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麻黄附子甘草汤配伍过程中炮附子生物碱成分的变化研究
利用电喷雾串联质谱方法(ESI-MS/MSn)和内标法分析麻黄附子甘草汤方剂中二萜类生物碱种类和含量的变化,通过拆方研究了麻黄、甘草对附子生物碱的影响规律,揭示了麻黄附子甘草汤的配伍内涵.研究表明,麻黄、甘草单独与炮附子配伍时能够通过化学和物理作用减少热解型单酯型生物碱的含量,并生成脂型生物碱,但方剂组合后有效成分热解型单酯型生物碱的含量增加.结合初步药效学实验表明,热解型单酯型生物碱是具有明显的抗炎作用,说明炮附子在复方中发挥抗炎作用的主要成分可能为热解型单酯型生物碱,同时复方的整体配伍利于有效成分的转化.
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附子与半夏不同炮制品种配伍应用的ESI-MSn研究
采用电喷雾质谱方法(ESI-MS)分析附子与半夏不同炮制品配伍前后生物碱在种类和含量方面的变化.方法 利用电喷雾质谱技术,分别对生附子、生附子加生半夏、姜半夏、清半夏、法半夏共煎液中乌头类生物碱进行系统考察.结果 与生附子相比,双酯型生物碱在附子加清半夏、姜半夏、生半夏共煎液中含量增高,附子加法半夏共煎液中的双脂型生物碱含量降低.结论 附子与姜半夏配伍的解毒机制是使毒性较大的双酯型生物碱转化为毒性小的单脂型生物碱；与清半夏、姜半夏、生半夏配伍的毒性增大的原因是其具有抑制附子中生物碱类成分的水解或热解反应的作用.
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HPLC-ESI-MS-MS鉴定马钱子中4类生物碱成分
目的:分析鉴定马钱子中的生物碱类成分.方法:采用高效液相色谱-电喷雾离子化串联质谱联用技术(HPLC-ESI-MS-MS)对4类生物碱的裂解规律进行研究,并据此推断马钱子提取物中的生物碱结构.结果:4类生物碱结构上的不同导致它们在裂解方式上存在较大差异；根据这些特征性的裂解方式,结合保留时间、质荷比以及多级串联质谱数据,共鉴定了18个生物碱成分,其中士的宁型8个,伪型2个,氮氧化物型5个,氮甲基型3个.结论:该研究为马钱子的成分分析与质量控制提供了一种快速、有效的方法.
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附子及其炮制品中生物碱类成分的ESI-MSn研究
目的与方法:采用电喷雾质谱方法(ESI-MS)分析附子炮制前后生物碱在种类和含量方面的变化.结果与结论:附子中的生物碱类成分在电喷雾质谱条件下可形成结构相似质子化分子,因而具有相似电离能力,利用离子峰的相对丰度可以近似地反映同类生物碱的相对含量的特点,通过添加结构相似的内标化合物,对附子及其炮制品的生物碱类成分进行比较,找出其变化规律,揭示不同炮制方法对附子减毒作用的机制.
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蒙药草乌药效组分的电喷雾质谱研究
目的:分析传统蒙药草乌的药效组分.方法:利用电喷雾串联质谱(ESI-MS)对蒙药草乌的水煎煮液进行了直接分析.结果:草乌水煎煮液中含有单酯型、双酯型和脂类等共3种类型生物碱.结论:利用电喷雾质谱技术,可以对蒙药草乌药效组分作出快速分析,方法简便,直观,用样量少.
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草乌叶及其煎煮液中生物碱类药效组分的电喷雾串联质谱研究
目的:对草乌叶及其煎煮液中的乌头碱类药效组分进行定性分析,说明煎煮前后化学成分发生的变化.方法:电喷雾串联质谱分析法.结果:煎煮后草乌叶中的双酯型生物碱和三酯型生物碱均发生了水解.前者水解产物为苯甲酰乌头原碱和乌头原碱类生物碱;后者水解产物为3-乙酰乌头原碱类生物碱.结论:该法简便、快速、灵敏、特异性强,为草乌叶及复方制剂煎煮液中的生物碱类药效组分的分析提供了新方法.
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微生物抗菌肽的电喷雾串联质谱分子结构解析
目的:以微生物抗菌肽为研究对象,利用电喷雾串联质谱对其分子结构进行解析.方法:首先通过全扫描模式,得到主要成分的相对分子质量为1 436.76.然后选择主要成分m/z718.38(双电荷离子)进行串联质谱测定.结果:相对分子质量为1 436.76的化合物结构为β-OH-FA-TEAPQYIYNE(该肽的脂肪链为羟基14碳脂肪酸),属于Fengycin家族(families).结论:本研究结果表明,电喷雾串联质谱适用于分析微生物抗菌肽类具有相似结构的同系物,是测定此类化合物相对分子质量及鉴定其结构的有效工具.
关键词： 微生物抗菌肽 生物安全 电喷雾串联质谱 Fengycin家族 -
草乌花及其煎煮液中二萜生物碱的电喷雾串联质谱研究
目的对草乌花及其煎煮液中的二萜生物碱进行定性分析,说明煎煮前后化学成分发生的变化. 方法用注射泵自动进样,电喷雾离子阱串联质谱直接分析草乌花及其煎煮液中生物碱混合物.结果在生草乌花中发现3个新生物碱,草乌花煎煮后其中的双酯型生物碱和三酯型生物碱都发生水解,前者水解为苯甲酰乌头原碱和乌头原碱类生物碱,后者水解为3-乙酰-乌头原碱类生物碱.结论该法简便、快速、灵敏、特异性强,为乌头属植物煎煮液中的生物碱分析提供了新途径.
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6种罕见核苷糖电喷雾质谱裂解规律的初步研究
本文在负离子模式下,应用电喷雾电离多级串联质谱技术对6种罕见胸苷二磷酸单糖的裂解规律进行了初步研究.结果表明:二级串联质谱中观察到6种罕见胸苷二磷酸单糖的高丰度碎片离子源于磷酸二酯键部分的裂解,出现一系列特征的m/z 321、383和401碎片离子,对应[TDP-H]-及该碎片离子分别失去水分子和磷酸基得到的碎片离子;罕见糖环上4位取代基的改变显著影响两个重要特征碎片离子[glycosyl-1”-PO3]-和[glycosyl-1”-P2O6]-的稳定性.
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高效液相色谱-质谱联用分析法测定血清全氟辛烷磺酸
目的 全氟辛烷磺酸(perfluorooctane sulfonate,PFOS)是全氟表面活性剂,被广泛用于纺织、皮革、涂料、农药等生产中,具有较高的生物蓄积性和多种毒性,是目前难降解的持久性环境有机污染物之一,由其造成的污染已经逐渐成为全球性的环境问题.建立高效液相色谱-质谱联用分析方法 对于检测环境和生物体内的PFOS具有实际意义.方法 样品经固相萃取、液相色谱分离后进行电喷雾质谱分析,在多反应监控(multiple reaction monitoring,MRM)模式下使用内标法测定PFOS.结果 PFOS在质量浓度为0 μg/L～120 μg/L时有良好的线性关系,线性相关系数r=0.991 039.由标准曲线计算PFOS的回收率为76.88%.结论 用高效液相色谱-质谱联用内标法定量分析血清中PFOS的浓度灵敏度高,分析速度快,适于血清PFOS含量的测定.
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蒙药草乌芽中药效组分的电喷雾串联质谱分析
目的 分析蒙药草乌芽的药效组分.方法 利用电喷雾串联质谱技术对蒙药草乌芽的乙醇提取液进行了直接分析鉴定.结果 ESI-MS可以给出相对分子质量信息,ESI-MSn方法 则可以从复杂体系中获得结构信息,在草乌芽中发现乌头碱、中乌头碱、次乌头碱及它们的水解产物和脂类生物碱等15种二萜类生物碱.结论 草乌芽中的药效组分二萜类生物碱为首次报道,这些生物碱的结构相似,在电喷雾串联质谱中碎裂方式相同,因此根据电喷雾串联质谱结果 确定了这些生物碱的结构.
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草乌花煎煮过程中三酯型乌头生物碱的酯交换反应
目的 研究草乌花煎煮过程中脂类生物碱的变化.方法 利用电喷雾离子阱质谱分析,比较草乌花乙醇提取液、草乌花单煎液和草乌花煎煮后残渣中的生物碱.结果 在草乌花单煎液中易溶于水的别那宁质量分数显著提高,未检测到脂肪酸酯型生物碱,三酯型脂类生物碱成为煎煮过草乌花中的主要生物碱.结论 在草乌花煎煮过程中,双酯型和三酯型乌头生物碱除发生水解反应外,还发生酯交换反应生成双酯型和三酯型脂类生物碱.三酯型乌头生物碱的C8位乙酰基被各种长链脂肪酰基取代的酯交换反应为首次报道.
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四逆汤中脂类生物碱来源于酯交换反应的研究
目的研究附子中脂类生物碱(脂碱)的溶解性,确定四逆汤中脂碱的来源.方法利用电喷雾离子阱质谱分析比较生附子、四逆汤、煎煮后生附子药渣、生附子与半夏共煎液中的生物碱.结果在四逆汤中检测到少量脂碱,在生附子与半夏共煎液中未检测到脂碱,脂碱成为煎煮过生附子中的主要生物碱.结论脂碱在加热条件下也不溶于水,在四逆汤中检测到的脂碱来源于双酯型生物碱的酯交换反应.
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重度子痫前期患者血清差异蛋白质组学研究
目的:利用蛋白质组学技术寻找敏感性高、特异性好的血清标志物作为重度子痫前期的诊断依据.方法:采用双向凝胶电泳与质谱联用的方法筛选子痫前期重度患者和健康孕妇血清中的差异蛋白质.2-DE分离两组血清蛋白质,图像分析软件识别差异蛋白质点,电喷雾串联质谱( ESI-Q-TOF MS/MS)鉴定差异蛋白质,Western blot检测差异蛋白质—P物质在两组血清中的表达情况.结果:采用双向凝胶电泳与质谱识别了8个差异蛋白质点,鉴定出3种差异蛋白:凝血酶、P物质及白蛋白.Western blot结果显示,子痫前期重度患者血清中P物质的表达水平明显低于健康孕妇.结论:凝血酶、P物质及白蛋白可能参与了重度子痫前期的发生、发展过程,检测它们的水平对子痫前期重度的诊断可能具有一定的参考价值.
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不同临产状态的子宫平滑肌组织中与NF-κB相互作用差异蛋白质的分析
目的:分析不同临产状态子宫下段平滑肌组织中与NF-κB相互作用的差异蛋白质,为分娩机制的研究提供新的实验及理论依据.方法:分别采集足月未临产、自然临产和前列腺素E2栓诱导临产(药物临产组)的孕妇子宫下段平滑肌组织.Western印迹验证NF-κB P65表达;联合免疫共沉淀、SDS-PAGE、电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)和蛋白质生物信息分析等技术,分析不同临产状态子宫平滑肌组织中与NF-1cB相互作用的差异蛋白质,并利用Western印迹进行验证.结果:人类临产前后子宫下段平滑肌组织中NF-κB表达均为阳性,与NF-κB P65相互作用的差异蛋白,自然临产前后鉴定出9个,药物临产前后鉴定出5个,其中不同临产状态共同差异表达的蛋白3个,分别为热休克蛋白70(heat shock 70 kD protein,HSP70)、膜联蛋白A6和结蛋白,经Western印迹验证与蛋白表达相符.这些差异蛋白分别属于分子伴侣、信号转导、细胞骨架和能量代谢相关的蛋白质.结论:子宫平滑肌细胞中NF-κB通过与分子伴侣、信号传导、细胞骨架和能量代谢等相关的多种蛋白质相互作用,参与分娩的启动或调节.
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HepG2细胞中PIG11相互作用蛋白质的初步分离与鉴定
目的 探讨人肝细胞癌细胞系(HepG2)并初步鉴定候选肝癌抑癌蛋白肿瘤蛋白P53下游靶基因11号(PIG11)相互作用蛋白,确定PIG11的作用方式. 方法 课题组前期利用质粒pLXSN构建逆转录病毒载体,转染细胞后建立起PIG11高表达HepG2细胞株.将HepG2分为HepG2对照组,空载体HepG2组和PIG11高表达HepG2组分别培养,流式细胞术检测细胞凋亡.采用免疫共沉淀富集HepG2细胞中PIG11结合蛋白,切取PIG11结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱得到肽序列标签,通过数据库查询蛋白. 结果 PIG11蛋白高表达组凋亡率显著高于对照组 (P<0.01). 串联质谱后数据库查询鉴定出11个蛋白,分别是热休克蛋白家族中的HSP60,KH型剪接调节蛋白(KSRP)、脑酸溶性蛋白BASP1、蛋白水解诱导因子(PIF/DCD)、Y染色体RNA结合蛋白、碳酸酐酶、白蛋白以及骨架蛋白中的波形蛋白、α、β-微管蛋白、肌动蛋白. 结论 PIG11蛋白高表达对HepG2具有诱导凋亡作用;初步鉴定出11个PIG11结合蛋白,为进一步阐明PIG11蛋白的作用机制提供线索.
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电喷雾串联质谱法鉴定黄芩药材的化学成分
目的:采用电喷雾串联质谱(ESI-MS/MS)技术,对黄芩药材中的化学成分进行快速分析.方法:以甲醇为溶剂对黄芩药材进行超声提取,提取液经ESI-MS/MS分析,根据质谱所提供的一级质谱和二级质谱裂解碎片信息对黄芩提取液的化学成分进行分析鉴定和推测.结果:通过对照品与化合物的二级碎片进行分析,并结合文献报道共鉴定和推测了12个化合物,其中,4个通过对照品得到了确证.结论:该研究能够快速、灵敏地分析黄芩药材的化学成分,为完善黄芩的质量标准,阐明药效物质基础提供依据.
