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尼帕病毒F糖蛋白在重组牛痘病毒中的表达及鉴定
尼帕病毒(NiV)F蛋白在病毒侵入细胞和诱导中和抗体等方面具有重要作用.通过over-lapping PCR合成密码子优化的F蛋白基因构建了表达NiV F蛋白的重组牛痘病毒(WR株)rWR-NiV-F.利用兔抗NiV血清为检测抗体,通过间接免疫荧光(IFA)检测到了F蛋白在重组病毒感染细胞中的表达.SDS-PAGE和Western blot检测证明重组蛋白F0被裂解为F1和F2.以rWR-NiV-F感染瞬时转染共表达NiV受体结合囊膜糖蛋白G的BHK细胞,可诱导细胞膜融合及合包体形成,证明该重组病毒表达F蛋白保持良好的抗原性及生物学活性,为NiV诊断及重组活载体疫苗研究奠定了重要基础.
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尼帕病毒融合蛋白和受体结合蛋白基因DNA免疫的研究
构建了表达哺乳动物密码子优化的NiV囊膜蛋白F和G基因的真核表达质粒pCAGG-NiV-F和pCAGG-NiV-G.细胞融合试验表明,重组NiV融合蛋白F和受体结合蛋白G在pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G共转染BHK细胞中获得表达,并具有良好生物学活性.真核表达质粒pCAGG-NiV-F、pCAGG-NiV-G和pCAGG-NiV-F+pCAGG-NiV-G DNA分别按100μg/只的剂量肌肉注射免疫6周龄BALB/c小鼠,间隔4周加强免疫,第二次加强免疫3周后采血,分离血清备用.分别以重组杆状病毒感染Sf9细胞表达的重组NiV融合蛋白(rNF)和受体结合蛋白(rNG)为包被抗原,应用间接ELISA检测上述质粒DNA免疫血清中的特异性抗体,具有较高的敏感性和特异性.另外,中和试验结果表明,DNA免疫小鼠产生的特异抗体可有效中和NiV囊膜蛋白F和G介导的伪型VSV重组病毒侵入NiV易感宿主细胞的感染性,并且受体结合蛋白G基因DNA诱导中和抗体的滴度高于融合蛋白F基因DNA.结果表明,DNA疫苗具有防制尼帕病毒性脑炎的潜力.
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尼帕病毒和亨得拉病毒核蛋白基因在杆状病毒表达系统的表达及反应原性鉴定
利用改造的昆虫杆状病毒表达系统转移载体,成功地对尼帕病毒(NiV)和亨得拉病毒(HeV)的核蛋白基因进行了分泌表达.重组蛋白表达的时效性分析结果显示,Sf9细胞感染重组病毒72～96h后,蛋白的表达量达到高峰,大规模表达可分别获得2.3～2.4mg/L纯化的目的蛋白.应用Western blot、间接ELISA和间接免疫荧光(IFA)对两种重组N蛋白与兔抗NiV和HeV阳性血清的反应性进行鉴定,结果表明两种重组N蛋白和阳性血清有很好的反应性,并且在血清学上有交叉反应.该研究为今后开展流行病学调查和诊断试剂的研制打下了基础.
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尼帕病毒包膜糖蛋白及细胞融合机制研究进展
尼帕病毒(Nipah virus,NiV)是一种新发人兽共患病病原体,其传染性强,致死率高,不仅严重危害当地人群的生命财产,也对全球公共卫生安全构成严重威胁.本文从尼帕病毒包膜表面两种重要糖蛋白——附着蛋白G和融合蛋白F人手,简要介绍其结构形态和生理学功能,并联系尼帕病毒的组织趋向性,重点阐述G蛋白与其蛋白受体cB2/eB3 (ephrin-B2/ephrin-B3)之间、G蛋白与F蛋白之间的相互作用机制,对近几年来国内外研究的新进展进行回顾与展望.
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尼帕病毒的研究进展
尼帕病毒是单链RNA病毒,属于副粘病毒科,是1999年在马来西亚发现的动物病毒.基因组全长18 246个核苷酸,其序列与亨得拉病毒同源性高.尼帕病毒引起人类急性脑炎,病死率高.果幅是尼帕病毒的自然宿主.在马来西亚的爆发中,猪是大多数人类病例的传染源,未发现人传人传播.
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尼帕病毒病的流行现状与防治研究进展
尼帕病毒病(Nipah virus disease, NVD)是一种急性接触性、高致死性人兽共患传染病.临床症状主要表现为发热、头痛、脑炎及咳嗽等.1998年在马来西亚和新加坡先后出现,1999年分离并确诊其病原为尼帕病毒.之后该病在印度、孟加拉国多次暴发.2018年5月,印度再次暴发NVD疫情,给人们造成了极大恐慌.本文以该病的流行情况和防治研究进展为重点,从病原学、流行病学、临床症状、病理变化、实验室诊断及防治等方面介绍其研究进展.
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尼帕病毒病
在目前已知的200多种动物传染病和150多种动物寄生虫病,至少有200种以上可以传染给人.尼帕病毒病(Nipah Virus Disease,NVD)是继英国疯牛病、台湾岛猪口蹄疫、香港禽流感后,又一引起世界各国广泛关注和恐慌的人、畜共患病.NVD是1997年在马来西亚Perak州Nipah城首次发现的一种严重危害家畜、家禽和人类的新病毒性传染病.
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我国口岸尼帕病毒病风险预警及防控措施探讨
目的：尼帕病毒病是由尼帕病毒引起的主要侵害中枢神经系统和呼吸系统的急性高度致死性人畜共患传染病。目前该病在东南亚国家和地区流行蔓延，我国尚未有此病的报道，但是一旦传入将严重威胁人民生命安全和养殖业发展。方法为防范疫病传入，本文根据尼帕病毒的流行病学特性及国家质量监督检验检疫总局风险管理规定，对口岸尼帕病毒病的风险预警的重要性及防控措施进行初步的探讨。结果东南亚国家和地区与我国地理位置接近，同时我国是生猪养殖大国，从生物学角度来看我国具有疫病传入风险。结论根据风险等级进行管理，兽医主管部门和口岸检疫部门加强风险预警和管理，严格防控尼帕病毒进入我国境内。
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一种新出现的人畜共患传染病——尼帕病毒脑炎的研究进展
尼帕病毒脑炎(Nipall virus encephalitis)是由尼帕病毒(Nipah virus,NiV)所引起的一种病毒性脑炎,该病毒因首先于马来西亚尼帕村的死亡病例中被分离出而得名.NiV的宿主广泛,包括人及多种动物,如猪、猫、狗、马等.至今,NiV虽只引起数次局部地区暴发,但因其感染宿主广,且人类感染后病死率较高而受到广泛关注.由于人类普遍易感染NiV,且该病毒具高度致病性,并缺乏有效的治疗手段和有效疫苗等原因,其被列为生物安全4级病原体.
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尼帕病毒巢式RT-PCR方法的建立和初步应用
目的 建立灵敏、特异的检测尼帕病毒的巢式RT-PCR方法.方法 根据GenBank公布的尼帕病毒N基因序列,设计2对特异性引物(外引物和内引物),建立巢式RT-PCR方法,优化反应体系,测定特异性和灵敏度,并进行临床样品的检测.结果 该方法扩增的片段序列与源序列同源性均为100％.特异性试验结果表明本试验设计的内外侧引物不能从新城疫病毒、牛瘟病毒和日本乙型脑炎病毒中扩增出条带.敏感性试验结果表明,该方法低能检测出的标准模板RNA浓度为39 fg/μL.100份临床样品检测结果全部为阴性.结论 初步建立了快速、灵敏、特异的检测尼帕病毒N基因的巢式RT PCR方法,可用于动物疫病监测和检验检疫等领域.
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新疆伊犁地区马的尼帕病毒感染情况研究
目的:探讨尼帕病毒(Nipah virus,NiV)在新疆伊犁地区马群中的自然感染情况.方法:采用尼帕病毒一步法实时定量逆转录聚合酶链反应(One step real time reverse transcriptase polymerase chain reaction,Real-time RT-PCR)检测120匹马外周血液单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中的NiV N基因片段,对阳性产物进行基因序列测定、同源性和氨基酸顺序分析.结果:所检测120匹马PBMCs NiV N基因片段阳性率为0%(0/120).结论:本研究未发现新疆伊犁地区马中存在尼帕病毒自然感染.
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尼帕病毒的研究现状
尼帕病毒是一种近10年来东南亚和南亚新发现的传染性极强的人兽共患病病毒,本文简要介绍了尼帕病毒的流行情况,国内外在基础、临床、预防医学和诊断技术上的研究进展,并根据目前对该病毒研究状况,提出了预防策略.
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尼帕病毒N基因的原核表达
目的：利用尼帕病毒（NiV）的N基因进行原核表达，探讨NiV N蛋白作为检测NiV存在的抗原的可能性。方法利用pET-28a（＋）作为表达载体，构建pET-NiV N重组质粒，通过IPTG诱导使其表达蛋白，并用Western blot方法进行原核表达NiV N蛋白的检测。结果通过PCR、酶切和连接反应，成功构建N蛋白的pET-NiV N重组质粒，大小为1596 bp；利用IPTG诱导pET-NiV N重组质粒在宿主菌中表达N蛋白，SDS-PAGE结果显示，55 kD有特异蛋白条带，与蛋白预计大小相符，经Bandscan软件扫描分析，重组蛋白量占菌体总蛋白量的12％；Western blot法检测显示，55 kD的条带显色良好，证明是本实验所需要得到的目的蛋白。结论使用原核表达系统成功表达了NiV的N蛋白，为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定了基础。
