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MiR-25对三阴乳腺癌侵袭转移的影响及其潜在机制
目的 探讨微小RNA-25(miR-25)在三阴乳腺癌患者血浆、组织和细胞系中的表达情况及其对三阴乳腺癌侵袭转移影响的潜在分子机制.方法 横断面研究.运用实时荧光定量PCR检测86例三阴乳腺癌患者和38名正常对照者血浆中miR-25的水平;应用LinkedOmics网站分析平台分析三阴乳腺癌与非三阴乳腺癌样本中miR-25的水平;同时用定量PCR检测三阴乳腺癌细胞系中miR-25的表达情况;运用划痕和Transwell实验检测miR-25抑制剂或对照转染后,三阴乳腺癌细胞系迁移和侵袭能力的变化;应用荧光素酶报告基因技术验证1-磷酸鞘氨醇磷酸化酶SGPP1是否为miR-25的靶基因;采用SGPP1过表达质粒和miR-25过表达质粒共同转染MDA-MB-231细胞,运用划痕和Transwell实验检测其对细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹Western blot检测SGPP1蛋白水平的变化.正态分布的组间样本均数比较用Student′s t检验.结果 86例三阴乳腺癌患者血浆中miR-25的水平明显高于正常对照组(P为0.031);LinkedOmics网站分析平台分析显示,三阴乳腺癌标本中的miR-25表达水平明显高于常见的非三阴乳腺癌Luminal A型和Luminal B型(P分别为<0.001和0.006);在三阴乳腺癌细胞系HS578T、HCC1806、MDA-MB-231和BT549中miR-25的表达均明显高于乳腺上皮细胞系HBL-100(P分别为0.006、0.01、0.029和0.046);划痕实验显示,在MDA-MB-231和HS578T细胞中转染miR-25抑制剂后,较对照组相比,伤痕愈合率受到明显抑制(P分别为0.035和0.001);Transwell实验表明,转染miR-25抑制剂的MDA-MB-231和HS578T的细胞侵袭能力明显低于阴性对照组(P分别为0.002和0.001);LinkedOmics平台分析显示,三阴乳腺癌患者癌组织中miR-25与SGPP1表达呈负相关(P为0.037);双荧光素酶报告基因证实,SGPP1是miR-25的直接靶基因;抑制miR-25能增加SGPP1的蛋白水平;共转染SGPP1过表达质粒和miR-25过表达质粒能明显削弱miR-25过表达引起的细胞迁移和侵袭能力的促进作用(P均为0.002).结论 miR-25在三阴乳腺癌患者血浆、组织和细胞系中均高表达;抑制miR-25能明显抑制三阴乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-25可通过靶向SGPP1参与到其对三阴乳腺癌迁移和侵袭的调控中.
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环孢霉素A抑制肾性高血压大鼠心肌肥大的作用机制
目的观察环孢霉素A对肾性高血压大鼠心肌肥大的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 20只Wistar大鼠随机分为3组:两组采用一肾一夹模型制造肾性高血压,其中高血压组(n=7)予生理盐水腹腔注射;CsA组(n=7)给予环孢霉素A(CsA)5 mg·kg-1·d-1腹腔注射;假手术组(n=6)只给予生理盐水腹腔注射.称重法测定心重比,发色底物法测CaN活性;半定量PCR测定各组心肌组织中心房利钠因子(ANF)及CaNmRNA的水平,同时用免疫组织化学染色方法,观察心肌中CaN及活化T细胞核因子(nuclearfactor of activated T cell,NFAT)的表达.结果肾性高血压大鼠经CsA干预4周,其心重比较未干预组明显降低(P＜0.05),ANF mRNA水平较手术组明显降低(P＜0.05),与假手术组水平接近,心肌肥大受到抑制,同时发现心肌中CaN活性较未干预组显著下降,CaN mRNA水平较手术组明显降低(P＜0.05),免疫组化显示CsA干预组心肌中CaN及NFAT表达降低.结论 CsA抑制肾性高血压心肌肥大的机制与其下调心肌胞浆中CaN表达及其活性有关.
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螺内酯抗钙调神经磷酸酶依赖的肾性高血压大鼠心肌肥厚作用机制
目的观察螺内酯抗钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)依赖的肾性高血压大鼠心肌肥厚的作用.方法 20只Wistar大鼠随机分为3组:2组采用一肾一夹模型制造肾性高血压,其中螺内酯组(n=7)予螺内酯灌胃,高血压组(n=7)予水灌胃; 假手术组(n=6)只予水灌胃.称重法测定心重比,发色底物法测CaN活性;半定量PCR测定各组心肌组织中心房利钠因子mRNA的水平,同时用免疫组织化学染色方法,观察心肌中CaN 及活化T细胞核因子的表达.结果肾性高血压大鼠经螺内酯灌胃4周,其心重比较未干预组明显降低(P<0.05),心房利钠因子 mRNA水平较手术组明显降低(P<0.05),与假手术组水平接近,心肌肥厚受到抑制,同时发现心肌中CaN活性较未干预组显著下降,免疫组化显示螺内酯干预组心肌中CaN及活化T细胞核因子表达降低.结论螺内酯抑制肾性高血压心肌肥厚的机制与其下调心肌胞浆中CaN表达及其活性有关.
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缬沙坦对心力衰竭家兔肌浆网钙ATP酶、蛋白激酶A及磷酸酶1α的影响
目的 探讨家兔慢性心力衰竭(心衰)时心肌肌浆网钙ATP酶(SERCA2)、心肌蛋白激酶A(PKA)和磷酸酶1α(PP1α)表达的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义.方法 21只家兔随机分为三组,假手术组、心衰组和缬沙坦组各7只,通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型,于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及SERCA2、PKA、PP1α的表达.结果 与假手术组比较,心衰组左心室重量指数(LVMI)、心率、左心室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.05),左心室缩短率(LVFS)及射血分数(EF)明显降低(P<0.05);与心衰组比较,缬沙坦组LVMI、心率、LVEDP显著降低(P<0.05),LVFS及EF明显升高(P<0.05);心衰组SERCA2、PKA显著低于假手术组(P<0.05),PP1α显著高于假手术组(P<0.05);缬沙坦组SERCA2、PKA显著高于心衰组(P<0.05),PP1α显著低于心衰组(P<0.05).结论 缬沙坦长期干预心衰,能够改善心脏舒缩功能,可能与其上调SERCA2、PKA表达,降低PP1α表达有关.
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子宫内膜癌和卵巢上皮性癌PTEN基因突变及其蛋白表达的意义
目的探讨子宫内膜癌和卵巢上皮性癌组织中抑癌基因PTEN的突变及其蛋白表达与肿瘤发生、发展的关系.方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和DNA序列分析法,检测子宫内膜癌(52例)、卵巢上皮性癌(60例)中PTEN基因第5和第8外显子的突变,免疫组织化学法检测PTEN蛋白的表达.结果子宫内膜癌组织:(1) PTEN基因突变率为25%,高于正常子宫内膜(0,P<0.05);PTEN基因突变率与子宫内膜癌的病理分级、组织类型、肌层浸润深度密切相关(P<0.05).(2) PTEN蛋白缺失率为60%,高于正常子宫内膜组织(0,P<0.05);子宫内膜癌组织中PTEN蛋白表达率与病理分级和组织类型密切相关(P<0.05),而与手术病理分期和肌层浸润深度无关(P>0.05).卵巢上皮性癌组织:(1) PTEN基因的突变率为5%,与正常卵巢组织(0)和良性卵巢肿瘤(0)相比,差异无显著性(P>0.05).(2)PTEN蛋白缺失率为23%,显著高于良性卵巢肿瘤和正常卵巢组织(均为0,P<0.05);卵巢上皮性癌组织中的PTEN蛋白缺失率与其组织类型及患者的年龄、绝经与否无明显相关性(P>0.05),与临床分期和病理分级有关(P<0.05).结论 PTEN基因的突变和蛋白表达缺失均参与子宫内膜癌的发生发展;在卵巢上皮性癌中,PTEN基因主要通过蛋白表达的缺失而失活,参与了该肿瘤的发生发展.
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腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响
目的 研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响.方法 用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达.将RL95-2细胞随机分成3组:(1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV;(3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN.前两组均为对照组.采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DNA片段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响.结果 经Ad-PTEN介导的PTENcDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达.Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6.09±1.01)%、(9.98±2.17)%、(11.74±2.65)%、(27.69±8.67)%,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2.6±0.5)%、(18.0±4.4)%、(21.8±5.1)%、(33.7±9.9)%,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带.结论 腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础.
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乳腺癌组织磷酸化Akt表达及其与临床生物学因素的相关性研究
目的:研究乳腺癌组织磷酸化Akt(pAkt)表达与人表皮生长因子受体-2(HER-2)、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)状态及临床病理特征之间的关系.方法:收集导管原位癌16例和浸润性导管癌70例,免疫组织化学方法检测pAkt、HER-2、ER、PR、p53和Ki-67表达,统计分析其相关性,以及pAkt与患者临床特征的关系.结果:导管原位癌组织pAkt阳性率为0(0/16),浸润性导管癌组织为38.6％(27/70),差异有统计学意义,P=0.003.导管原位癌组织中pAkt水平与HER-2的表达无相关性.70例浸润性乳腺癌组织pAkt水平在HER-2阴性组(18.8％,6/32)、不确定组(37.5％,6/16)和阳性组(68.2％,15/22)间差异有统计学意义,P＝0.000.淋巴结转移组和未转移组中pAKT的阳性表达也差异有统计学意义,P=0.009.结论:pAkt在浸润性导管癌组织中的表达频率显著高于导管原位癌,其表达水平与HER-2的表述水平呈正相关,并可能与肿瘤淋巴结转移的发生有关.
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共刺激分子B7.1和葡萄球菌肠毒素A膜表面共修饰瘤苗抗肿瘤作用的研究
目的观察跨膜型葡萄球菌肠毒素A( SEA-TM)和糖基化磷脂酰肌醇锚定型mB7.1(mB7.1-GPI)二种免疫分子膜表面修饰瘤苗的抗肿瘤作用是否优于单种免疫分子膜表面修饰的瘤苗.方法构建pcDNA3.1(+)/mB7.1-GPI真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)中,表达和纯化mB7.1-GPI.通过蛋白转染法将SEA-TM、 mB7.1-GPI单独或共同锚定到EL-4肿瘤细胞膜上,制成瘤苗,观察这些瘤苗刺激小鼠脾细胞的增殖和分泌白细胞介素(IL)-2和γ干扰素(IFN)-γ的量及抗肿瘤作用.结果 mB7.1-GPI和SEA-TM能单独或共同锚定在肿瘤细胞膜上,具有相当的稳定性;在体外有刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ的功能.mB7.1-GPI、SEA-TM、mB7.1-GPI+SEA-TM锚定肿瘤细胞,制成的瘤苗, 能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长和延长荷瘤小鼠的存活时间.mB7.1-GPI和SEA-TM双锚定瘤苗,显示出比单一蛋白锚定瘤苗更强的抗肿瘤作用.结论用蛋白转染法将 SEA和mB7.1二种免疫分子同时锚定到肿瘤细胞膜上所制成的瘤苗,其抗肿瘤作用优于单种免疫分子锚定的瘤苗.
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PTEN及Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义
目的:探讨PTEN及Bcl-2蛋白在膀胱移行细胞癌的表达规律及其临床意义.方法:应用免疫组织化学链亲和素-生物素-霉复合物(SP)方法检测43例膀胱移行细胞癌和7例正常黏膜组织中PTEN及Bcl-2蛋白的表达,分析二者的表达与膀胱癌病理参数的关系.结果:(1)G1、G2、G3肿瘤PTEN表达阳性率分别为85.7%、80.4%、73.3%,浸润性肿瘤和表浅性肿瘤表达阳性率分别为70.4%和93.8%,说明PTEN表达阳性率与肿瘤病理分级、临床分期有关.(2)G1、G2、G3肿瘤Bcl-2表达阳性率分别为14.2%、57 14%、66.67%,浸润性肿瘤和表浅性肿瘤表达阳性率分别为59.3%和43.8%,说明Bel-2表达阳性率与肿瘤病理分级、临床分期有关.(3)随着肿瘤恶性程度的增高和临床分期进展,PTEN蛋白阳性率呈下降,Bcl-2表达呈增高趋势,二者表达呈负相关关系.结论:PTEN的抑癌作用可能与Bcl-2有关,二者的异常表达在膀胱移行细胞癌的发生、发展过程中起重要作用.二者同时检测有助于判断预后.
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喉癌中肝细胞再生磷酸酶-3的表达及与微血管密度的相关性
目的:探讨在喉鳞状细胞癌中肝细胞再生磷酸酶-3(PRL-3)和微血管密度(MVD)的相关性.方法:采用免疫组化SABC法检测69例喉鳞状细胞癌组织和25例相应癌旁组织中PRL-3的表达情况,并用CD105标记MVD,研究PRL-3的表达及MVD计数与喉鳞癌临床病理特征的关系,采用Spearman等级相关分析PRL-3表达与MVD的相关性.结果:PRL-3在癌组织中的阳性表达率(65.22%)高于癌旁组织(8%),差异有统计学意义(P<0.01).癌组织中有淋巴结转移患者的PRL-3阳性率和MVD计数明显高于尤淋巴结转移患者,病理分期为Ⅲ～Ⅳ期的PRL-3和MVD高于Ⅰ～Ⅱ期,差异均有统计学意义(P<0.05).PRL-3的表达与MVD计数呈正相关(r=0.811,P<0.01).结论:PRL-3可能作为一种新的肿瘤标志物来监控喉鳞状细胞癌的发生、浸润和转移.
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肝癌组织中PTEN蛋白及hTERT表达相关性研究
目的探讨肝癌组织及癌旁肝组织中10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶(PTEN)蛋白的表达与人端粒酶逆转录酶(hTERT)的相关性.方法采用免疫组织化学法检测76例肝细胞癌(HCC)及癌旁肝组织中PTEN蛋白和hTERT的表达.结果①HCC中PTEN蛋白的阳性率(38.2%)和阳性强度明显低于癌旁肝组织(96.1%)(P＜0.01),且阳性信号强度与HCC分化程度相关(P＜0.01),即HCC分化愈差,PTEN蛋白表达愈弱.②HCC中hTERT的阳性率(89.5%)和表达强度明显高于癌旁肝组织(7.9%)(P＜0.01),且阳性信号强度与HCC分化程度有关(P＜0.01).③相关性分析表明,HCC及癌旁肝组织中PTEN蛋白表达强度和hTERT呈明显负相关(P＜0.01).结论提示在HCC发生中,可能由于PTEN蛋白表达降低或缺失,不能有效地抑制由致癌因子异常激活的hTERT,从而使肝细胞异常增殖和发生恶性转化.
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狼疮样肾炎小鼠脾细胞钙调磷酸酶活性检测及Th2细胞因子表达变化
目的:检测狼疮样肾炎小鼠脾细胞中钙调磷酸酶( CaN)活性,探讨 CaN与肾炎小鼠脾细胞 IL-6、IL-10表达的关系.方法:采用慢性移植物抗宿主小鼠( GVHD)模型, CaN活性检测采用发色底物法.结果:(1)模型组血清抗 ds-DNA抗体 BI值显著升高,与正常组比差异有显著性 ( P< 0.05); FK506组 BI值与正常组比较,差异无显著性.(2)狼疮样肾炎小鼠脾脏中 CaN活性与血清中抗 ds-DNA抗体呈正相关关系 (r=0.925, P< 0.01).(3)脾细胞自身增殖反应性模型组明显高于正常组 ( P< 0.05), FK506组与正常组比较,差异无显著性 (P >0.05); FK506显著抑制刀豆蛋白 (ConA)诱导的脾细胞增殖反应性,与模型组比较,差异有显著性 ( P< 0.05).(4)模型组脾细胞中 CaN活性显著增强,与正常组比较差异有显著性 (P< 0.05); FK506组脾细胞 CaN活性明显降低,与模型组比较差异有显著性 ( P< 0.05).(5)模型组小鼠脾细胞 ConA诱导分泌 Th2细胞因子 IL-6、IL-10水平显著高于正常组及 FK506组.结论:狼疮样小鼠脾细胞存在 CaN过度活化, Th2细胞因子高表达与其 CaN过度活化密切相关,通过阻断 CaN活性可调控狼疮样小鼠脾细胞的活化.
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银杏叶制剂对恢复岗田酸损伤鼠脑谷氨酸转运体功能的作用
目的:探讨岗田酸所致的氧化应激反应与谷氨酸转运体功能的关系及银杏叶制剂的影响.方法:采用侧脑室注射岗田酸法测定假手术对照组、岗田酸注射组、岗田酸注射组加银杏叶制剂组皮层、海马谷氨酸转运体功能的变化及SOD活性,MDA含量的变化.结果:岗田酸注射组谷氨酸转运体功能降低(P＜0.05),SOD活性降低(P＜0.05),MDA含量升高(P＜0.05),岗田酸注射组加银杏叶制剂组,谷氨酸转运体功能较岗田酸注射组有明显恢复(P＜0.05),与对照物无明显差异.SOD活性回升(P＜0.05),MDA含量下降(P＜0.05).结论:大鼠注射岗田酸后,皮层、海马谷氨酸转运体功能降低,可能与氧化应激产生的自由基有关,银杏叶制剂通过抗氧化应激反应,恢复谷氨酸转运体功能来发挥保护作用.
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PTEN与缺血性脑损伤的研究进展
第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)作为抑癌基因,可以抑制肿瘤细胞的生长.目前研究发现,它在脑组织中表达,并可与NMDR受体亚单位NR1、NR2B相互结合.在缺血性脑损伤时下调PTEN可保护神经元.现就目前PTEN与缺血性脑损伤的研究作一综述.
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pTet-on-PTEN-U87MG胶质瘤细胞系的构建
目的 建立高诱导、低背景的pTet-on-PTEN-U87MG神经胶质瘤细胞系.方法 pTet-on质粒经脂质体介导稳定转染PTEN缺失的U87MG细胞系,G418筛选,荧光素酶活性分析,挑选阳性单克隆,建立pTet-on-U87MG细胞系;然后,pTRE-PTEN反应质粒经脂质体介导稳定转染pTet-on-U87MG细胞系,潮霉素筛选,荧光素酶活性分析,挑选阳性单克隆,构建pTet-on-PTEN-U87MG细胞系.结果 成功构建pTet-on-PTEN-U87MG细胞系.结论 pTet-on-PTEN-U87MG神经胶质瘤细胞系的建立,为进一步研究神经胶质瘤发病相关因素及PTEN相关的信号传导机制,提供较为理想的细胞模型.
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异硫氰酸苯乙酯对结肠癌细胞PTEN及MMP-9表达的影响
目的：观察异硫氰酸苯乙酯（PEITC）对结肠癌细胞磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）以及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法体外培养结肠癌细胞系SW480，分别用10、30、50μmol/L PEITC作用24 h，采用实时定量聚合酶链反应（real-time PCR）和荧光素酶报告基因分别检测PTEN 和MMP-9 mRNA 的表达；采用蛋白质印迹法（western blotting）检测MMP-9和PTEN蛋白表达。结果 PEITC可抑制MMP-9蛋白表达，同时能降低MMP-9的转录活性。此外，不同浓度PEITC处理后，可明显诱导细胞内PTEN的表达，其中50μmol/L PEITC处理后，PTEN mRNA含量可增高5.1倍。结论 PEITC能影响结肠癌细胞PTEN和MMP-9的表达。
