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重楼皂苷Ⅱ溶血作用机制的研究
该文旨在探讨阴离子通道蛋白和葡萄糖转运蛋白1介导的重楼皂苷Ⅱ(polyphyllinⅡ,PPⅡ)的溶血作用,初步揭示PPⅡ体外溶血作用机制.实验采用分光光度法检测PPⅡ体外溶血,设计了与阴离子通道相关的溶液与阻断剂、葡萄糖通道相关的抑制剂和多靶点药物脱氢表雄酮与安定对PPⅡ溶血的影响3个方面的主要内容;通过扫描电镜和透射电镜观察PPⅡ对红细胞形态的影响.电镜观察显示PPⅡ处理的红细胞变形严重,出现大量球形红细胞和棘形红细胞以及囊泡.PPⅡ体外溶血试验结果显示,阴离子盐渗液LiCl,NaHC03,Na2 S04和PBS均显著抑制PPⅡ溶血(P＜0.05),阻断剂NPPB和DIDIS显著促进PPⅡ溶血(P＜0.01);一定浓度下的高渗液氯化钠、果糖和葡萄糖显著拮抗PPⅡ溶血(P＜0.05);葡萄糖通道抑制剂细胞松弛素B和维拉帕米能显著拮抗PPⅡ溶血(P＜0.01);预处理1 min的1 mg· L-1安定和100 μmol·L-1 DHEA能完全拮抗PPⅡ溶血(P＜0.01).以上结果表明PPⅡ体外溶血的机制可能是以GLUT1为主要的竞争性作用位点,通过改变阴离子通道转运活性和构象,终引起胞内渗透压升高,红细胞破裂溶血.
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缺氧诱导因子-1α在胰腺癌中的作用
目的:探讨缺氧环境下胰腺癌细胞胰腺癌肿瘤细胞株SW1990中缺氧诱导因子HIF-1α、血管生长因子VEGF、葡萄糖转运体GLUT1、和耐药基因MDR1的变化,并阐明其中可能存在的分子调控机制.方法:将胰腺癌肿瘤细胞株SW1990分为常氧组和化学诱导缺氧组(CoCl2诱导),分别采用RT-PCR方法和Western blot方法观察两组HIF-1α、VEGE、GLUT1及MDR1基因和蛋白的表达;再分别将两组分为对照组、空白质粒转染组和HIF-1α/PCDNA3.0质粒转染组,观察上述因子的基因和蛋白水平表达的变化.结果:化学诱导的缺氧能明显诱导细胞HIF-1α蛋白的表达(P=0.0089),但对其mRNA的表达没有明显影响(P=0.057);缺氧时胰腺癌肿瘤细胞株SW1990中的VEGF(P=0.046,0.039)、GLUT1(P=0.0024,0.036)、MDR1(P=0.021,0.038)基因和蛋白的表达水平都明显增高.转染质粒的缺氧组与常氧组相比,HIF-1α、VEGF、GLUT1、MDR1的基因与蛋白水平都相应的有所增高.结论:缺氧时,胰腺癌细胞通过上调HIF-1α的表达引起其下游的靶基因VEGF、GLUT1和MDR1的表达,从而耐受缺氧并进一步恶性进展.
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葡萄糖转运体p63和DNA蛋白激酶在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其意义
目的 研究在卵巢浆液性肿瘤中葡萄糖转运体(GLUT-1)、p63和DNA蛋白激酶(DNA-PKcs)的表达及其意义.方法 应用免疫组织化学的方法检测卵巢浆液性肿瘤中GLUT-1、p63和DNA-PKcs的表达,用χ2检验分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性.结果 正常卵巢组织中,GLUT-1、p63表达均为阴性,DNA-PKcs表达为阳性.GLUT-1、p63在恶性卵巢浆液性肿瘤中的表达明显高于良性和交界性卵巢浆液性肿瘤,差异有统计学意义(P＜0.01);DNA-PKcs在良性、交界性、恶性卵巢浆液性肿瘤中的阳性表达率分别为95.0%、90.0%和60.0%,差异有统计学意义(P＜0.01).GLUT-1表达与年龄、临床分期、腹腔种植、腹水、淋巴结转移均相关(P＜0.05);p63除与腹水无关外,与其他临床病理参数均有关(P＜0.05);DNA-PKcs仅与临床分期和淋巴结转移有关(P＜0.05),与腹水、腹腔种植无关(P＞0.05).结论 GLUT-1、p63和DNA-PKcs的异常表达与卵巢浆液性肿瘤的生长、恶变、侵袭及转移均有密切关系,有望成为卵巢浆液性肿瘤恶变的标志物.
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Tim-3对巨噬细胞葡萄糖转运体1表达的调节机制研究
目的 探讨T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子-3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecule-3,Tim-3)对巨噬细胞葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)的表达及其对细胞功能的影响,并初步探索其影响机制.方法 使用Tim-3 siRNA敲低Raw264.7细胞系观察GLUT1蛋白的表达,随后使用不同浓度Tim-3融合蛋白、Tim-3激动抗体,阻断和激活小鼠源巨噬细胞系Raw264.7,在基因和蛋白水平观察GLUT1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)、Tim-3以及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)4项指标的变化.结果 Tim-3敲低的Raw264.7细胞系GLUT1蛋白表达水平明显升高;激活、抑制巨噬细胞Tim-3信号能分别抑制和促进GLUT1、TNF-α的基因和蛋白表达以及GAPDH基因表达,但Tim-3的基因和蛋白水平以及GAPDH蛋白水平并无显著变化.结论 Tim-3负调控巨噬细胞GLUT1表达,进一步影响TNF-α分泌,参与TNF-α转录后调控的GAPDH可能参与其中的调节机制.
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葡萄糖转运体I在大肠癌组织细胞中的表达水平及对葡萄糖摄取的影响
目的：研究葡萄糖转运体(Glut1)在大肠癌细胞系及临床样本中表达水平，并探讨其与大肠癌发生发展的相关性。方法采用Western blotting法分别检测大肠癌细胞系及大肠癌组织中Glut1蛋白表达水平；采用免疫组化方法检测Glut1蛋白表达水平；采用葡萄糖检测试剂盒检测大肠癌细胞葡萄糖的消耗。结果 Western blot结果显示：与癌旁组织相比， Glut1的表达水平明显升高(P<0.05)；与正常肠粘膜细胞相比，大肠癌细胞系中Glut1的表达水平明显升高。免疫组化结果显示：与癌旁组织相比， Glut1的表达水平明显升高(P<0.05)，而且其表达水平与大肠癌的病理分期密切相关(P<0.05)。葡萄糖检测结果显示：与正常大肠粘膜细胞相比，大肠癌细胞培养液中葡萄糖的含量明显减少。结论 Glut1的表达水平与大肠癌的发生发展成正相关。
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细针穿刺标本中葡萄糖转运体1基因检测在诊断甲状腺癌中的价值
目的:探讨葡萄糖转运体l (glucose transporter 1,GLUT1)基因检测在术前鉴别甲状腺良恶性结节中的价值.方法:采用RT-qPCR检测112例甲状腺结节(42例良性,70例恶性)和52例结节周边正常甲状腺细针穿刺(fine needle aspiration,FNA)标本中GLUT1 mRNA的表达量,然后采用免疫组织化学方法检测术后病理组织中GLUT1蛋白的表达情况.构建受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评价GLUT1基因对甲状腺癌的诊断价值.结果:甲状腺结节FNA标本中可以检测出GLUT1 mRNA的表达,且其与术后免疫组化GLUT1蛋白的表达水平相一致.PCR结果表明GLUT1基因在良性结节与正常甲状腺细胞之间的表达水平无显著性差异(P＞0.05).与良性结节相比,甲状腺癌中GLUT1基因表达水平显著增高(P＜ 0.001).GLUT1基因诊断甲状腺癌的敏感性、特异性及ROC曲线下面积(AUC)分别为62.9％、92.9％和0.797.甲状腺癌中GLUT1基因表达与年龄、性别、肿瘤大小、结节数目、BRAFV600E突变和淋巴结转移均未见明显相关性(P＞ 0.05),但与AJCC分期显著相关(P＜0.001).结论:GLUT1基因检测对甲状腺癌的诊断具有较高的特异性,可作为术前鉴别甲状腺良恶性病变的重要参考指标.
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缺氧诱导宫颈癌Hela细胞的生物学行为改变
[目的]研究缺氧引起的糖酵解改变对宫颈癌Hela细胞生物学行为的影响.[方法]CoCl2化学诱导宫颈癌Hela细胞缺氧,将实验对象分为常氧组和缺氧组.用MTT法、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪、跨膜侵袭实验等方法观察两组细胞的增殖、克隆、凋亡和侵袭能力;用酶比色法检测细胞培养液上清中HKⅡ和乳酸值.免疫细胞化学法和Western blot法分别检测两组HIF-1α、GLUT1的表达,RT-PCR检测两组HIF-1α、GUIT1及HKⅡ基因表达水平.[结果]缺氧组与常氧组相比,缺氧组细胞生长增殖活跃、凋亡率下降、跨膜细胞数增加,差异有显著性意义(P<0.05).缺氧组中HKⅡ和乳酸值较常氧组明显升高(P<0.05).缺氧诱导后,HIF-1α基因表达水平无明显变化(P>0.05),蛋白表达水平明显升高(P<0.05),GLUT1基因和蛋白在缺氧诱导后表达水平都明显升高(P<0.05).[结论]氧微环境下宫颈癌Hela细胞增殖、抗凋亡、侵袭能力加强,可能与缺氧诱导后HIF-1α蛋白不宜降解,细胞糖酵解能力加强有关.
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GLUT-1和MCT-4与CAⅨ在喉鳞状细胞癌中的初步研究
目的:本文旨在评估与代谢相关的葡萄糖转运体1(GLUT-1)、单羧酸转运体4(MCT-4)和碳酸酐酶9(CAⅨ)在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义.方法:收集经手术切除的40例喉鳞状细胞癌组织及10例癌旁组织,并对临床资料进行整理分析.应用免疫组织化学方法检测GLUT-1、MCT-4与CAⅨ在40例喉鳞状细胞癌和10例癌旁组织中的表达情况,评估它们与临床病理学资料的关系.所有数据采用SPSS21.0统计学软件进行分析.结果:在40例喉鳞状细胞癌组织中GLUT-1、MCT-4和CAⅨ的阳性表达率分别为72.5％、75.0％和55.0％.其中,MCT-4在正常组织中表达较低或几乎不表达,而GLUT-1在正常组织中具有干细胞活性的基底细胞层高表达.GLUT-1、MCT-4和CAⅨ的阳性表达与病理分级密切相关(均P＜0.05),其中低分化的喉鳞状细胞癌中的阳性表达率远高于高分化组.此外,在40例喉鳞状细胞癌组织中MCT-4和CAⅨ的阳性表达和TNM分期相关,差异有统计学意义(均P＜0.05).MCT-4和CAⅨ在Ⅲ～Ⅳ期的表达率远高于Ⅰ～Ⅱ期.GLUT-1、MCT-4和CAⅨ的表达与患者的年龄、吸烟量及有无淋巴结转移及肿瘤的位置无关(P＞0.05),GLUT-1、MCT-4和CAⅨ呈正相关.结论:葡萄糖摄取与酸性微环境在喉鳞状细胞癌代谢重塑和肿瘤的侵袭及演进密切相关,因此,在缺氧的微环境下靶向与代谢相关的蛋白质或许是治疗侵袭性肿瘤的有效策略.
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大鼠GLUT1基因的扩增及其重组腺病毒载体的构建
目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-Glut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-Glut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒.结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-Glut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及Western blotting检测表明重组腺病毒包装成功.结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制.
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GLUT-1和DNA-PKcs在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其意义
背景与目的:已知肿瘤细胞生长所需能量是通过葡萄糖转运体蛋白1(glucose transporter protein 1,GLUT-1)完成的葡萄糖代谢来提供的.另外,参与基因损伤修复的催化亚单位--DNA蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA-PKcs)在肿瘤形成中也起着非常重要的作用.本研究旨在探讨GLUT-1和DNA-PKcs在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达及其与肿瘤生物学行为的关系和意义.方法:免疫组化方法检测80例卵巢浆液性肿瘤组织中GLUT-1、DNA-PKcs的表达,分析其异常表达与临床病理参数之间的相关性.以正常卵巢组织20例为对照.结果:正常卵巢组织GLUT-1表达全阴性,DNA-PKcs表达全阳性.GLUT-1在良性、交界性、恶性卵巢浆液性肿瘤中的表达呈增高的趋势,与卵巢浆液性肿瘤的发生发展呈正相关(rs=0.943,P＜0.01);在恶性肿瘤中的阳性率(100%)明显高于交界性(55%).DNA-PKcs在良性、交界性和恶性卵巢浆液性肿瘤中的阳性率分别为95%、90%、60%,差异有统计学意义(P＜0.01).GLUT-1与DNA-PKcs的表达呈负相关(rs=-0.270,P＜0.01).GLUT-1表达与临床分期、腹腔种植、腹水、淋巴结转移均相关(P＜0.05);DNA-PKcs仅与临床分期和淋巴结转移相关(P＜0.05),与腹水、腹腔种植无关(P＞0.05).结论:GLUT-1的异常表达和DNA-PKcs的丢失与卵巢浆液性肿瘤恶变相关.
关键词： 卵巢肿瘤 免疫组化 葡萄糖转运体1 依赖DNA蛋白激酶的催化亚单位 -
大鼠脑缺血/再灌注过程中脑型葡萄糖转运体在缺血半影区的表达
[目的]研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗死体积比、皮质半影区脑型葡萄糖转运体(GLUT1、GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达.[方法]用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗死体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1、GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1、GLUT3蛋白水平的变化.[结果]脑缺血1 h后再灌注(MCAO1h/R)较缺血3 h再灌注(MCAO3h/R)脑梗死体积明显减小.MCAO1h/R组GLUT1、GLUT3mRNA缺血后升高,24 h到达高峰,但GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大.MCAO3h/R组GLUT1在3 h开始升高,24 h到高峰;GLUT3在缺血3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,一周恢复正常,同样GLUT1比GLUT3提前升高,且升高的幅度更大.MCAO3h/R组较MCAO1h/R组的GLUT1、GLUT3峰值低.GLUT1、3蛋白水平的表达与mRNA相符合.[结论]GLUT1、GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血/再灌注损伤的保护性反应.
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严重烧伤大鼠肝脏葡萄糖转运体1蛋白表达的实验研究
目的探讨严重烧伤大鼠早期肝脏葡萄糖转运体1(Glucose transporter 1,GLUT-1)蛋白及其转录活性的变化和意义.方法采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型,以正常大鼠为参照,Western Blot法检测伤后0.5、1、2、4、8、16 h肝脏总蛋白中GLUT-1的表达;体外转染含有大鼠GLUT-1全长调控序列的报告基因构建体A,24 h后,1%氧浓度诱导表达,以β-半乳糖苷酶为参照,分析报告基因表达强度的变化.结果①与正常对照相比,严重烧伤后1 h大鼠肝脏Glut-1蛋白表达明显增加(增加约1.32倍) (P<0.05),在伤后4～8 h变化为明显,约为正常对照的2倍(P<0.05),烧伤后16 h,GLUT-1蛋白含量降低(P<0.05);②构建体A转染24 h后,缺氧处理3 h,报告基因的表达明显升高,增高约3.19倍(P<0.05),缺氧6 h,报告基因的表达增强2.23倍,与3 h相比无明显差异(P>0.05).本试验观察期内,缺氧处理12 h报告基因的表达强度大,诱导表达倍数约5.34倍,与缺氧3、6 h存在显著差异(P<0.01).结论①严重烧伤以后,大鼠肝脏的GLUT-1蛋白含量增加.②缺氧诱导了大鼠GLUT-1基因5′侧翼区全长序列介导的报告基因的表达.
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具有葡萄糖转运蛋白亲和力的脑靶向文拉法辛前药的合成
目的 为了提高抗抑郁药文拉法辛的脑靶向性,以血脑屏障上的葡萄糖转运蛋白1为靶标,设计并合成了脑靶向性的文拉法辛前药Ⅰ.方法 以文拉法辛为起始原料,通过丁二酸为桥链与三甲硅基保护的葡萄糖偶联,脱去保护基,得到Ⅰ.结果和结论 目标化合物Ⅰ经1HNMR、IR和MS确证结构.
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新生大鼠缺氧缺血脑损伤时脑组织GLUT1表达及神经元凋亡研究
峰,高于对照组(P<0.01).结论 新生大鼠HI后,脑组织GLUT1 mRNA及蛋白表达增高,其高峰早于CC3及凋亡高峰,提示GLUT1上调可能对神经元凋亡具有一定的抑制作用.
