结果:肺癌组Tu M2-PK、CEA值显著高于肺良性病变组和正常对照组(P＜0.05).肺癌组各病理类型之间Tu M2-PK无显著差异,腺癌患者CEA值明显高于鳞癌与小细胞肺癌(P＜0.05).Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者血浆中Tu M2-PK水平显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P(0＜05).单独检测Tu M2-PK对肺癌的敏感度为65%,联合CEA检测时敏感度达到83%.结论:肺癌患者血浆中Tu M2-PK明显升高,联合检测Tu M2一PK、CEA可提高肺癌的诊断水平.
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脊髓损伤后巨噬细胞极化的研究进展
巨噬细胞为脊髓受损后参与炎症反应的主要细胞,不同的组织环境特征导致相应的巨噬细胞极化,对受损脊髓产生修复或损伤的不同效应.经典巨噬细胞(M1)和非经典巨噬细胞(M2)是近年来研究关注的巨噬细胞新的极化分类.本文就此研究进展做一综述.
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细菌脂多糖及高迁移率族蛋白1对小鼠巨噬细胞M1/M2极化分型的影响
目的 探讨细菌脂多糖(LPS)及信号转导通路中的下游分子高迁移率族蛋白1(HMGB1)对小鼠巨噬细胞M1/M2极化分型的作用.方法 分别用LPS、HMGB1刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7,Q-PCR法检测各组巨噬细胞极化基因的表达情况.结果 在LPS刺激下M1巨噬细胞极化基因NOS2、IL-6、TNF-α表达水平明显增高(P<0.01),M2巨噬细胞极化基因ARG-1、RELM-α表达水平降低(P>0.05),巨噬细胞往M1型分化.在HMGB1刺激下M1巨噬细胞极化基因NOS2、TNF-α和M2巨噬细胞极化基因RELM-α表达水平均明显增高(P<0.01).结论 LPS使小鼠巨噬细胞往M1亚型分化促进炎症的发生发展;HMGB1作为LPS的一个下游分子,在使小鼠巨噬细胞往M1亚型分化的同时也能使其往M2方向分化,提示其中存在一个负反馈调节炎症的机制,避免机体组织受到无限制破坏.
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江西省2009-2011年新型甲型H1N1流感病毒耐药性分析
目的 分析江西省2009-2011年甲型H1N1流感病毒M2以及NA基因的特点,掌握其耐药情况,为临床治疗和疾病控制提供参考.方法 从江西省流感监测网中随机选择19株甲型H1N1流感病毒,经核酸提取和one-stepRT-PCR扩增M以及NA基因片段,双向序列测定,采用DNAStar5.0和Mage4.0序列分析软件分析M2以及NA基因特征以及耐药性位点.结果 19株毒株M2基因发生了S31N的突变;仅A/JiangxiDonghu/SWL11171/2009 (H1)株的NA蛋白发生了E119Q替换,其他毒株NA蛋白催化活性位点和辅助位点均未发生氨基酸替换.结论 19株毒株均对金刚烷胺类药物耐药,几乎都对流感病毒神经氨酸酶抑制剂药物敏感,但仍应加强对流感病毒的耐药性监测.
关键词： 新型甲型H1N1流感病毒 M2 NA 耐药性 -
泰国、越南与香港人源H5N1禽流感病毒序列比对及进化特点分析
[目的]禽流感病毒不仅引起禽类感染和流行,而且可以打破种属屏障、引起人或其他哺乳动物感染和传播,欲对1997年香港和2004年泰国、越南直接感染人的H5N1禽流感病毒基因组序列进行比对及进化特点分析.[方法]利用Lasergene软件包中的EditSeq从14株禽流感病毒分离株截取HA、NA、M2基因序列并翻译成氨基酸,然后用ClustalX软件对截取的片断进行比效分析.[结果]①2004年泰国、越南人源H5N1毒株的HA切割位点上的氨基酸序列和1997年香港人源H5N1毒株一致;②2004年泰国、越南人源H5N1毒株和1997年香港人源H5N1毒株具有相同的受体结合位点;③泰国和越南人源H5N1毒株的NA茎部缺失了20个氨基酸而在HA上增加了一个潜在糖基化位点;④M2蛋白某些氨基酸位点发生改变,异致部分泰国和越南人源H5N1毒株对金刚烷胺产生耐药性.[结论]1997年香港和2004年泰国、越南直接感染人的H5N1禽流感病毒基因组序列发生了改变.
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可溶性HLA-G二聚体在体外对M1型巨噬细胞极化抑制作用的研究
目的 研究可溶性HLA-G二聚体对不同型别巨噬细胞极化的影响.方法 用HLA-G-Fc融合基因转染的721.221细胞分泌可溶性HLA-G二聚体；分离健康人外周血单个核细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)与细菌脂多糖(LPS)刺激得到经典活化的M1(促炎),用重组人巨噬细胞集落刺激因子(rhM-CSF)与重组人白细胞介素4(rhIL-4)刺激得到选择性活化的M2(抗炎)；在培养过程中加入可溶性HLA-G二聚体或转染空载体的721.221上清作为对照；观察巨噬细胞形态,并用流式细胞仪检测M1表面CD14+CD80+,M2表面CD14+CD206+的表达水平.结果 诱导的M1呈现煎蛋状形态,M2呈现纺锤体样形态.M1中可溶性HLA-G二聚体组CD14+CD80+阳性率明显低于721.221上清对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05)；而与M2中与721.221上清对照组相比,可溶性HLA-G二聚体组CD14+CD206+阳性率无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 可溶性HLA-G二聚体在体外可抑制M1型巨噬细胞的极化.
关键词： 可溶性HLA-G二聚体 M1 M2
