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寿胎丸对复发性流产模型小鼠子宫蜕膜HSP27和Tf表达的影响
目的:检测寿胎丸对复发性流产模型小鼠子宫蜕膜组织热休克蛋白27(HSP27)及转铁蛋白(Tf)表达的影响,探讨寿胎丸可能作用的环节.方法:建立复发性流产模型,用双相电泳和质谱技术等蛋白质组学技术,寻找出与复发性流产相关的差异蛋白质HSP27、Tf,用Western Blot和免疫组化实验检测寿胎丸对HSP27和Tf蛋白表达的影响.结果:Western Blot和免疫组化结果显示,小鼠模型组与正常组相比,蜕膜HSP27表达明显升高,Tf表达显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01);寿胎丸高、中、低剂量组与模型组相比,蜕膜HSP27表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.01),寿胎丸高剂量组与中、低剂量组相比差异有统计学意义(P＜ 0.01).寿胎丸高剂量组可升高复发性流产小鼠子宫蜕膜Tf的表达,差异有统计学意义(P＜0.01);寿胎丸中、低剂量组子宫蜕膜Tf表达与模型组相比差异无统计学意义;寿胎丸高剂量组与中、低剂量组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论:寿胎丸通过调节上述蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一.
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灯盏花素抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡
目的:现察灯盏花素( breviscapine,bre)对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法:采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型.40只SD大鼠随机分为正常对照组(control)、缺血再灌注组(ischemiareperfusion,IR)和灯盏花素组.灯盏花素组大鼠于术前1周分别腹腔注射不同别全的灯盏花素(25,50 mg·kg-1·d-1 ),另2组给予等I生理盐水.缺血30min、再灌注2h后,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,western blotting检测Caspase-3蛋白表达的变化.结果:缺血再灌注组凋亡指数和Caspase-3蛋白表达较正常对照组明显升高(P<0.01),灯盏花素组各指标较缺血再灌注组降低(P<0.05,P<0.01).结论:灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与通过下调Caspase-3基因表达抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡有关.
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Fibulin-5在主动脉夹层血管壁中的异常表达及其意义
目的：急性主动脉夹层(Aortic dissection，AD)是一种灾难性的心血管疾病，死亡率高，一旦出现症状后24~48小时内，死亡率以每小时1%~2%的速度递增。AD的发病机制尚不明确，目前较公认的是：主动脉中膜纤维结构改变是AD发生的形态学基础。中膜纤维结构主要由弹性纤维组成，其合成受Fibulin-5的调控。因此，我们设想Fibulin-5可能在AD的形成中发挥重要作用。我们通过免疫组织化学、蛋白印记技术检测AD组和对照组Fibulin-5表达差异，并探讨Fibulin-5表达改变与AD形成的关系。
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油酸诱导慢性胰腺炎大鼠肝脏细胞IR及IRS-1蛋白表达的改变
目的:观察慢性胰腺炎(CP)模型大鼠肝脏胰岛素受体(IR),胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白表达的改变,探讨慢性胰腺炎继发性糖代谢异常的可能机制.方法:将用油酸诱导的CP大鼠作为模型组,同法注入生理盐水的大鼠为对照组,Western blot法测定各组大鼠肝细胞IR,IRS-1蛋白表达的改变.结果:模型组IR,IRS-1蛋白的表达较对照组都有明显降低(P＜0.05).结论:胰岛素信号转导异常可能参与了CP继发糖代谢异常的机制.
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寿胎丸对RSA模型小鼠子宫蜕膜Annexin A2及TTR表达影响的研究
目的:分析寿胎丸对复发性流产小鼠蜕膜蛋白质组的影响.方法:建立复发性流产模型.CBA/J×BALB/C建立正常妊娠模型,CBA/J×DBA/2建立复发性流产模型,将复发性流产模型CBA/J×DBA/2孕鼠按怀孕先后顺序随机分为4组,分别为模型组、寿胎丸高剂量组、寿胎丸中剂量组和寿胎丸低剂量组,从妊娠第1d开始灌胃给药,至孕14 d处死小鼠,采用蛋白印迹和免疫组化方法检测差异蛋白质Annexin A2及TTR的蛋白表达.结果:小鼠模型组与正常组相比,蜕膜Annexin A2表达明显降低,TTR表达明显下降,差异有显著统计学意义(P＜0.01);寿胎丸高、中、低剂量组与模型组相比,蜕膜Annexin A2表达均升高,寿胎丸高剂量组蜕膜TTR表达升高,差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论:寿胎丸通过上调Annexin A2、TTR蛋白的表达,从而实现维持妊娠,降低胚胎丢失率,这可能是其安胎的作用机制之一.
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山东省58395例献血者中人类嗜T淋巴细胞病毒感染的检测
目的 了解人类嗜T淋巴细胞病毒(HTLV)在山东省献血人群中的感染情况.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白印记(western blot,WB)法和核酸检测(nucleic acid testing,NAT)技术,对山东省献血者58395份标本进行HTLV感染调查.结果 在58395例献血者中用ELISA法检出31例呈抗体阳性,用WB法进行抗体确证试验结果为阴性,NAT确证病毒阳性为2例,HTLV阳性率为0.0034％.结论 山东省献血人群中存在HTLV感染,输血安全存在隐患,核酸检测为WB检测的有效辅助方法.
关键词： 人类嗜T淋巴细胞病毒感染 献血者 酶联免疫吸附法 蛋白印记 -
油酸诱导慢性胰腺炎大鼠肝脏细胞GLUT2蛋白表达的改变
目的 建立油酸诱导的慢性胰腺炎(chronic pancreatitis, CP)大鼠模型,观察其肝脏葡萄糖载体2(glucose transporter-2, GLUT2)蛋白表达的改变,探讨慢性胰腺炎继发性糖代谢异常的可能机制.方法 用油酸经胰胆管插管灌注的方法诱导CP大鼠模型,对照组大鼠经插管灌注等量生理盐水,Western blot法测定各组大鼠肝细胞GLUT2蛋白表达的改变.结果 模型组GLUT2蛋白的表达较对照组都有明显降低(P＜ 0.05).结论 慢性胰腺炎时GLUT2蛋白表达降低,导致胰岛素信号转导异常,这可能是CP继发糖代谢异常的机制之一.
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黄芩茎叶总黄酮对缺血再灌注损伤大鼠心肌P - STAT蛋白表达的影响
目的 观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对缺血再灌注大鼠心肌信号转导及转录激活因子P- STATI,P- STAT3蛋白表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、SSTF3个剂量组.SSTF组于术前1周灌服不同剂量的SSTF( 17.5,35,70 mg·kg -·d-1),另两组给等量生理盐水.结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.缺血30 min、再灌注2h后,采用电镜观察各组大鼠心肌细胞超微结构的变化,Western blotting技术检测心肌细胞P- STAT1,P - STAT3蛋白表达的变化.结果 与sham组相比,IR组的心肌细胞超微结构损伤明显,P - STAT1蛋白表达增加(P＜0.01),P- STAT3蛋白表达减少(P＜0.01)；与IR组相比,SSTF组细胞超微结构损伤减轻,心肌细胞的P - STATI蛋白表达减少(P＜0.05,P ＜0.01)；P - STAT3蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01).结论 SSTF可以减轻心肌细胞结构损伤,其机制可能与降低P - STAT1蛋白表达,增加P- STAT3蛋白表达有关.
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大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白含量在空间和时间上的变化
目的:研究随着大鼠牙胚的发育,釉原蛋白(Am)在空间和时间上的变化.方法:以重组、纯化的大鼠釉原蛋白为抗原.混入完全/不完全弗氏佐剂,免疫新西兰大白兔;用双向免疫扩散法测抗体效价,将获得的多克隆抗血清经硫酸胺初步纯化后,用Western blot和免疫组化检测大鼠牙胚Am的组织表达特异性.结果:Western blot显示:在大鼠牙胚组织总蛋白中有特异性表达,而在肝、脑、肾组织中没有表达.免疫组化检测,在成釉细胞和发育早期的釉基质中有Am的表达,而在成牙本质细胞和成熟牙釉质、牙本质中无表达.结论:釉原蛋白的表达具有严格的空间和时间依赖性,在牙胚发育早期高表达而在发育后期和已矿化期表达低或无表达.
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CXC 趋化因子受体5及其配体 CXCL13在非小细胞肺癌中的表达及意义
目的：研究 CXC 趋化因子受体5（CXCR5）及其配体 CXCL13在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链式反应法（FQ －PCR）和蛋白印记法（Western blot）检测37例 NSCLC患者癌组织及癌旁组织和21例非炎性正常肺组织 CXCR5及其配体 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达。结果FQ －PCR 及 Western blot 结果显示，癌组织中 CXCR5及其配体 CXCL13 mRNA 及蛋白表达水平均明显高于相应癌旁组织（mRNA：2．92±0．31 vs．1．16±0．18 和2．46±0．28 vs．1．07±0．20，P ＜0．01；蛋白：1．93±0．21 vs．0．93±0．11和2．13±0．33 vs．1．07±0．21，P ＜0．01）。 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达呈正相关（mRNA：r ＝0．648，P ＜0．01；蛋白：r ＝0．669，P ＜0．01）。癌组织 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白阳性表达率显著高于相应癌旁组织（P ＜0．01），且癌组织 CXCR5及 CXCL13 mRNA 和蛋白的表达与肿瘤类型、肿瘤分化程度、是否有淋巴结转移和肿瘤 TNM分期有关（P ＜0．05）；而正常肺组织中均无 CXCR5与 CXCL13 mRNA 及蛋白的表达。结论CXCR5与 CXCL13在NSCLC 患者癌组织、癌旁组织中均高表达，其协同作用可能参与 NSCLC 的发生及发展过程。
关键词： 非小细胞肺癌 CXC 趋化因子受体 5 CXCL13 荧光定量 PCR 蛋白印记 -
肺组织特异性X蛋白在非小细胞肺癌中的表达及与肺癌微转移生物作用的关系
目的：研究肺组织特异性X蛋白（ LunX）在非小细胞肺癌（ NSCLC）患者中的表达，探讨LunX与NSCLC患者肿瘤微转移的关系。方法收集54例NSCLC患者，转移组（ n＝34）为NSCLC并肺门纵隔淋巴结转移，非转移组（n＝20）为NSCLC无肺门纵隔淋巴结转移患者，另选取同期胸部良性病变行手术患者21例为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应法（ FQ－PCR）、蛋白印记法和免疫组织化法检测54例NSCLC患者癌组织、癌旁组织及淋巴结中LunX基因及蛋白的表达。结果 FQ－PCR结果显示转移组患者癌组织、癌旁组织及癌转移淋巴结中LunX mRNA表达量均明显高于非转移组（ P＜0.01）；蛋白印记结果显示转移组癌组织及癌转移淋巴结中LunX蛋白相对表达量较非转移组明显上调（ P＜0.01）；免疫组织化学结果显示转移组癌组织及癌转移淋巴结LunX蛋白表达量明显高于非转移组（P＜0.01），两组癌旁组织在蛋白印迹及免疫组化表达上差异无统计学意义，而对照组肺组织及肺门纵隔淋巴结无LunX mRNA及蛋白表达。结论 LunX在NSCLC患者癌组织、癌旁组织及淋巴结中均有表达，其表达的上调可能参与NSCLC患者肿瘤微转移的发生发展过程。
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人颗粒溶素的原核表达
目的 克隆人颗粒溶素基因并进行原核表达.方法 体外培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶索的基因片段,鉴定正确后构建原核表达质粒pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,并将其转入大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定融合蛋白的正确性.结果 成功构建了原核表达载体pET-GNLY9K和pET-GNLY15K,经诱导在原核表达系统中高效表达了相应分子质量分别约为31和37kD的融合蛋白.结论 利用原核表达体系成功表达了不同相对分子质量的颗粒溶素融合蛋白.
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Survivin和VEGF在肾细胞癌中的表达及意义
目的 探讨Suvrivin、VEGF蛋白在肾细胞癌发生和进展中的作用.方法 采用免疫组化SP法和蛋白印记法检测10例正常肾脏组织,32例肾癌组织中Survivni、VEGF蛋白的表达.结果 Survivin和VEGF 在肾癌组织中的阳性表达率为53.1%和34.4,在正常肾组织中均不表达,其表达随肿瘤的临床分期、病理分级的增高而增强,两者表达水平间呈正相关关系(P=0.018).RCC组织经Western-blot技术检测后均表现为包含有1条相对分子量约为16.5 kD及21 kD的特异性条带,而正常肾组织经Western- blot技术检测后呈低表达或不表达状态.结论 肾癌组织中Survivin与VEGF的表达均上调,共同参与肾癌的发生和发展,联合检测肾癌组织Survivin和VEGF的表达对判定预后和指导治疗有一定意义.
