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基于共培养技术的肿瘤微血管细胞模型的建立
目的建立可研究肿瘤微血管的分子学特性及结构特性的细胞模型,应用于药物筛选及靶向药物输送的研究.方法通过TRANSWELL共培养肿瘤细胞MCF-7和内皮细胞HUVEC的方法,建立肿瘤微血管细胞模型,检测了该模型下的细胞形态、结构、及通透性的变化.结果在肿瘤细胞共生条件下的内皮细胞层结构疏松,微环境呈明显酸性,而且细胞间隙增大,对100纳米左右粒子的通透性有显著提高.结论这一细胞模型的建立将有助于肿瘤血管的分子、结构特性以及相关药物的筛选和输送研究.
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双效逆转录载体的构建和受控自杀基因在乳腺癌细胞中表达的研究
目的构建含有Tet-On基因调节系统及自杀基因HSVtk的重组逆病毒载体,研究其在乳腺癌细胞中HSVtk基因的受控表达.方法用PCR方法扩增Tet-On基因,将其插入pRevTRE/HSVtk,形成重组载体pRevTRE/HSVtk/Tet-On.用脂质体介导法将pRevTRE/HSVtk/Tet-On导入乳腺癌细胞株(MCF-7).经过Hygromycin B筛选建立了一株稳定的受四环素衍生物强力霉素(Doxcycline,Dox)调控表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF/TRE/HSVtk/Tet-On.用RT-PCR的方法检测不同Dox浓度下HSVtk基因的表达,以MTT法检测不同Dox浓度下Ganciclovir(GCV)对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果成功构建了pRevTRE/HSVtk/Tet-On逆病毒载体.筛选出MCF/TRE/HSVtk/Tet-On细胞株,该细胞能在Dox的诱导下表达HSVtk基因并被GCV杀伤.结论HSVtk基因产物可以将无毒性的Ganciclovir(GCV)转变成一种有毒的代谢产物,杀死乳腺癌细胞.而该基因的表达受到Tet-On调控,由强力霉素调节HSVtk基因表达.
