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异硫氰酸苯乙酯抑制PI3K/Akt通路激活从而促进肺癌细胞凋亡
目的：观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）诱导肺癌NCI-H446细胞凋亡的分子机制。方法：体外培养NCI-H446细胞，分别用10，30和50μmol/L PEITC作用24h，MTT法和流式细胞术分别检测细胞的增殖与凋亡；Western blot检测Akt磷酸化、细胞内凋亡相关蛋白bcl-2及Bax的含量。结果：不同PEITC处理后，可显著抑制NCI-H446细胞增殖，并诱导其凋亡。PEITC处理后，细胞内bcl-2含量显著高于对照组，同时，bax含量有所降低。PEITC也能抑制NCI-H446细胞中Akt的磷酸化水平。结论：PEITC可能通过影响PI3K/Akt的活性而发挥促凋亡作用。
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异硫氰酸苯乙酯通过PI3K-NF-κB-MMP-9途径抑制结肠癌SW480细胞的迁移和侵袭
目的 观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌细胞SW480增殖侵袭的分子机制.方法 体外培养结肠癌细胞系SW480,分别用10,30和50 μmol/L PEITC作用24h,MTr法检测细胞的增殖;伤口愈合实验和侵袭实验分别检测PEITC对SW480细胞迁移与侵袭的影响.荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性,RT-PCR检测MMP-9 mRNA表达情况;Westem blot检测PI3K和PTEN的表达和Akt、mTOR磷酸化,以及NF-κB核转位情况.荧光素酶报告基因分析NF-κB的活性.后,建立裸鼠异种移植瘤动物模型,观察PEITC对异种移植瘤生长的抑制作用.结果 PEITC能在不影响细胞活性的条件下显著抑制SW480细胞侵袭和迁移(P＜0.05),也能抑制MMP-9的酶活性以及mRNA表达(P＜0.05).同时PEITC能抑制PI3K的表达以及抑制Akt和mTOR磷酸化(P＜0.05),上调PTEN表达.PEITC也能抑制NF-κB核转位,并能降低其活性(P＜0.05).此外,PEITC也能抑制裸鼠异种移植瘤的生长(P＜0.05).结论 PEITC是一种潜在的抗结肠癌细胞转移药物,它可能通过影响PI3K/Akt和NF-κB通路发挥作用.
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异硫氰酸苯乙酯对K562/A02细胞阿霉素耐药影响的研究
本实验研究探讨异硫氰酸苯乙酯(phenylhexyl isothiocyanate,PHI)对K562/A02细胞的阿霉素(ADM)耐药性与敏感性的影响,并研究其可能的相关机制.运用MTT法分别检测阿霉毒素(ADM)以及PHI+ADM对K562/A02细胞的生长抑制率,计算其耐药倍数;用流式细胞仪检测PHI作用前后细胞的凋亡、细胞内ADM浓度的变化和MRP1蛋白变化;分光光度仪测定细胞内还原性谷胱目肽(GsH)的含量;RT-PCR半定量检测PHI作用前后MRP1 mRNA的水平.结果显示,随着PHI浓度的增加,细胞生存率降低;两药联合应用时K562/A02细胞凋亡率均增加;当PHI≥20 μmol/L时其耐药倍数有显著差异(p<0.05),两种细胞内ADM浓度增加亦有显著差异(p<0.05).单独运用1 μg/ml ADM时K562/A02细胞内的GSH含量下降5%,单独运用PHI时K562/A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的增加先是轻度升高尔后下降,GSH含量下降点约在10 μmol/L;当PHI≥20 μmol/L与1 μg/mlADM联合应用时,K562/A02细胞内的GSH含量随着PHI浓度的升高而进行性下降;而不同浓度的PHI的作用前后.两种细胞的MRP1的表达无论是蛋白水平还是基因水平都无显著差异(P>0.05).结论:PHI对K562/A02细胞的细胞毒作用与细胞内GSH耗竭无直接关系,PHI不但可以增强K562/A02细胞对ADM的敏感性,而且通过耗竭细胞内GSH部分地逆转K562/A02细胞对ADM的耐药.联合使用PHI可减少ADM的用量,从而降低其毒副作用.
关键词： 异硫氰酸苯乙酯 阿霉素 K562/A02细胞 耐药 -
异硫氰酸苯乙酯抗肿瘤的研究进展
异硫氰酸苯乙酯(PEITC)是常见的人工合成的抗肿瘤单体,其具有良好的抗肿瘤作用.目前证实PEITC在肝癌、乳腺癌及骨髓瘤等恶性肿瘤的体外试验中的抗肿瘤效果显著,诱导细胞凋亡作用明显.该文主要就PEITC预防肿瘤、诱导肿瘤细胞凋亡及抑制侵袭转移等方面的作用进行阐述.除抗肿瘤之外,PEITC还具有抗炎和提高机体免疫力的功效.PEITC是理想的防癌剂,在未来抗肿瘤领域中一定会扮演重要的角色,值得临床推广和使用.
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异硫氰酸苯乙酯对结肠癌SW480细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响
目的 探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌SW480细胞PI3 K/Akt/mTOR信号通路的影响.方法 选择6～8周龄的SPF级BALB/c (nu/nu)雄性裸鼠24只,将其随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,各6只.体外培养结肠癌细胞系SW480,对照组加入等体积的二甲基亚砜(DMSO),低剂量组、中剂量组和高剂量组分别给予10、30和50 μmol/L PEITC作用24h,Western blot检测PI3K和PTEN的表达和Akt、mTOR磷酸化情况.后,建立裸鼠异种移植瘤动物模型,观察PEITC对异种移植瘤生长的抑制作用.结果 PEITC能抑制PI3K的表达以及Akt和mTOR磷酸化.肿瘤质量:高剂量组＜中剂量组＜低剂量组＜对照组,抑瘤率:高剂量组＞中剂量组＞低剂量组(P＜0.05).结论 PEITC可能通过影响PI3 K/Akt/mTOR通路发挥抗肿瘤作用.
关键词： 异硫氰酸苯乙酯 SW480细胞 PI3K/Akt/mTOR 结肠肿瘤 -
异硫氰酸苯乙酯通过上调PTEN表达诱导肺癌细胞凋亡
目的：研究异硫氰酸苯乙酯（phenethyl isothiocyanate，PEITC）抑制肺癌细胞NCI-H446生长的机制。方法体外培养肺癌NCI-H446细胞，并分为对照组和PEITC处理组。对照组细胞给予0．1％二甲基亚砜处理，PEITC组分别用10μmol/L、30μmol/L和50μmol/L PEITC作用24 h，噻唑蓝法和流式细胞术分别检测细胞的增殖与凋亡；Western blot检测Akt磷酸化、细胞内活性caspase-3和caspase-9的表达以及胞浆中细胞色素C的含量；Real time PCR检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homologue， PTEN）mRNA水平。结果 PEITC可显著抑制肺癌NCI-H446细胞增殖（P＜0.05），并诱导其凋亡。PEITC处理后，肺癌细胞内活性caspase-3和caspase-9含量显著高于对照组（P＜0.05）；同时，PEITC 处理后，肺癌细胞质中细胞色素C 含量明显增高（P＜0.05）。PEITC也能抑制NCI-H446细胞中Akt的磷酸化水平。此外，PEITC处理后，可明显诱导肺癌细胞内PTEN表达的增加（P＜0.05），其中50μmol/L PEITC处理后，PTEN mRNA含量增高了4.6倍。结论 PEITC能抑制NCI-H446肺癌细胞生长，其机制可能通过上调PETN表达，从而抑制PI3K/Akt的活性有关。
关键词： 异硫氰酸苯乙酯 肺肿瘤 细胞系 磷酸酯酶与张力蛋白同源物 凋亡 -
PHI逆转K562/A02细胞阿霉素耐药的机制
目的 探讨异硫氰酸苯乙酯(PHI)逆转K562/A102细胞株阿霉素(ADM)耐药的可能机制.方法 将耐ADM的人慢性粒细胞白血病K562/A02细胞株分别与不同浓度(0,5,10,20,30,40和50μM)的PHI共同孵育后,流式细胞术检测细胞周期、细胞内ADM浓度以及P-糖蛋白1(P-gp1)表达水平;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测PHI作用前后细胞内mdr1 mRNA的转录水平.结果 与对照组相比,联合作用48 h后,随着PHI浓度的增加G2期细胞逐渐减少,G1期细胞明显增多,而S期细胞无明显变化;K562/A02细胞内ADM平均荧光强度均高于对照组,K562/A02细胞mdrl mRNA表达下降和P-gp1表达下调(P＜0.05).结论 PHI逆转K562/A02细胞耐药机制可能与细胞G1期阻滞和P-gp1表达下调有关.
关键词： 异硫氰酸苯乙酯 K562/A02细胞 耐药逆转 -
异硫氰酸苯乙酯通过上调ROS激活p53诱导MCF-7细胞凋亡机制的研究
目的:研究异硫氰酸苯乙酯(phenethyl isothiocyanate,PEITC)诱导人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡的作用及分子机制.方法:采用MTS观察PEITC对MCF-7细胞活力的影响.用Hoechst33342染色法和Annexin Ⅴ/PI双染法检测细胞凋亡率.细胞内的活性氧水平用DCFH-DA荧光探针标记后检测.同时,p53和Bax蛋白用免疫印记法检测.结果:PEITC对MCF-7细胞生长抑制作用呈现剂量依赖性.用15 μmol/L的PEITC处理9h后可明显地诱导细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax的表达.PEITC处理9h后可以显著性上调MCF-7细胞内活性氧水平.用N-乙酰半胱氨酸(NAC,活性氧清除剂)处理后可以抑制由PEITC诱导的凋亡.同时,NAC还可以抑制PEITC诱导的细胞凋亡和p53蛋白的表达.结论:PEITC主要是通过凋亡途径抑制MCF-7细胞生长.其作用机制可能是通过上调细胞内氧化应激水平进而激活p53蛋白及其下游凋亡通路促发凋亡.
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异硫氰酸苯乙酯诱导胆管癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的实验研究
目的:探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对人胆管癌QBC-939细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:PEITC处理QBC-939细胞后,采用MTT法检测细胞活力；运用流式细胞技术检测细胞凋亡率；Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态；使用流式细胞技术检测细胞周期.设置对照组:加入和药物等体积的DMSO.结果:20、30、40、50 u mol/L的PEITC作用于QBC-939细胞24 h后,细胞活力分别为(88.07±2.40)％、(68.02±4.04)％、(52.57±1.91)％、(36.37±3.42)％,较对照组明显降低(P＜0.05)；30μ mol/L的PEITC处理QBC-939细胞12、18、24、48 h后,细胞活力分别为(90.74±2.96)％、(78.22％±4.85)％、(69.67±4.58)％、(40.48±2.59)％,较对照组明显降低(P＜0.05). QBC-939细胞经30 u mol/L和50 μmol/L的PEITC作用处理24 h后,细胞凋亡率分别为(30.51±2.77)％、(58.62±3.75)％,较对照组显著升高(P＜0.05)；G2/M期的细胞比例从(5.06±1.86)％上升到(16.96±2.71)％、(26.68±1.85)％,差异有统计-意义(P＜0.05).结论:PEITC可通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞而发挥抗胆管癌作用,并具有时间-剂量依赖性.
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异硫氰酸苯乙酯对胃癌细胞体外抑制作用相关研究
[目的]研究异硫氰酸苯乙酯(PEITC)体外实验中对人胃癌BGC-823细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡相关分子机制.[方法]应用MTT法、Annexin V/PI双染法检测PEITC人胃癌BGC-823细胞增值以及凋亡的影响;应用RT-PCR以及Western Bolt检测PEITC诱导胃癌细胞凋亡相关基因蛋白的表达情况.[结果]PEITC作用人胃癌细胞BGC-823给药24 h后,与空白组比较,能显著抑制胃癌细胞的增殖,抑制作用与浓度和时间成依赖关系,诱导胃癌细胞的凋亡,能上调Bax表达,下调Bcl-2、Bcl-xl、Survivin等基因表达,激活Caspase-3、Caspase-9、PARP活性.[结论]PEITC能有效抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖,其机制可能是通过激活Caspase家族蛋白酶活性而诱导胃癌细胞凋亡.
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PEITC通过抑制结肠癌细胞PI3 K/NF-κB活性而抑制MMP-9表达
目的：观察异硫氰酸苯乙酯(PEITC)对结肠癌细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响及其分子机制。方法体外培养结肠癌细胞系SW480,分别用10、30、50μmol/L PEITC作用24 h,划痕愈合实验和侵袭实验分别检测PEITC对SW480细胞迁移与侵袭的影响。 RT-PCR检测MMP-9 mRNA的表达；Western blot检测MMP-9蛋白表达和蛋白激酶B( Akt)磷酸化。荧光素酶报告基因分析核转录因子κB( NF-κB)和MMP-9的活性。结果划痕愈合实验和Transwell小室实验结果显示,PEITC能在不影响细胞活性的条件下对SW480细胞侵袭和迁移具有一定抑制作用。同时,Western blot和RT-PCR结果证实PEITC能抑制MMP-9蛋白及mRNA表达。 PEITC能抑制Akt磷酸化以及NF-κB的转录活性。 PI3K抑制剂LY294002处理后,NF-κB-luc活性以及MMP-9蛋白表达显著降低。此外,不同浓度PEITC处理能显著抑制MMP-9的启动子活性。结论 PEITC是一种潜在的抗结肠癌细胞转移药物,它可能通过影响PI3K/NF-κB通路抑制MMP-9表达而发挥作用。
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受体作用蛋白在异硫氰酸苯乙酯诱导人急性白血病细胞凋亡中的作用
目的 探讨受体作用蛋白(receptor-interaction proteins, RIP)在异硫氰酸苯乙酯(phenethylisothiocyanate, PEITC)诱导人白血病细胞凋亡中的作用.方法 将0、2、4、6、8 μmol/L异硫氰酸苯乙酯作用于U937细胞3、6 h,观察量效关系.用8 μmol/L 异硫氰酸苯乙酯作用U937细胞1、3、6、9、12、24 h,观察时效关系. 采用Annexin V/PI染色和流式细胞仪检测细胞凋亡.用Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白蛋白聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase, PARP]、Caspasep-3、Caspasep-8及RIP的表达.结果 异硫氰酸苯乙酯在2、4、6、8 μmol/L作用于U937细胞3 h分别引起9%、25%、44%和56%的细胞发生凋亡,6 h分别引起16%、28%、51%和82%的细胞发生凋亡, 呈明显的量效关系.8 μmol/L 的异硫氰酸苯乙酯作用U937细胞1、3、6、9、12、24 h分别引起12%、57%、79%、86%、90%和91%的细胞发生凋亡,呈明显的时效关系.Western blot结果表明,异硫氰酸苯乙酯引起凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-8的降解/活化增加,促进凋亡作用底物PARP的降解增加.异硫氰酸苯乙酯还可引起受体作用蛋白表达降低及RIP降解增加.结论 异硫氰酸苯乙酯可引起人白血病细胞发生凋亡,其分子机制可能与死亡受体途径有关,其中受体作用蛋白的降解可能在异硫氰酸苯乙酯诱导细胞凋亡中起着重要作用.
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异硫氰酸苯乙酯对结肠癌细胞PTEN及MMP-9表达的影响
目的：观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）对结肠癌细胞磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）以及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养结肠癌细胞系SW480，分别用10、30、50μmol/L PEITC作用24 h，采用实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）和荧光素酶报告基因分别检测PTEN 和MMP-9 mRNA 的表达；采用蛋白质印迹法（western blotting）检测MMP-9和PTEN蛋白表达。结果 PEITC可抑制MMP-9蛋白表达，同时能降低MMP-9的转录活性。此外，不同浓度PEITC处理后，可明显诱导细胞内PTEN的表达，其中50μmol/L PEITC处理后，PTEN mRNA含量可增高5.1倍。结论 PEITC能影响结肠癌细胞PTEN和MMP-9的表达。
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异硫氰酸苯乙酯对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡作用及机制研究
目的 探讨异硫氰酸苯乙酯诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及其可能的机制.方法 以不同浓度异硫氰酸苯乙酯处理人乳腺癌MCF-7细胞,应用MTS法观察异硫氰酸苯乙酯对MCF-7细胞的抑制率,流式细胞术检测异硫氰酸苯乙酯对细胞凋亡、细胞周期以及活性氧表达的影响.结果 将不同浓度的异硫氰酸苯乙酯作用于MCF-7细胞72 h后,抑制了MCF-7细胞的增殖,其IC50为15.2 μmol·L-1;以10 和20 μmol·L-1的异硫氰酸苯乙酯作用MCF-7细胞24 h后,细胞出现凋亡现象,细胞周期阻滞在G2/M期,并造成细胞氧化损伤.结论 异硫氰酸苯乙酯能够促进人乳腺癌MCF-7细胞凋亡,影响细胞周期,其作用机制可能与异硫氰酸苯乙酯可造成肿瘤细胞氧化损伤有关.
