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双龙方有效成分诱导干细胞分化过程中差异表达基因的筛选和聚类分析
目的:利用基因芯片筛选双龙方主要成分(人参皂苷Rb1,丹参酚酸B)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化过程中的差异表达基因,并对差异表达基因进行聚类分析,研究双龙方主要有效成分对大鼠MSCs增殖及分化的影响.方法:用含5705条大鼠基因的博奥大鼠全基因组Oligo芯片,以不同给药情况、不同时间点的细胞总RNA制备的探针杂交芯片,用LuxScan 10KA双通道激光扫描仪(CapitalBio公司)进行扫描,筛选MSCs变化过程中的差异表达基因并进行生物信息分析,hierarchical聚类提取差异表达的特征基因.结果:在MSCs的分化过程中,筛选出128条(2.24%)差异表达基因,经分析发现它们与能量代谢,信号传导等多类基因密切相关,对样本进行聚类发现MSCs在20-30天之间发生了显著的改变.结论:基因芯片是研究中药作用机理的有效平台,双龙方主要成分可诱导MSCs向心肌样细胞分化.
关键词： 双龙方 基因芯片 差异基因表达 hierarchical聚类分析 -
双龙方对大鼠肠系膜上动脉环舒缩功能的影响及机制探究
目的:研究双龙方对大鼠离体肠系膜动脉血管舒缩功能的影响,探讨其可能存在的机制.方法:应用离体微血管动力描记技术和离子通道特异性阻断方法,考察双龙方对大鼠肠系膜动脉环直接舒张作用,及对受体依赖型、电压依赖型钙通道功能的影响,和钾离子通道抑制剂对双龙方舒张血管作用的影响.结果:双龙方可舒张大鼠肠系膜上动脉,32、16、8g生药/L组与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01).双龙方8g生药/L组5-HT大收缩达到KCl预收缩高度(Emax),与空白对照组比较显著降低(P＜0.01).双龙方8、4、2g生药/L浓度组中,NA的Emax较空白对照组显著下降(P＜0.01,P＜0.05).双龙方8、4g生药/L组KCl Emax较空白对照组均显著降低(P＜0.01).双龙方8g生药/L组CaCl2 E max较空白对照组显著降低(P＜0.01).4种类型钾离子通道抑制剂4-氨基吡啶、氯化钡、格列苯脲、四乙胺干预后,双龙方20、10g生药/L组血管的舒张幅度与空白对照组比较,无显著性差异.结论:双龙方有显著的扩张血管作用,其舒张血管的作用机制与抑制电压依赖型钙离子通道功能及5-羟色胺、去甲肾上腺素受体有关.
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双龙方配伍配比对大鼠急性心肌缺血模型的影响
目的:验证中药双龙方配伍的合理性和科学性.方法:通过盐酸异丙肾上腺素造成大鼠的急性心肌缺血模型,从生理层面(心电图)、病理层面(心肌梗死面积)和细胞分子层面(细胞酶学指标CK,LDH,SOD,MDA含量变化),观察单方以及双龙方不同配比预防给药对心肌缺血的拮抗作用.结果:各给药组均能改善心电图缺血指标、降低血清中CK,LDH,SOD,MDA含量及减少心肌梗死面积,但双龙方配伍高剂量组比其他组具有更好的效果,其中以3:7高剂量组效果优.结论:药效学筛选结果表明,按照双龙方配比3:7高剂量对防治大鼠急性心肌梗死效果优.
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双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响
目的:研究中药双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响.方法:利用心导管技术建立中国小型猪冠状动脉栓塞心肌梗死模型,建立经心导管冠状动脉内骨髓单个核细胞移植的新方法,通过心电图、定量组织学、超声心动图、心肌酶及生化检查、心肌小血管密度、梗死区内骨髓单个核细胞观察等综合评价双龙方、自体骨髓单个核细胞经心导管移植及两者合用的疗效.结果:双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植可减小心肌梗死范围,超声心动图检查显示心功能明显改善,并可增加心肌梗死区小血管密度,对心肌酶及生化指标亦有不同程度改善作用.自体骨髓单个核细胞移植及合用双龙方后均有助于心肌侧枝循环的建立,心肌供血明显改善.自体骨髓单个核细胞可在移植区内存活,并部分分化为心肌细胞及心肌小血管,补充了心肌细胞的数量.结论:双龙方与自体骨髓单个核细胞移植对中国小型猪心肌梗死有明确的治疗作用.
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双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植治疗冠心病的基础研究
冠心病是危害人类健康的重大疾病,近年药物、手术及介入疗法已取得重大进展,但只能恢复再灌注,不能修复或逆转已坏死的心肌细胞.心肌梗死后存活心肌细胞数量下降,而致心力衰竭,成为心肌梗死死亡的重要原因.提高梗死区及周边区心肌细胞数量已成为一个重要研究课题.自2001年开始,我们进行了中药与自体骨髓单个核细胞经心导管输入冠状动脉、移植于心脏,治疗冠心病的基础研究,以考察双龙方与自体骨髓单个核细胞对中国小型猪心肌梗死的影响.
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应用基因表达谱芯片研究中药复方对心肌梗死的药效机制
目的:麝香保心丸、双龙方等具有益气活血的中药复方均可有效治疗心肌梗死,该文以麝香保心丸、双龙方为研究对象,从基因表达的角度探讨该类中药复方治疗心肌梗死的药效机制.方法:建立大鼠左冠状动脉结扎心肌梗死模型,药物干预7d后取心肌梗死区边缘缺血组织,建立基因表达谱,筛选治疗前后的差异表达基因,进行生物信息学分析,同时采用RT-PCR对芯片数据进行验证.结果:两种益气活血方干预后,大鼠心肌组织的基因表达谱发生改变,筛选得到224个共有的差异表达基因,涉及能量代谢相关的甘油三磷酸脱氢酶活性、糖酵解/糖质新生等通路.结论:心肌梗死是一种多基因表达异常的心血管疾病,益气活血中药在发挥其治疗作用时,对224个共有差异表达基因具有相似调节作用,且主要通过改善大鼠心肌能量代谢异常,达到治疗心肌梗死的作用.
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双龙方对心肌缺氧复氧损伤的保护作用及活性成分筛选研究
目的 研究中药双龙方及其组分人参总皂苷、丹参总酚酸对缺氧复氧心肌损伤的保护作用,并测定其活性成分.方法 建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,采用MTT法检测给药各组细胞的存活率；同时采用HPLCMS联用对双龙方进入细胞的成分进行鉴定.结果 模型组细胞存活率明显降低,仅为8.26％,双龙方有效增加细胞存活率,为70.41％,且在各实验组中效果好；液质鉴定其活性成分主要是:Re、Rg1、Rf、Rb1和Rd.结论 双龙方对缺氧复氧引发的心肌细胞损伤有显著的保护作用,其机制可能与清除自由基、抑制心肌细胞钙离子超载有关.
关键词： 双龙方 心肌细胞缺氧/复氧模型 HPLC-MS 活性成分 -
基于UPLC/TOF-MS的双龙方大鼠体内药代动力学研究
目的 研究双龙方(人参、丹参)在大鼠体内的药代动力学规律.方法 利用UPLC/TOF-MS进行血清样品分析,考察了双龙方中人参皂苷、丹参酚酸两大类物质在大鼠体内的药代动力学参数,主要包括房室模型,小分布容积、曲线下面积、达峰时间和峰浓度.结果 除Rb2和M-Rb1符合二室模型外,双龙方中其它人参皂苷和丹参酚酸类化合物均满足一室模型;测定了双龙方中丹参素、丹参酚酸G、丹参酚酸K、丹参酚酸M、人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Ra、M-Rb1、M-Rd的小分布容积、曲线下面积、达峰时间、峰浓度等药代动力学参数,并绘制了药时曲线.结论 明确了双龙方中人参皂苷、丹参酚酸两大类物质在大鼠体内的生物转化规律;丹参酚酸与人参皂苷协同作用,有助于维持药物的有效浓度,延长其有效作用时间;临床上使用双龙方时,每隔8h服用一次即可维持所需药效浓度.
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双龙方对大鼠心肌缺血/再灌注后无复流影响的研究
目的 探索双龙方对大鼠心肌缺血/再灌注后无复流的影响.方法 将200只大鼠随机分为5组,每组40只:模型组、假手术组、双龙方5 g生药/kg组、双龙方2.5 g生药/kg组、双龙方1.25 g生药/kg组.各组大鼠在造模前连续灌胃5d,模型组和假手术组灌胃同体积蒸馏水.给药结束后,对大鼠冠状动脉左前降支进行结扎,假手术动物只穿线不结扎.结扎后4h,实施再灌注.再灌注4h后,采用小动物高分辨率超声影像系统对各组大鼠行超声心动图检查和心肌声学造影;超声检查结束后,于腹主动脉取血,分离血清,测定血清cTnT、CRP、CK、LDH水平;大鼠取血完毕后,取出心脏,切片,分别用硫磺素S和硝基四氮唑蓝(N-BT)染色评估心肌无复流面积和梗死面积.结果 与模型组比较,双龙方组的心肌无复流面积和梗死面积均明显减小(P<0.01或P<0.05);心脏B超显示心功能指标明显改善,左心室前壁缺血区厚度明显增加,收缩末期左心室内径和容积明显降低,短轴缩短率、射血分数和每搏输出量明显提高(P<0.01或P<0.05);心肌声学造影显示心肌血液灌注明显改善,左心室前壁心肌组织的微血管密度、血流速和血液灌注量明显增加(P<0.01或P<0.05);心肌损伤相关的血液学指标未见明显改善,血清cTnT、CRP、CK、LDH水平未见明显变化.结论 双龙方可以明显减小大鼠的心肌梗死面积和无复流面积,可明显对抗心肌缺血/再灌注后的无复流,改善受损心肌组织的血液灌注,改善心功能,抑制心肌损伤.
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古稀院士壮心不已--访中国工程院院士李连达
2004年,对于他来说,无疑是收获丰厚的一年.这一年,他被增选为中国工程院院士;他作为主要负责人之一参与研究的课题"血瘀证与活血化瘀研究"获2003年度国家科技进步奖一等奖;他另一神来之笔--"双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植治疗冠心病的基础研究"课题荣获2003年中华中医药学会科学技术奖一等奖.他,就是中国中医研究院西苑医院首席研究员李连达.
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双龙方对大鼠心肌梗塞的治疗作用
目的观察双龙方对大鼠实验性心肌梗塞的治疗作用.方法采用冠状动脉结扎心肌梗塞模型,通过心肌梗塞面积的定量组织学测定、血管活性物质测定、心肌小血管密度等指标观测,评价给予双龙方14d后的双龙方治疗作用.结果双龙方给药14 d后,心肌梗塞范围减小,6-keto-PGF1α/TXB2比值提高;心肌小血管的密度增加.结论双龙方对心肌梗塞有明确的治疗作用.
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双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的影响
目的：评价双龙保心方对大鼠急性心肌梗死的治疗作用。方法冠状动脉结扎法制备大鼠急性心肌梗死模型；造模后10 min 十二指肠给药；造模后4 h，取血测定血清中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平；取出心脏，切片，氯化硝基四氮唑蓝（N - BT）染色，测定心肌梗死面积。结果所有给药大鼠组的血清 CK，LDH，SOD，MDA 水平与模型组比较均无显著性差异。与模型组比较，双龙保心方高、中剂量组的心肌梗死面积显著降低（ P ﹤0.05）。结论双龙保心方对大鼠急性心肌梗死有显著保护作用。
