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重要炎性介质高迁移率族蛋白1研究进展
高迁移率族蛋白1(HMGB-1)于20世纪60年代由Johns发现,因其在聚丙烯酰胺凝胶电泳中有很高的迁移率而得名.它是一种在真核细胞中广泛表达并且高度保守的蛋白,主要作为核内非组蛋白,稳定核小体,参与DNA的转录、复制、修复等[1].
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纳升级反相液相色谱串联质谱法分析海马蛋白质组
目的:为了全面了解海龙的蛋白质成分,对其蛋白表达谱进行蛋白质组学分析.方法:应用三氯乙酸/丙酮沉淀法提取海马药材的蛋白质,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离分析,将聚丙烯酰胺凝胶电泳条带切下进行胶内酶解处理后,应用纳升级反相液相色谱串联质谱(nanoRPLC-MS/MS)法系统分析海马提取蛋白质胶内酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质.结果:共鉴定到海马蛋白192种,等电点范围为4.06~12.18,相对分子质量范围为3.06×103~3.52×106,多肽10 680个;通过生物信息学方法分析了海马提取蛋白质的分子功能.得到海马提取物中的蛋白质具有结合、酶催化、肌动、ATP酶等功能活性,其中结合活性的蛋白质占的比例较大.结论:本研究建立了海马的蛋白质表迭谱,可为海马药材中蛋白质的深入研究奠定基础,对海马药材有效成分的分析和海马药材鉴别具有重要意义.
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基因工程单克隆抗体N-端氨基酸序列的测定
目的:建立了具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法.方法:利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,基因工程重组单抗样品在高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭.经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹后在PVDF膜上去封闭处理效果进行比较.结果:测定了17种基因工程单克隆抗体,其中有7个为重链去封闭处理后再进行测序的抗体样品,用2种方法都可顺利去除N-端封闭的焦谷氨酸,从而进行N-端氨基酸序列测定;如果不进行去封闭处理,部分样品无法进行N-端氨基酸序列测定.结论:2种方法都适于N-端具有焦谷氨酸封闭单抗的氨基酸序列分析.
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利用基因座多态性鉴定无双亲寻姐弟的同胞关系
选择6个基因座扩增,聚丙烯酰胺凝胶电泳银染,以及琼脂糖凝胶电泳-HB染色分析带型,由多个同胞的基因座等位基因,逆向推测其父母的相应基因座的4个等位基因,用于同胞间亲权鉴定,确定失散同胞.
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乳品中真蛋白SDS-PAGE检测及鉴定图谱库建立
本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,建立乳品中真蛋白组份和含量的准确检测方法,建立乳制品蛋白质的组分及含量分析的SDS-PAGE图谱库,并制定该数据库相应的判定规则与方法;对待测乳品样品进行相应程序的分析,与标准比对进行乳品质量的判定与评价。如果样品本身质量优良,那就不必进一步进行假蛋白筛查;如果真蛋白检测指标有可疑,产品可能有掺假,就要进行掺假检测。