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参芎葡萄糖注射液对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用
目的:探讨参芎葡萄糖注射液(Shenxiong glucose injection,SGI)对H2O2诱导的人脐静脉上皮细胞(HUVEC)细胞氧化模型损伤的保护作用及其机制.方法:体外培养HUVEC人脐静脉内皮细胞,用H2O2(130 mmol·L-1)处理0.5h,建立HUVEC细胞H2O2氧化损伤模型.SGI组HUVEC细胞用(6％,8％,10％) SGI预处理6h后,再用H2O2处理0.5h.用MTS法检测细胞存活率;用ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力;用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Westernblot)技术检测凋亡相关基因及蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA和蛋白表达情况.结果:在130 mmol·L-1 H2O2作用细胞0.5h的情况下,细胞存活率降低至50％左右,降低的程度合适,且实验结果重复性好,因此后续实验用该条件建立氧化损伤模型.与H2O2组比较,SGI预处理6h能显著升高细胞存活率(P ＜0.05,P＜0.01),减少LDH的外漏和MDA的生成(P ＜0.05,P＜0.01),显著增加SOD,GSH-Px和CAT的活性(P＜0.05,P＜0.01).RT-PCR和Western blot结果表明,SGI能显著上调Bcl-2的表达(P ＜0.05,P＜0.01),下调Caspase-3,Bax的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:参芎葡萄糖注射液能保护HUVEC细胞对抗H2O2诱导的氧化损伤,具有一定的剂量依赖关系,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关.
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荭草花提取物对H2O2诱导的HUVEC细胞氧化损伤的保护作用研究
该文首先建立了人脐静脉内皮细胞(HUVEC)过氧化氢(H2O2)氧化损伤模型,并筛选了荭草花提取物的低、中、高给药剂量来评价荭草花提取物对H2O2所致HUVEC细胞氧化损伤的保护作用并探讨其机制.采用MTS法检测HUVEC细胞活力;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活力;qRT-PCR和Western blot法分别测定Bcl-2,Bax的mRNA及蛋白水平;Western blot法测定cleaved caspase-3的蛋白水平.结果表明,120 μmol·L-1 H2O2作用0.5h后,HUVEC细胞存活率下降至55％左右,并且使HUVEC细胞的LDH漏出量、MDA含量增加,SOD及CAT活性降低.此外,H2O2还能上调HUVEC细胞中促凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平和Bax的mR-NA及蛋白水平,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白水平.与H2O2模型组相比,50～200 mg·L-1荭草花提取物预处理24 h能明显增加氧化损伤后细胞存活率,降低LDH漏出量、MDA含量,提高SOD及CAT活性,下调促凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平和Bax的mRNA及蛋白水平,并上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的mRNA及蛋白水平.实验结果提示,荭草花提取物对H2O2所致的HUVEC细胞氧化损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关.
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缝隙连接蛋白43在X射线诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用及机制研究
目的 研究缝隙连接蛋白43(Cx43)在X射线致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡中的作用并探讨其机制.方法 采用流式细胞术检测10 Gy X射线照射后48 ～96 h以及不同剂量X射线照射后72 h HUVEC细胞凋亡的变化.Western blot检测0、5、10、20Gy X射线照射后72 hHUVEC中Cx43和cleaved caspase-3蛋白的表达.采用RNA干扰技术使细胞Cx43表达沉默,或转染Cx43高表达质粒使Cx43过表达.流式细胞术和Western blot分别检测Cx43沉默和过表达对受照HUVEC凋亡的影响以及cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化.结果 X射线照射后48～96 hHUVEC凋亡增加并且呈现剂量依赖性.在0～20 Gy范围内,Cx43表达随剂量增加而降低,cleavedcaspase-3表达随剂量增加而增高.Cx43沉默组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显高于无意义序列组(t =3.674、6.375,P＜0.05);Cx43过表达组HUVEC细胞早期凋亡及凋亡死亡细胞比例明显低于空载体组(￡=9.399、11.190,P＜0.05);Cx43沉默组较无意义序列组cleavedcaspase-3表达增强,而过表达组低于空载体组.结论 Cx43通过调控cleaved caspase-3活化,抑制HUVEC细胞凋亡,从而对X射线照射的HUVEC细胞发挥保护作用.
关键词： X射线 HUVEC细胞 Cx43 凋亡 Cleaved Caspase-3 -
血栓通胶囊对氧糖剥夺/复氧致HUVEC细胞紧密连接损伤的改善作用
目的 采用氧糖剥夺(OGD)致HUVEC细胞损伤模型,考察三七总皂苷(PNS)及其单体 Rg1、Rb1对氧糖剥夺致血管内皮紧密连接损伤的保护作用.方法 HUVEC细胞接种于Transwell细胞小室,待细胞融合后,设立实验组别:正常对照组、模型组、PNS 10、20、40 mg/L组以及 Rb113.52 mg/L、Rg112.44 mg/L组,于缺氧同时进行药物干预,氧糖剥夺6 h复氧24 h后,检测HUVEC内皮细胞电阻值以及内皮渗透性的变化;采用激光共聚焦显微镜,免疫荧光法检测 HUVEC细胞 ZO-1、claudin-5蛋白表达的变化.结果 与正常对照组相比,HUVEC细胞缺氧6 h复氧24 h后内皮细胞间紧密连接电阻显著降低,细胞渗透性显著升高(P< 0.05).PNS 20、40 mg/L组能够显著抑制模型组紧密连接电阻的降低,抑制HUVEC细胞渗透性的升高(P< 0.05).人参皂苷Rb1能够显著升高OGD 6 h复氧24 h后内皮紧密连接电阻,降低HUVEC细胞渗透性(P< 0.05).免疫荧光检测结果显示,正常对照组HUVEC 细胞的ZO-1及claudin-5蛋白主要分布于细胞膜周围,排列连续,显示出内皮细胞的典型铺路石排列.缺氧6 h复氧24 h损伤后,模型组细胞边缘的紧密连接蛋白显著减少,环形结构断裂,甚至消失,细胞核内紧密连接蛋白呈增加趋势.PNS 20、40 mg/L及Rb113.52 mg/L可观察到细胞间紧密连接局部恢复,呈铺路石样结构.结论 PNS 对缺血致血管内皮细胞间紧密连接损伤有保护作用.
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人可溶性粘附素5截短体的克隆、表达及生物活性测定
目的:克隆和转染人可溶性粘附素5截短体(sCadherin5△),并检测其生物活性.方法:RT-PCR扩增Cadherin5△cDNA,并克隆入pMSCV逆转录病毒载体,构建pMSCV/sCadherin5△,转化感受态大肠杆菌XL-blue菌株,提取、纯化和酶切质粒,测序分析sCadherin5△,转染NIH3T3细胞,mRNA和蛋白质水平检测NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,MTT方法检测sCadherin5△生物活性.结果:PCR产物约为1 128 bp,构建了pMSCV/sCadherin5△质粒载体,序列测定的结果与GeneBank中Cadherin5胞膜外区121 bp至1 248 bp之间的序列一致.pMSCV/sCadherin5△转染的NIH3T3细胞表达和分泌sCadherin5△,sCadherin5△抑制HUVEC细胞体外增殖.结论:克隆、表达和分泌了具有生物活性的人sCadherin5△.
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Arresten对人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其作用机制
背景与目的:Arresten是近年发现的血管生成抑制因子,它能抑制裸鼠移植瘤的生长和转移.本文探讨arresten对人脐静脉内皮细胞huvec增殖的影响及其相关机制.方法:应用MTT法测试细胞的生长曲线,检测不同浓度的arresten对huvec细胞增殖的影响,流式细胞仪检测arresten对huvec细胞凋亡的影响,半定量RT-PCR及Western-blot分别检测人脐静脉内皮细胞的VEGF在 mRNA水平及蛋白水平的表达.结果:MTT比色法显示,arresten对huvec细胞增殖具有抑制作用并呈浓度依赖性,但当其浓度增加到800ng/L后其增殖抑制率不再提高,而此浓度时huvec细胞的凋亡率达到峰值的59%;经过arresten处理,huvec细胞的VEGF在mRNA及蛋白水平的表达量均显著下降.结论:arresten通过降低huvec细胞的VEGF表达抑制huvec细胞增殖并促进huvec细胞凋亡.
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基于共培养技术的肿瘤微血管细胞模型的建立
目的建立可研究肿瘤微血管的分子学特性及结构特性的细胞模型,应用于药物筛选及靶向药物输送的研究.方法通过TRANSWELL共培养肿瘤细胞MCF-7和内皮细胞HUVEC的方法,建立肿瘤微血管细胞模型,检测了该模型下的细胞形态、结构、及通透性的变化.结果在肿瘤细胞共生条件下的内皮细胞层结构疏松,微环境呈明显酸性,而且细胞间隙增大,对100纳米左右粒子的通透性有显著提高.结论这一细胞模型的建立将有助于肿瘤血管的分子、结构特性以及相关药物的筛选和输送研究.
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血管生成抑制因子arresten抑制huvec细胞增殖和迁移的实验研究
目的 探讨arresten对人脐静脉内皮细胞huvec增殖和迁移的影响,了解其抑制血管生成的途径.方法 采用MTT比色法,观察不同浓度的arresten对huvec细胞增殖的影响,Transwell小室检测arresten对huvec细胞迁移的影响.结果 MTT比色法显示,arresten对huvec细胞增殖具有抑制作用,随着浓度的增加,arresten对huvec细胞增殖抑制作用也增强,但当其浓度增加到800 μg·L-1后其增殖抑制率不再提高;arresten浓度为0、400 μg·L-1及800 μg·L-1时迁移至Transwell小室膜下的huvec细胞数分别为105±8、77±9、53±6(0.05＞P＞0.01).结论 arresten能够抑制huvec细胞的增殖和迁移,这可能是其抑制血管生成的途径之一.
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降钙素基因相关肽通过ERK1/2信号通路对人血管内皮细胞增殖的影响
[目的]探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响,并从ERK1/2信号通路角度初步探讨其可能的机制.[方法]实验分为4组,分别为空白对照组、CGRP组、CGRP+CGRP 8-37组、CGRP+PD98059组.AlarmarBlue法检测各组人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)的增殖变化情况；免疫印迹技术观察CGRP诱导后ERK1/2的磷酸化,及CGRP8-37、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响.[结果](1) CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,该作用可被CGRP8-37和PD98059阻断；(2) CGRP可时间依赖性地诱导HUVECs细胞ERK1/2的磷酸化,CGRP8-37和PD98059可减弱其作用.[结论]CGRP可诱导HUVECs细胞增殖,ERK1/2信号通路参与其调控机制.
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地鳖纤溶蛋白对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞VEGF和bFGF表达的影响
目的 研究地鳖纤溶蛋白(EFP)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人肺癌(A549)、乳腺癌（MCF -7）细胞分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的影响.方法 采用含药血清体外培养人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞,通过MTr法和双抗夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)观察地鳖纤溶蛋白对细胞的体外增殖和分泌VEGF和bFGF的影响.结果 EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞有显著抑制作用,ELISA法检测结果表明EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞、肺癌、乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用.结论 EFP可抑制肿瘤细胞VEGF和bFGF表达.
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白藜芦醇对脂多糖诱导血管内皮细胞凋亡影响
目的 探讨白藜芦醇对脂多糖(LPS)致人脐静脉血管内皮(HUVEC)细胞凋亡保护效应以及对凋亡相关蛋白Bax影响.方法 LPS 1μg/ml刺激HUVEC细胞24 h建立凋亡模型,之后给予白藜芦醇160,80,40,20 μg.L-1干预,CCK-8法检测细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bax表达.结果 与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高LPS诱导的HUVEC细胞存活率,降低HUVEC细胞凋亡率,降低Bax蛋白表达,有统计学差异(P＜0.05).结论 白藜芦醇对LPS致HUVEC细胞凋亡有保护效应,其效应可能与抑制Bax表达有关.
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白藜芦醇对LPS诱导HUVEC细胞线粒体跨膜电位影响研究
目的:探讨白藜芦醇对LPS刺激HUVEC细胞活性及线粒体跨膜电位影响.方法:体外培养HUVEC,随机分为LPS组、阴性组、白藜芦醇160、80、40、20 μg·l-1剂量组.其中,LPS组与白藜芦醇各组分别以1 μg·ml-1 LPS刺激细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力,荧光显微镜下观察罗丹明染色后细胞线粒体跨膜电位.结果:白藜芦醇各组均能提高LPS诱导的HUVEC细胞存活率,提高细胞线粒体跨膜电位,与模型组比较有统计学差异(P＜0.05).结论:白藜芦醇能提高LPS刺激HU-VEC细胞活性,提高细胞线粒体跨膜电位.
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脂多糖致HUVEC细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤影响
目的:探讨不同浓度脂多糖致HUVEC细胞凋亡和线粒体跨膜电位损伤相关性.方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞株 (HUVEC),先将脂多糖(LPS)分为100、10、1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5 μg·ml-18个浓度,刺激0.5、1、2、6、12、24 h后用CCK-8法观察细胞增殖影响进行初筛,之后选择脂多糖(LPS)分为100、10、1、10-1、10-2 μg·ml-15个浓度刺激HUVEC细胞株12h,AnneximV/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察Hochest33342/PI双染后细胞形态,罗丹明染色后荧光显微镜检测细胞线粒体跨膜电位变化.结果:同阴性对照组比较,LPS浓度≥10-2μg·ml-1刺激12、24 h均可引起细胞活力明显下降(P＜0.05),其余浓度引起HUVEC细胞活力下降时间不等.LPS致细胞凋亡率随浓度增加而增加,分别为67.2％、43.5％、23.5％、17.3％、10.6％,呈剂量依赖性;Hochest33342/PI双染显示10-1μg·ml-1以上浓度组HUVEC即出现核浓缩和凋亡小体,甚至有少量死亡细胞;10-1μg·ml-1以上浓度组细胞荧光较强,线粒体跨膜电位降低.结论:10-1 μg·ml 1以上浓度LPS刺激12h可致HUVEC细胞凋亡,线粒体跨膜电位下降;LPS10-1μg·ml-1刺激HUVEC 12 h即可致理想的细胞凋亡模型.
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LPS诱导HUVEC细胞凋亡适浓度与时间选择
目的:探讨脂多糖诱导HUVEC细胞凋亡的适浓度和时间.方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞株(HUVEC),将脂多糖(LPS)分为100、10、1、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5 μg·ml-18个浓度,分别刺激0.5、1、2、6、12、24 h后,采用CCK-8法观察细胞活力,荧光显微镜观察Hochest33342/PI双染后细胞形态.结果:同阴性对照组比较,药物浓度≥10-2 μg·ml-1刺激24 h均可引起细胞活力明显下降(P＜0.05).100μg·ml-1刺激1h,10μg·ml-1与1μg·ml-1刺激6h可引起HUVEC细胞活力下降,但12 h与24 h HUVEC细胞活力下降更明显(P＜0.05),10-1 μg·ml-1刺激12h可引起HUVEC细胞活力下降(P＜0.05).Hochest33342/PI双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象.结论:LPS刺激后引起HUVEC细胞活力下降呈时间与剂量依赖性,综合时间与剂量考虑,10-1μg·ml-1刺激12 h或24 h与10-2 μg·ml-1刺激24 h可致理想的HUVEC细胞凋亡模型.
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Aβ1-42诱导HUVEC细胞凋亡适浓度与时间选择
目的:探讨β样淀粉肽1-42(Aβ1-42)诱导人脐静脉血管内皮细胞株(HUVEC)细胞凋亡的适浓度和时间.方法:体外培养HUVEC,将Aβ1-42分为5× 10-4、5× 10-3、5×10-2、5× 10-1、5、5×10、5×102 μmol/L7个浓度,分别刺激0.5、2、6、12、24、48h后,采用CCK-8法观察细胞活力,荧光显微镜观察Hochest33342/PI双染后细胞形态.结果:同阴性组比较,Aβ1-42浓度≥5 μmol/L刺激48h均可引起细胞活力明显下降(P＜0.05).5×10,5×102 μmol/L刺激24h可引起HUVEC细胞活力下降,但48h HUVEC细胞活力下降更明显(P＜ 0.05).Hochest33342/PI双染可见明显核浓缩和凋亡小体的产生,甚至出现死亡现象.结论:Aβ1-42刺激后引起HUVEC细胞活力下降呈时间与剂量依赖性,综合时间与剂量考虑,5×10 μmol/L刺激24h可致理想的HUVEC细胞凋亡模型.
